Activité antifalcémiante et screening phytochimique de la fraction éthéro-méthanolique de BEAT-SS

g) Détection des anthocyanes (HCl conc et NH4OH 25%)

Principe :

Les anthocyanes sont des pigments dérivés de l'ion flavinium. Ils sont mis en évidence par leur coloration qui varie sensiblement en fonction du pH^{3, 32, 34} :

- rouge à pH ? 4

- bleu à pH compris entre 4 et 6

- incolore à pH ? 7

Mode opératoire :

Dans un tube à essai, à 1 mL de solution aqueuse présentant une coloration plus ou moins foncée, ajoutez 1 mL de HCl concentré puis 1 mL de NH₄OH 25%. Si la coloration s'accentue par acidification puis vire au bleu violacé en milieu basique, on peut conclure à la présence d'anthocyanes.

h) Détection des flavonoïdes (Shinoda)

Principe :

La réaction de Shinoda (ou réaction de la cyanidine) est basée sur l'obtention de couleurs caractéristiques du noyau flavonoïdique après sa réduction par l'hydrogène naissant issu d'un métal plongé dans la solution en milieu acide. Les couleurs caractéristiques sont³ :

- rouge avec les flavonols - orange avec les flavones

- violet avec les flavanones - test négatif avec les chalcones

Mode opératoire :

Dans un tube à essai, à 1 mL de solution éthanolique, 5 mL d'éthanol chlorhydrique (2 : 1, v/v) sont additionnés 2 à 3 copeaux de Mg et quelques gouttes d'alcool isoamylique. L'apparition d'une coloration intense rose-orange ou violacée indique un test positif.

i) Détection des stéroïdes et triterpènes (Liebermann Burchard)

Principe :

En milieu anhydride acétique, les noyaux stérols réagissent avec l'acide sulfurique concentré provoquant ainsi des changements de coloration dus à l'augmentation de la conjugaison des doubles liaisons au sein des cycles adjacents³².

Mode opératoire :

Dans un tube à essai, dissolvez quelques mg de résidu de poudre de la fraction (E) dans CHCl₃ puis rajoutez au filtrat 1 mL d'anhydride acétique, ensuite laissez couler le long des parois du tube 0,5 mL de H₂SO₄ concentré. La formation d'un anneau brun à la zone de contact des deux liquides avec une couche surnageante verte ou violette indique la présence de stéroïdes et de triterpènes.

j) Détection des aminoacides (Test à la ninhydrine)

Principe :

La ninhydrine est un composé aromatique utilisé comme révélateur. Elle possède la particularité de former à chaud avec les acides aminés un produit coloré en violet³².

Mode opératoire :

Sur un papier filtre, déposez une goutte de la solution aqueuse. Au même endroit déposez une goutte de réactif à la ninhydrine et chauffez le papier filtre à l'étuve à 90°C pendant 5 min. Procédez à un essai à blanc sur le même papier filtre. L'apparition d'une teinte bleue ou violette nettement différente de celle de l'essai à blanc indique un test positif.