CHAPITRE II. MILIEU, MATERIEL ET METHODE
2.1. MILIEUX D'ETUDE
v Milieu de prélèvement des
échantillons
Notre étude relative à la variation de
l'activité enzymatique sérique des transaminases chez les
fumeurs, a été menée au village de Bakwa TSHIMUNA
situé au sud de la ville de Mbujimayi, dans le territoire de
LUPATAPATA.
Ce village est borné :
- Au nord par la commune de la Kanshi et la Polygone
MIBA ;
- Au sud par le village de Bena MPOYI ;
- A l'est par la Rivière LUBILANJI et ;
- A l'ouest par la Rivière KANSHI.
Il est subdivisé en 9 localités qui sont :
Bena TSHILUMBU, Bena MADIATU ; Bena MUKODI, Bena MUTEBA, Bena KASEYA, Bena
TSHIABEMBI, Bena TSHIMANGA, Bena TSHISHIMBI et Bena MPUMBUA. Il contient 7
écoles primaires, 4 écoles secondaires, aucune université
et aucun institut supérieur. La religion la plus
représentée dans ce village reste l'église de
réveil.
Ce village se trouve dans la zone de santé de
TSHISHIMBI. Il égorge 4 aires de santé à savoir : AS
TSHISHIMBI, MPUMBUA, Bakwa TSHIMUNA et C.N.M, puis un Hôpital
Général de Référence. Les maladies les plus
fréquentes dans ce village sont le paludisme, la fièvre typhoide,
la tuberculose et les infections sexuellement transmissibles. Sa population vit
grâce à l'exploitation artisanale de diamant, au petit commerce et
à l'agriculture.
v Milieu d'analyses
Les analyses biomédicales ont été
réalisées au Laboratoire de la Polyclinique BON BERGER,
situé aunuméro 4 de l'avenue KABEYA BANZA, au quartier MASANKA,
commune de DIULU, derrière la TMB Mbujimayi.
2.2. MATERIEL ET METHODE
2.2.1. Méthode et technique
2.2.1.1 Méthode
Pour réaliser le présent travail, nous avons
opté pour la méthode analytique.
2.2.1.2 Technique
Cette méthode ainsi choisie a été
appuyée par la technique expérimentale, laquelle a
consisté à faire le dosage des transaminases dans le sang des
fumeurs.
2.2.2. Matériels et réactifs
Nous avons utilisé les matériels et
réactifs suivants pour la réalisation de ce travail :
|
v Matériels
- Spectrophotomètre ;
- Cuvette et tubes à essai ;
- Centrifugeuse et bain-marie ;
- Micropipette réglable de 10-1000uL ;
- Minuterie ;
- Embouts et portoir ;
- Matériels de prélèvement (Gants
propres, seringue, ouate, désinfectant, garrot).
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v Réactifs
GPT
R1: TRIS pH 7,65 110 mmol/L
L-Aspartate 320 mmol/L
MDH (Malate déshydrogénase) : 800
U/L
LDH (lactate déshydrogénase) : 1200
U/L
R2: 2-Oxoglutarate : 85mmol/L
NADH : 1mmol/L.
GOT
R1 : Acide aspartique : tampon phosphate : 80
mmol/L et Ph 7,4 ;
L-aspartate : 200mmol/L
á-cétoglutamate : 12mmol/L
R2 : enzyme-coenzyme
NADH 0,18mmol/L
NADH=600UI/L.
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2.2.3. Echantillon
Notre échantillon d'étude est constitué
de fumeurs habitant le village de Bakwa TSHIMUNA. Sa taille s'élevait
à 25 fumeurs chez qui le prélèvement sanguin pour les
analyses biomédicales a été réalisé.
2.2.4. Technique d'échantillonnage
Pour constituer notre échantillon d'étude, nous
nous sommes servis de la technique d'échantillonnage non
probabiliste.
v Critères d'inclusion et
d'exclusion
- Sont inclus dans notre travail, les fumeurs habitant le
village de Bakwa TSHIMUNAet ayant accepté de nous livrer
l'échantillon de sang pour les analyses biomédicales.
- Sont exclus, les fumeurs ne répondant pas à ce
critère ci-dessus évoqué.
2.2.5. Type d'étude
Quant au type d'étude, nous avons mené une
étude descriptive et transversale portant sur la Variation de
l'activité enzymatique sérique des transaminases chez les
fumeurs.
2.2.5.1 Plan de collecte des
données
- Solliciter et obtenir l'autorisation de recherche
auprès des autorités de l'ISTM/Mbujimayi ;
- Solliciter et obtenir la permission auprès des
autorités rurales de Bakwa TSHIMUNApour les investigations dans leur
entité ;
- Collecte des données à l'aide d'un
questionnaire et prélèvement des échantillons de sang
dans des tubes propres et stériles;
- Analyse et traitement des données ainsi que leur
présentation dans les tableaux.
2.2.5.2 Plan d'analyse des données
La saisie, le traitement et l'analyse des données ont
été effectués avec les logiciels Word version 8 et Excel
2010, en utilisant les formules statistiques ci-après :
Avec:
- n : comme l'effectif relatif ;
- N: comme l'effectif total.
t : Test de Student ;
X : Moyenne ;
SX : Ecartype ;
n : Effectif relatif.
2.2.6. Paramètres d'étude
Pour la commodité dans la présentation des
résultats, nous avons retenu comme paramètres
d'étude :
ü L'âge ;
ü L'ancienneté ;
ü Les transaminases (GOT et GPT).
2.2.7. Description des techniques
d'analyse
A. Prélèvement des
échantillons
Les échantillons de sang ont été
prélevés dans des tubes à vacum et analysés le
même jour.
B. Analyses proprement-dites
1. Détermination des activités
enzymatique des transaminases
1.1. L'aspartateamino-transférase
(ASAT), anciennement dénommée Sérum
Glutamo-Oxaloacétate Transférase(SGOT).
A. Principe
Détermination cinétique de l'activité GOT
après la réaction de l'apoenzyme par le pyridoxal-5' phosphate
selon la réaction :
GOT
L-Aspartate + á-Oxoglutarate
L-glutamate + Oxaloacétate
MDH
Oxaloacétate + NADH + H+ L-malate +
NAD+
Tableau 1. Dosage du taux sérique de
GOT
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Réactifs
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R1
|
800 uL
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|
R2
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200 Ul
|
|
Echantillon
|
100 uL
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Mélanger, introduire dans l'appareil et mesurer la D.O
par minute pendant 3 minutes à la longueur d'onde de 340 nm et puis
interpréter le résultat en unité internationale par litre
(UI/L).
B. Valeurs usuelles dans le sérum
· Hommes : 14 - 50 U/l
· Femmes : 11 - 32 U/l
1.2. Alanine aminotransférase
(ALAT) anciennement appelée Transaminase glutamique
pyruvique (GPT).
A. Principe
Détermination cinétique de l'activité GPT
après la réaction de l'apoenzyme par le pyridoxal-5' phosphate
selon la réaction :
GPT
L-alanine + á-oxoglutarate Pyruvate +
glutamate
LDH
Pyruvate + NADH+ H+ Lactate+ NAD+
Tableau 2. Dosage du taux sérique de
GPT
|
REACTIFS
|
|
|
R1
|
800 uL
|
|
R2
|
200 UL
|
|
ECHANTILLON
|
100 uL
|
Mélanger, introduire dans l'appareil et mesurer la D.O
par minute pendant 3 minutes à la longueur d'onde de 340 nm et puis
interpréter le résultat en unité internationale par litre
(UI/L).
C. Valeurs usuelles dans le sérum
· Hommes : 11 - 60 U/l
· Femmes : 9 - 36 U/l (Biol. Clin ;
1978).
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