PARTIE EXPERIMENTALE
CHAPITRE 4 :
MATERIELS ET METHODES
Excepté l'étape de lyophilisation, toutes les
opérations dans le cadre de ce travail ont été
effectuées au Laboratoire de Recherche Bio-Organique de la
Faculté des Sciences Pharmaceutiques à l'Université de
Kinshasa.
4.1. Matériels
4.1.1.
Matériel végétal
La poudre de BEAT-SS®, issue du broyage des
écorces séchées de troncs et de branches d'arbres, a
constitué notre matériel végétal. Il nous a
été fourni par le Centre de Phytothérapie moderne NIECA en
date du 15 mars 2013.
4.1.2.
Matériel biologique
Les échantillons de sang de patients
drépanocytaires (SS) utilisés dans ce travail ont
été collectés au Centre de Médecine Mixte
d'Anémie SS Mabanga situé à Yolo dans la ville de
Kinshasa, avec l'approbation du Comité Congolais d'Ethique. Les patients
choisis furent ceux n'ayant pas reçu de transfusion sanguine durant les
2 mois précédents leurs dons de sang.
Le sang fut introduit dans des tubes à essai contenant
l'EDTA 10% comme anticoagulant (acide éthylène diamine
tétra acétique 10% : 0,05 mL pour 3 mL de sang). Les
échantillons furent placés dans une glacière lors du
transport jusqu'au laboratoire puis conservé au
réfrigérateur à 4°C avant les essais biologiques. Ces
échantillons de sang se présentent comme indiqué au
Tableau 3.
Tableau 3 : Identification des échantillons de sang pour
les essais biologiques
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Echantillons de sang
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|
N°
|
Age
|
Sexe
|
|
1
|
24
|
Féminin
|
|
2
|
18
|
Masculin
|
|
3
|
11
|
Masculin
|
4.1.3. Matériel de
laboratoire
§ Pour le fractionnement
Verreries et appareillage :
- verrerie usuelle d'un laboratoire de chimie (ballon à
fond rond, bécher, pied gradué, erlenmeyer, entonnoir conique,
entonnoir Büchner, ouate, papier filtre Laborimpex, papier
indicateur de pH Macherey Nagel, etc.)
- agitateur magnétique avec plaque chauffante
Stuart
- balance analytique électronique Kern & Sohn
Gmbh ABS
- pompe à vide Knf Laboport
- évaporateur rotatif Laborota 4000
- étuve Memmert Electro Helios
- Sonicateur VWR
Réactifs et solvants :
- eau distillée
- méthanol p.a. Merck (99,9% ; d=0,79)
- éther di éthylique p.a. Panreac
(99,7% ; d=0,713)
§ Pour l'évaluation de l'activité
antifalcémiante
Verreries et appareillage :
- Microscope à écran LCD et caméra
incorporée Bresser, Gmbh & Co. KG
- lames porte-objet
- lamelles couvre-objet
- pipettes pasteur
- embouts
- tubes à essai
- micro tubes stériles de 1,5 à 2 mL
- tubes de prélèvement de sang
- seringues de 5 mL
- gants à usage unique
- papiers buvards
Réactifs et solvants :
- Métabisulfite de sodium
(Na2S2O5 2% préparée
extemporanément)
- Eau physiologique (NaCl 0,9%)
- Alcool dénaturé 75°
§ Pour le screening phytochimique
Verrerie et appareillage :
- Verrerie usuelle de laboratoire
- Plaque chauffante Stuart
- Balance analytique électronique Kern & Sohn
Gmbh ABS
- Etuve Memmert Electro Helios
- Sonicateur VWR
Réactifs et solvants :
- Réactif de Stiasny (Formol 30% 10 mL ; HCl conc
5 mL)
- Réactif de Dragendorff (Sous nitrate basique de
Bi 0,85 g ; KI 8 g ; CH3COOH glacial 10
mL ; eau distillée 70 mL)
- Réactif de Bouchardat (I2 2 g ; KI 2
g ; eau distillée qsf 100 mL)
- Réactif au Butanol chlorhydrique (Butanol 40
mL ; HCl conc 10 mL)
- Réactif Fehling A (CuSO4 4,5 g ; eau
distillée qsf 100 mL)
- Réactif Fehling B (Tartrate de Na et K 20 g ;
NaOH 15 g ; eau distillée qsf 100 mL)
- Eau distillée
- Ethanol
- Acide chlorhydrique
- Acide sulfurique
- Chloroforme
- Hydroxyde de sodium
- Hydroxyde d'ammonium
- Solution de chlorure ferrique 2%
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