La prise en charge de l'hépatite B

I.2.1.1.1. Principe de la technique

Les méthodes CMIA permettent d'identifier les antigènes et les anticorps associés aux infections hépatiques virales. Dans la réaction finale, les conjugués antigène-anticorps liés marqués àl'acridinium sont utilisés pour générer un signal chimiluminescents. Le principe de la chimiluminescence est le marquage des anticorps par des composés chimiluminescents, capables, en présence du carboxamide d'acridinium, de produire de la lumière proportionnellement à la concentration en antigène (Figure 5).

Figure 5:Principe de test Immunologique par Chimiluminescence

Source : ( www.menarinidiag.co.uk).

En pratique, des anticorps monoclonaux, dirigés contre l'Ag HBs, sont fixés sur des microparticules magnétiques, et mis en incubation avec le sérum du patient. Des anticorps monoclonaux dirigés contre l'Ag HBs marqués au carboxamide d'acridinium sont rajoutés au milieu réactionnel. Les puits de la microplaque sont exposés à un champ magnétique, qui sépare les microparticules des anticorps. La solution est ensuite alcalinisée, ce qui induit l'émission de lumière par le composé chimiluminescents. La lumière mesurée est proportionnelle à la concentration de l'Ag HBs dans la solution.

I.2.1.1.2. Résultats et interprétation

Le test calcule le résultat sur la base du rapport E/VS.

E/VS = URL (Unité Réduite de Lumière) de l'Echantillon / Valeur URL Seuil.

- Calcul de la valeur seuil :

- Valeur URL moyenne du calibrateur 1 x 0,074 = Valeur URL seuil

Les échantillons dont la valeur E/VS est inférieure à 1,00 sont considérés comme négatifs.

Les échantillons dont la valeur E/VS est supérieure ou égale à 1,00 sont considérés comme réactifs et doivent être réanalysés en double.

Les échantillons réactifs de façon répétable pour l'Ag HBs dans notre étude sont analysés par le test immunoenzymatique de type ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) de 3 ième générations et test de neutralisation. (33)

II.2.1.2. Test ELISA

La technique ELISA est réalisé à l'aide du Kit « Murex HBs Ag version 3 », qui est d'une grande sensibilité et d'une grande spécificité.(33)

II.2.1.2.1. Principe de la technique

La technique ELISA utilisé se fait par le Kit « Murex HBs Ag version 3 » (Abbott Diagnostics). Dans ce test l'échantillon est préincubé dans des cupules recouvertes d'un mélange d'anticorps monoclonaux de souris spécifiques de différents épitopes du déterminant `'a'' de l'AgHBs. Des anticorps de chèvre purifiés dirigés contre l'AgHBs conjugués à la peroxydase de raifort sont alors ajoutés à l'échantillon contenu dans la cupule. Lors des deux étapes d'incubation, tout AgHBs présent dans l'échantillon, forme un complexe anticorps-antigène-anticorps-enzyme dans la cupule. (33)

S'il n'y a pas d'AgHBs, le conjugué ne sera pas lié. Une solution contenant le substrat TMB (3,3', 5,5'-tétraméthylbenzidine) et de l'eau oxygénée est ajoutée dans les cupules.

Les cupules qui contiennent de l'AgHBs, et donc du conjugué lié, développeront une couleur violette qui vire à l'orange lorsque la réaction enzymatique est stoppée par de l'acide sulfurique.(33)

L'intensité de la coloration est déterminée par spectrophotométrie et elle est directement proportionnelle à la quantité d'AgHBs présent dans l'échantillon.

Figure 6:principe de test ELISA

Source : (Fatima B, 2016)