Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans le laboratoire de l'hopital de district de Dschang

I- LE PALUDISME

Cette maladie est transmise par un parasite appelé Plasmodium dont l'agent vecteur est l'anophèle femelle. Ce parasite existe sur plusieurs formes mais la forme la plus infestante est Falciparum.

Au laboratoire de l'hôpital de district de Dschang, deux méthodes sont employées pour le diagnostic de cette maladie.

A- LA GOUTTE EPAISSE

1- Matériel et réactifs

Pour réaliser la goutte épaisse nous avons besoin de :

- Vaccinostyle - Lames

- Coton - Alcool.

- Giemsa rapide solution colorant dilué au 1/10^ème 1ml de Giemsa + 9ml d'eau distillée suffisante pour 4 lames ou bien 3 gouttes de Giemsa + 2 ml d'eau distillée, cette quantité suffit pour une lame.

2- Prélèvement

Le sang est prélevé suivant la procédure ci-après :

- choisir le 3^ème ou le 4^ème doigt du malade,

- nettoyer le bout du doigt choisi avec un coton imbibé d'alcool,

- laisser sécher ou assécher avec un coton sec,

- faire une ponction sur la face latérale, du doigt avec un vaccinostyle stérile à usage unique,

- essuyer la première goutte de sang avec le coton sec,

- presser le doigt pour recueillir une autre goutte de sang qui sera étalée sur une lame en

faisant des cercles concentriques,

- laisser sécher à l'air.

Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans le laboratoire de l'hôpital de district

de Dschang.

3- Technique de coloration de la goutte épaisse

La coloration se fait de la manière suivante :

- placer les lames à colorer contenant la goutte de sang étalée sur deux baguettes,

- couvrir l'étalement avec du Giemsa dilué au 1/10^ème,

- laisser agir 10 minutes avec le Giemsa rapide ; 20 minutes avec le Giemsa lent,

- égoutter les lames à l'eau du robinet, laisser sécher, -examiner au microscope à l'objectif à immersion (100 X).

4- Résultats de l'examen

Une recherche positive montre les trophozoites (plasmodium) dont le noyau est coloré en rouge et le cytoplasme en bleu. Ce résultat s'exprime en nombre de trophozoites par leucocytes dans un champ visuel. L'absence du plasmodium témoigne l'absence du paludisme. Au microscope on peut observer la figure ci-dessous.

		Plasmodium

Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE Emmanuel Boris 27

Figure 5 : Plasmodium falciparum (goutte épaisse)

B- FROTTIS SANGUIN

1- Matériels et réactifs

La réalisation du frottis sanguin nécessite les matériels et réactifs suivants :

- Tube avec anticoagulant - Lames - Coton - Alcool

- L'eau distillée - Lamelle

- Solution de Giemsa diluée au 1/10^e

2- Mode opératoire

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de Dschang.

Il se fait avec le sang total prélevé dans un tube avec l'EDTA comme anticoagulant. - déposer une goutte de sang à une extrémité de la lame porte objet,

- tenir une lamelle au dessus de la goutte de telle sorte qu'elle forme un angle d'environ 60° avec la lame d'étalement,

- laisser diffuser le sang par capillarité sur les bords de la lame, tirer vers l'autre extrémité d'un coup en décollant progressivement de la lame,

- sécher en agitant, recouvrir la lame avec une solution de May-Grünwald et attendre 3 minutes, mettre autant de goutte d'eau distillée et attendre 3 minutes,

- égoutter la lame et la recouvrir avec une solution de Giemsa diluée au 1/10^e et laisser agir pendant 15 minutes, verser le colorant et sécher,

- observer à immersion au microscope avec l'objectif 100 (figure 6).

Les résultats ici se donnent en termes de « présence de parasites » et de « absence de parasites

».

Plasmodium falciparum

Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE Emmanuel Boris 28

Figure 6 : Plasmodium falciparum (frottis sanguin)