L'examen cytobactériologique des urines

3-3-3-Identification biochimique :

L'identification biochimique est un examen qui permet d'identifier une bactérie en s'appuyant sur ces caractères biochimiques.

Les galeries d'identification biochimique permettent une identification rapide des bactéries.

question

Pour notre recherche on site :

La galerie classique : Le milieu TSI :

Le milieu TSI est un milieu glucosé saccharose, contenant du citrate de fer ammoniacal. C'est un milieu que permet la recherche de plusieurs caractères biochimiques. Il est très utilisé dans l'indentification des enterobacteriaceae.

Ensemencement	Mode d'action	Caractères recherchés		Résultats	ensemencer
mettre à l'étuve	utilisation du	le lactose a fermenté : la		abondamment la surface par stries
24h à 37°C.	glucose, utilisation du	surface inclinée vire au jaune. Dans le cas		serrées ou par inondation, puis
	lactose, utilisation du	contraire, sa couleur reste inchangée.		le culot par
	saccharose,	Le glucose a fermenté :		simple piqûre, à l'aide de la méme
	production de gaz, production	le culot vire au jaune, dans le cas contraire, sa		pipette boutonnée.
	??2?? .	couleur reste inchangée.		Il est important de ne pas oublier de dévisser partiellement la capsule afin de permettre les échanges gazeux
		S'il y à production de gaz, il est possible d'observer, soit seulement quelques bulles, soit une poche gazeuse qui décolle complètement le milieu de fond du tube.
		La production d'?????? se traduit par un noircissement du milieu dans la zone joignant le culot à la pente.

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Le milieu citrate de Simmons :

Ce milieu permet de mettre en évidence l'utilisation du citrate comme seule source de carbone et d'énergie. Ce caractère est intéressant pour discriminer les bactéries entre-elles et ainsi de les identifier.

Le milieu de mannitol mobilité :

Milieu d'ONPG :

Ce test permet de rechercher la présence d'une enzyme intracellulaire

â-galactosidase (ONPG hydrolase) qui permet l'hydrolyse du lactose en glucose et galactose.

Une bactérie lactose- peut l'~tre pour 2 raisons :

ü Absence de â-galactosidase.

ü Absence de â-galactoside perméase

Le test ONPG permet de recherche directement la présence de â-galactosidase en fournissant à la bactérie un substrat de cette enzyme :

L'orthonitrophényl- â-D-galactopyranoside.

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Milieu de clarck et lubs :

Réaction de vosges-proskauer(VP) : au cours de la fermentation butène glycolique, les bactéries produisent de l'acétine. En présence base forte et á-naphtol, l'acétoine donne une coloration rouge en milieu très oxygéné.

Réaction ou rouge de méthyle (RM) : c'est la mise en évidence de l'acidification finale d'un milieu glucosé après fermentation des mixtes.

Milieu gélatinase :

Principe : la gélatinase est une protéase : c'est une enzyme qui hydrolyse le collagène (gélatine) en acides aminés ou en peptides. On met en présence des bactéries et un morceau de gélatine renfermant de petites partiales.

La liquéfaction d'un morceau de gélatine lorsqu'il est mis en présence de bactéries traduit donc la synthèse d'une gélatinase.

Milieu urée-indole :

Le milieu urée-indole ou urée-tryptophane est un milieu synthétique complexe fournissant un ensemble de résultats utiles à l'densification des entérobactéries et autre bactéries.

Il permet la recherche de 3 activités enzymatique

> L'uréase

> Le tryptophane désaminase (TDA)

> La production d'indole gr~ce à un tryptophane

Recherche de l'uréase :

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NB : les bactéries ne se multiplient pas dans ce milieu car il n'y a pas de source de carbone. Il est donc nécessaire de l'ensemencer abondamment comme il n'y a pas de peptones, l'alcalinisation du milieu est due à l'hydrolyse de l'urée.

Recherche de la TDA :

Répartir le milieu urée-indole dans 2 tubes à hémolyse distincts : > L'un servira à la recherche de la TDA.

> L'autre servira pour la recherche de la production d'indole.

Recherche de l'indole :

Prendre le tube à hémolyse restant et effectuer la recherche :

La galerie Api 20 E:

La galerie API 20E compote 20 microtubes contenant des substrats sous forme déshydratée, Les tests sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les milieux. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des virages colorés spontanées ou révélés par l'addition de réactifs

Cupule

Micro tube contenant le milieu déshydraté

Image de la galerie Api 20 E

Technique :

Préparation de l'inoculum :

Faire une suspension bactérienne, dans une ampoule de Suspension Medium ou dans un tube

D'eau distillée stérile, d'opacité légère avec une seule colonie prélevée sur un milieu L gélosé.

Inoculation de la galerie :

Remplir les tubes et les cupules des tests : CIT, VP, GEL avec la suspension bactérienne.

Remplir uniquement les tubes des autres tests.

Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LDC, ODC, URE, H2S en remplissant leur Cupule d'huile de paraffine.

Refermer l boîte d'incubation et la placer à 35-37°C pendant 18 à 24 heures.

Lecture :

La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de lecture et l'identification est obtenue à l'aide du tableau d'identification ou gr~ce a un logiciel d'identification.

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