6.6. Expression des résultats (norme ISO 7218 :
2007)
Cas général
Pour q'un résultat soit valable, on estime en
général qu'il est nécessaire de compter les
colonies sur au moins une boîte contenant au moins 10
colonies, on calcule le nombre N de
microorganismes présents dans l'échantillon :
N= ÓC/ (V×1,1d)
Avec : Ó c : somme des colonies sur les
boites retenues de deux dilutions successives dont au
moins une contient au moins 10 colonies.
d : facteur de dilution correspondant à la 1ère
dilution retenue.
v : volume de l'inoculum appliqué à chaque boite,
en ml.
Estimation des petits nombres :
Si la boite contient moins de 10 colonies
caractéristiques, mais au moins 4, le résultat sera
comme suit :
Ne=C/V×d
Avec : Ne : nombre estimé.
C: nombre de colonies caractéristiques.
d : facteur de dilution correspondant à la 1ère
dilution retenue.
V: volume de l'inoculum appliqué à chaque boite, en
ml.
Nombre N'
Lorsque seule la boîte de la dernière dilution
ensemencée peut être comptée et contient plus
de 10 et moins de 300 colonies, on calcule le nombre N' de
microorganismes présents :
N' : C/V×d
C: nombre de colonies caractéristiques.
d : facteur de dilution correspondant à la 1ère
dilution retenue.
V: volume de l'inoculum appliqué à chaque boite, en
ml.
Mode de calcul après confirmation
? Pour les Staphylococcus aureus :
Après confirmation, on calcule, pour chacune des boites,
le nombre « a » des colonies
répondant aux critères de confirmation.
Résultat par dilution :
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a=b×C/A
Avec : a: nombre de colonies à confirmer
b : nombre de colonies répondant aux critères
d'identification.
C : nombre total de colonies dénombrées
suspectes ou présumées par boite
On calcule le nombre N, Ne ou N' de microorganismes
confirmés présents dans l'échantillon
pour essai, en remplaçant ÓC par Óa.
6.7. Recherche des salmonelles (ISO 6579 : 2002)
Cette recherche nécessite 4 phases successives :
V' Pré-enrichissement
V' Enrichissement
V' Isolement
V' Confirmation
6.7.1. Pré-enrichissement
Cette étape est nécessaire à la
revivification des micro-organismes ayant subis des traitements
sublétaux et à l'augmentation non spécifique du nombre de
tous les micro-organismes présents dans la masse de produit
analysé. Après la préparation des dilutions
décimales à partir de la suspension mère pour la recherche
des germes suscités, on incube le contenu du sac stérile de
polyéthylène à 37°C #177; 1°C pendant 18 h #177;
2h.
6.7.2. Enrichissement
Cette étape se fait dans un milieu sélectif
liquide tel que le bouillon Rappaport-Vassiliadis (RVS) (Annexe 1). La forte
concentration en chlorure de magnésium ainsi que la présence de
vert malachite dans ce bouillon ralentissent la croissance des germes autres
que les salmonelles ce qui va permettre la croissance sélective des
salmonelles.
L'enrichissement se fait par le transfert de 0,1ml d'inoculum
obtenu après le pré-enrichissement, dans 10 ml de bouillon RVS
près du bec bunsen puis incubation à 41,5#177; 1°C pendant
24h#177;3h (Figure 24).
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Figure 24: Etape d'enrichissement
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