c) Détection des glycosides
cardiotoniques (Keller Killiani)
Principe :
Les 2-désoxy-hexoses des cardénolides peuvent
être mis en évidence par le test de Keller Killiani. Les oses sont
dissouts dans l'acide acétique contenant des traces de chlorure ferrique
puis est superposé de l'acide sulfurique concentré. Il y a
formation d'un anneau brun à l'interface puis diffusion de la couleur
dans l'acide acétique qui devient bleu3, 32.
Mode opératoire :
Dans un tube à essai, à 1 mL de solution aqueuse
ajoutez 1 mL d'acide acétique glacial et 1 mL de
H2SO4 concentré, puis au mélange rajoutez 2
à 3 gouttes de FeCl3 2%. L'apparition d'une coloration bleu
vert indique un test positif.
d) Détection des saponines (Test
de mousse)
Principe :
Les saponines sont des hétérosides dont la
génine stéroïdique ou triterpénique (lipophile) est
reliée à des résidus sucrés (polaires), cette
structure particulière leur confère des propriétés
amphiphiles (tensioactives) qui en font de véritables savons. Leur mise
en évidence dans une drogue végétale est basée sur
leur pouvoir aphrogène c'est-à-dire, la possibilité qu'ont
leurs solutions aqueuses de mousser par agitation32.
Mode opératoire :
Dans un tube à essai, reprenez quelques mg de
résidu sec de la fraction (E) dans 5 mL d'eau distillée. Bouchez
l'ouverture du tube à essai et agitez-le vigoureusement dans le sens de
la longueur pendant 15 s. La formation d'une mousse stable de hauteur
supérieure à 1 cm, persistant pendant plus de 15 min indique la
présence de saponines.
e) Détection des
polyphénols (FeCl3 2%)
Principe :
Les polyphénols naturels regroupent un vaste ensemble
de substances chimiques comprenant au moins un noyau aromatique, portant un ou
plusieurs groupes hydroxyles, en plus d'autres constituants (phénols
simples, acides-phénols, coumarines, naphtoquinones, flavonoïdes,
anthocyanes, tanins, etc.). Ils ont la capacité de former des
chélates colorés avec des sels de métaux lourds. Leur
présence au sein d'une drogue végétale est mise en
évidence par l'apparition d'une coloration ou la formation d'un
précipité noirâtre intense, après ajout de chlorure
de fer (III) à l'extrait de cette drogue.3, 32, 34
Mode opératoire :
Dans un tube à essai, à 1 mL de solution
éthanolique ajoutez quelques gouttes de FeCl3 2%.
L'apparition d'une coloration noirâtre indique la présence de
polyphénols.
f) Détection des tanins
(Bate-Smith, Stiasny et FeCl3 2%)
Principe :
On distingue deux types de tanins :
- les tanins hydrolysables ou galliques, ce sont des esters
d'acides gallique et ellagique
- les tanins condensés ou catéchiques ou
proanthocyanidoliques, ce sont des oligomères ou polymères de
flavanols
Les tanins, étant des polyphénols,
réagissent avec le chlorure ferrique pour donner une coloration
bleu-noir avec les tanins galliques ou vert-noir avec les tanins
catéchiques. Cependant, seuls les tanins catéchiques donnent avec
le réactif de Stiasny un précipité beige3. On
peut donc se servir de ces deux réactifs (Stiasny et FeCl3)
pour mettre en évidence les différents types de tanins
présents dans une drogue végétale.
Par ailleurs toujours pour l'identification des tanins
catéchiques, on peut se servir de la réaction spécifique
de Bate-Smith dans laquelle les tanins condensés, traités
à chaud par un acide, se dégradent en anthocyanidols pigments
colorés en rouge.3, 32
Mode opératoire :
Stiasny et FeCl3 2%
Dans un tube à essai, à 2 mL de solution aqueuse
ajoutez quelques gouttes de réactif de Stiasny et chauffez au bain-marie
à ébullition pendant 15 min. L'apparition d'un
précipité beige indique la présence de tanins
catéchiques. Filtrez ensuite la solution qui a servi à la
recherche des tanins catéchiques ci-haut et au filtrat rajoutez
quelques gouttes de FeCl3 2%. L'apparition d'une coloration
bleu-noir indique la présence de tanins galliques.
Bate-Smith
Dans un tube à essai, à 1 mL de solution aqueuse
ajoutez quelques gouttes de réactif au butanol chlorhydrique et portez
au bain-marie à 90°C pendant 15 min. La formation d'une
coloration rouge indique la présence de tanins catéchiques.
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