2.2.5.3.2 Intérêts cliniques
- Confirmer le diagnostic de l'immunité humoral en
particulier.
- Mise en évidence des Agammaglobulinémie (absence
de sécrétion des gammaglobulines) et hypo gamma
globulinémie (diminution de la sécrétion des
gammaglobulines).
- Diagnostic de l'hypogammaglobulinémie.
- Diagnostic de l'agammaglobulinémie.
- Diagnostic de gammapathie poluclonales et monoclonales.
2.2.5.3.3 Technique
A l'aide du Kit application super Z , on exécute une
application centrale de l'echantillon et on imprégne les sérums
qui seront appliqués immediatement sur la bande d'acetate de
cellulose.
- On trempe la bande d'acetate de cellulose dans la solution
tampon pendant 20 min.
- En paralléle on distribue dans les huits carités
du support du Kit application super Z , 10 ìL de sérum.
- On retire la bande et on la seche.
- On applique l'applicateur au dessus de la dusupport du Kit.
- Puis on retir doucement.
- On place la bande d'acetate de cellulose dans la chambre de
migration pendant 15 minute à 180 volts ( la bande est placée
vers le bas , de l'anode vers la cathode ) la migration se fait dans le sens -
+.
- On retire la bande apres 15 minutes.
On met par la suite la bande d'acetate de cellulose dans
:
- Un bac contenant le rouge ponceau pendant 6 min(etape de
coloration).
- Trois bains successifs d'acide acétique (5%) , 3 min
dans chaque bain ( etape de decoloration).
· On transparise la plaque dans la solution
méthanol - acide acétrique - solution
éclaircissante ,
en y mettant la bande d'acétate de cellulose pendant 5 à 10
min.
· On égoutte la bande en plaçant
verticallement dans un coin pendant 1 minute.
· On fait secher la bande dans l'etuve en prenant le soin
mettre l'acétate vers le haut pendant 10 min entre 50 °c et
60°c.
· On essuie parfaitement les deux faces de la plaque
à l'aide de papier - buvard. Cathode (-)
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Gamma Beta-2 Beta-1 Aplha-2 Alpha-1 Albumin
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Anode (+)
Sélénium (-) Sélénium(+)
Figure 2.6 Cliché présentant une bande
de dis protéinogrammes : Les fractions protéiques de bas vers le
haut : Albumine, á1, á2, â1, â2,
ã.
Dans le cas ou la bande est claire et nette , elle laisse
apparaitre les differentes fractions qui ont migrées.
L'intégration des piques a été
réalisée à l'aide du logiciel phoresis (Phoresis rel,
7.4.1, sebia, Parc technologique Leonard de Vinci CP 8010 Lisses, Every,
France).
Chaque pique électrphoretique a été
exprimé en pourcentage et en g/L de proteines totales
présentés dans le sérum.
2.2.5.3.4 Analyses statistiques
Le logiciel SPSS16.0 a été utilisé pour
toutes les analyses statistiques. Les données ont été
présentées sous forme de valeurs #177; erreur standard de la
moyenne. Les moyennes sont comparées à l'aide du test-t de
student et mann-withney. La valeur de p<0.05 a été
considérée statistiquement significative et celle de p<0.01
hautement significative.
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Anneau de
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précipitation du complexe antigène/anticorps
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