IV.3.Extraction des flavonoïdes:
· Principe:
Tous les flavonoïdes n'ont pas la même
propriété de solubilité car certains flavonoïdes sont
solubles dans l'eau et l'alcool alors que d'autres ont des
propriétés hydrosolubles extrêmement faible (Bruneton,
1999) de ce fait le principe utilisé pour l'extraction des
flavonoïdes est basé sur le degré de solubilité des
flavonoïdes dans les solvants organiques.
· Mode opératoire :
Environ 20g de matière sèche finement
broyée de Centaurea microcarpa Coss. et Dur. est
mélangée avec 200 ml de Méthanol (85%). Le mélange
est filtré sur un tissu 24 heurs plus tard. Après deux
extractions successives avec le Méthanol, 85%, trois fois et du
Méthanol, 50%, deux fois, les filtrats sont combinés,
filtrés sur du papier filtre puis soumis à une
évaporation à basse pression à 35°C
(Rotavopor, Buchi 461) la phase aqueuse ainsi obtenue est conservée
pendant 48 heurs à 4°C puis filtrée. Le filtrat est
débarrassé des cires, des lipides et de la chlorophylle par trois
lavages successifs avec du n-hexane (v/v) pour donner une phase aqueuse.
Afin de séparer les flavonoïdes en fraction
aglycone et
glycosilées.la phase aqueuse
est mélangée à volume égale avec du chloroforme
pour obtenir une phase organique contenant les flavonoïdes aglycones et
les aglycones méthoxylés .la phase aqueuse restante subit une
série d'extraction avec l'acétate d'éthyle (10fois) afin
de récupérer dans la phase organique certains flavonoïdes
aglycones ,mais sur tout les mono et les diglycosidiques .La phase aqueuse
restante contient les flavonoïdes glycosylés plus polaires comme
les di,tri et tetraglycosidiques .les extraits obtenus sont
dénommés selon le solvant qui a permis leur séparation :
extrait chloroformique et extrait d'acétate d'éthyle et extrait
aqueux. Les trois fractions récupérées sont soumises
à une concentration à basse pression à 35°C puis
pesé pour déterminer les rendements d'extraction exprimés
par rapport à100g de matière sèche (figure13).
Figure : Protocole d'extraction des flavonoides :
IV.4.Extraction des huiles essentielles par
hydrodistilation :
· Principe:
La plante est mise en contact avec l'eau dans un ballon lors
d'une extraction au laboratoire ou dans un alambic industriel. Le tout est
ensuite porté à ébullition. Les vapeurs sont
condensées dans un réfrigérant et les HE se
séparent de l'eau par différence de densité. (Benayad N,
2008) (figure14).
Figure 14: Schéma de principe d'une
extraction par hydrodistilation.
· Protocole expérimental
d'extraction:
La matière végétale, constituée des
parties aériennes (50g) est introduite dans un ballon en verre ,
à trois cols, de 1L, remplie au 2/3 d'eau distillée (700 ml).
Une fois placé, le dispositif d'hydrodistilation est
mis en marche. La température dans le ballon contenant l'eau et la
plante est réglé tout au long de l'extraction à 100
°C au moyen d'yn thermomètre placé dans l'autre col du
ballon.
L'ensemble est porté à ébullition et la
vapeur chargé d'eau et d'huilese condensent dans un
réfrigérant inclinée.Le distillat, s'écoule goutte
à goutte et est recueilli dans une ampoule à décanter
située à l'extrémité.
L'HE est séparée de l'eau distillée par
décantation après relargage au NaCl (Prolabo) et traitement par
l'acétate d'éthyle (Prolabo) afin d'extraire l'huile
solubilisée le surplus d'eau est éliminé par ajout du
sulfate de sodium anhydre (Na2 SO4) (Prolabo) puis filtrer sur un papier
plissé. L'ensemble HE et le solvant est conservée dans des
flacons, dans un endroit frais et obscure à l'abri de la lumière,
pour permettre l'évaporation du solvant (figure15).
Chapitre IV : Matériels et méthodes.
.
Figure 15 : Extraction des HE par
hydrodistilation.
/ I- rI-TI-P I-WI- ITF ( II-AMEDINI TRP P I- MIA : MHE
R%= X 100.
Ou : MS
Ms : Masse de la matière végétal
sèche. MHE : Masse en HE.
IV.5. Tests phytochimiques :
Le bute de ces tests est de connaître la composition
des principales classes de métabolites secondaires qui entrent dans la
composition de Centaurea microcarpa Coss. et Dur., les tests sont
effectués sur un infusé.
IV.5.1. Préparation de l'infuser:
Environ 10 grammes (10g) de poudre sont mit à infuser
dans 100ml d'eau bouillon pendant 15 min. le filtrat est ajusté à
100 ml avec l'eau distillée.
IV.5.1.1. Mise en évidence des
polyphénols:
Quelques goutes d'HCL, sont ajoutées à 5ml
d'infuser, la réaction donne une coloration rouge en présence de
polyphénols.
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