II-2.2.2. Analyse physico-chimique des
échantillons
Les analyses physico-chimiques effectuées sur les
différents échantillons ont concerné les teneurs en
matière sèche, l'humidité, les protéines totales,
les cendres et les lipides totaux. Elles étaient effectuées selon
les méthodes décrites par l'AOAC (2011). De
plus, le taux de glucides totaux a été déterminé
selon les formules décrites par Bertrand & Thomas (1910)
et la valeur énergétique est calculée, selon la
formule de Coleman (1970), utilisant les coefficients
d'Atwater & Rosa (1899). Le dosage des minéraux
était effectué selon la norme internationale ISO 6869 de
décembre 2000, par spectrophotométrie d'absorption atomique.
Enfin, un profil en acide gras est effectué sur les échantillons
de thon (thons frais et thons frits) ainsi que ceux des plats de « Garba
». Sur chaque échantillon, les différentes analyses
étaient répétées trois fois.
? Matière sèche et
humidité
Le taux de matière sèche a été
déterminé par la pesée de 10 g d'échantillon (P1)
dans une capsule de poids initial (P0) connu, et séché à
l'étuve à 105 °C pendant 24 h. Après refroidissement,
les capsules contenant les échantillons sont pesées (P2). Les
pourcentages de matière sèche (MS) et d'humidité (Hd) sont
calculés selon les formules suivantes :
|
MS (%) = X100
|
(1)
|
MS = Matière sèche (%)
Hd = Humidité (%)
P0 = masse de la capsule vide (g)
P1 = masse de l'échantillon (g)
P2 = masse de la capsule et de la matière sèche
(g)
|
|
Hd = 100 - % MS
|
(2)
|
? Protéines
La teneur en protéines est déterminée
à partir du dosage du taux d'azote total selon la méthode
de KJEDAHL. Il s'est effectué en deux étapes qui
étaient la minéralisation sulfurique et la distillation. Pour la
minéralisation sulfurique, 1 g d'échantillon est
prélevé et mis dans un tube MATRA de 200 ml. Ensuite, 12 ml de
H2SO4 (98 % v/v) et deux comprimés KJEDAHL composés de sulfate de
cuivre (CuSO4) et de sulfate de potassium (K2SO4) sont ajoutés. Les
tubes MATRA sont chauffés à 420 °C sous une hotte, pendant 1
heure, jusqu'à l'obtention d'une coloration vert-claire. Le chauffage
à 420 °C a continué une heure après la
décoloration afin que la destruction des matières organiques soit
complète. La solution est ensuite refroidie puis la distillation suivie
du titrage avec l'acide chlorhydrique (HCl) est réalisée en
portant les tubes MATRA au distillateur.
50
Au cours de la distillation, le sulfate d'ammonium est
décomposé par la soude (0,5 N) et l'ammonium ainsi
libéré est entraîné par la vapeur et titré
à l'aide d'une burette contenant de l'acide chlorhydrique (0,1 N) en
présence d'un indicateur coloré, le rouge de méthyle. Le
titrage est achevé lorsque la solution vire du bleu au rouge. La formule
suivante a été utilisée pour déterminer le
pourcentage d'azote (% N) de l'échantillon analysé :
% N = X 100 (3)
V = volume d'acide chlorhydrique en ml versé pour le
dosage ; Vb = chute de burette pour l'échantillon blanc.
La teneur en protéines (Tprot.) de l'échantillon
a été calculée à partir du pourcentage d'azote
total selon la formule suivante :
Tprot = % N X 6,25 (4)
où 6,25 représente le coefficient de conversion de
l'azote
? Lipides
La détermination de la teneur en lipides ou
matières grasses (MG) des échantillons est réalisée
à
l'aide d'un extracteur soxhlet. Au cours de ce dosage, un
gramme (1g) d'échantillon noté PE, a été introduit
dans une cartouche d'extraction (cartouche de Wattman) insérée
dans l'ampoule d'extraction. Un ballon à fond rond préalablement
pesé (P1) est rempli au 2/3 de son volume avec de l'hexane. Ce ballon
est racolé au reste du système réfrigérant pendant
6 h où la matière grasse est extraite.
Le solvant est récupéré par
évaporation puis le ballon contenant la matière grasse est mis
à séchage à 130 °C pendant 30 min à
l'étuve, ensuite il est refroidi au dessiccateur et pesé pour
obtenir le poids (P2).
% MG = X 100
L'expression des résultats obtenus par le calcul du
pourcentage de la matière grasse est la suivante :
(5)
51
Avec :
MG = matière grasse
P2 = poids du ballon + masse de la matière grasse (g)
sec
P1 = poids du ballon vide (g)
PE = poids de l'échantillon (g)
? Cendres et minéraux
Les échantillons sont mis dans des creusets en porcelaine
de poids vide noté (P0). Le poids
obtenu est noté P3. Ensuite, les creusets sont
placés pendant huit heures dans un four à moufle
réglé à 550 °C. Les creusets sont retirés et
placés dans un dessiccateur. Après refroidissement, les creusets
sont pesés. Les nouveaux poids ainsi obtenus sont notés (P4). Le
pourcentage des cendres par rapport à la matière sèche est
donné par la formule suivante :
Avec :
Pcr = poids du creuset vide
P3 = poids du creuset contenant les échantillons avant la
mise au four
P4 = poids creuset contenant les échantillons
incinérés
Le dosage des minéraux est effectué selon la
norme internationale ISO 6869 de décembre 2000. Aux cendres obtenues
après incinération, d'une masse bien déterminée
d'échantillon, est ajoutés de l'acide chlorhydrique et de l'eau
distillée. Après chauffage du mélange dans un bain marie
bien bouillant jusqu'à dissolution des cendres, de l'eau
distillée a été ajoutée au mélange. A partir
de cette solution, le dosage des différents minéraux (Magnesium,
Fer, Sodium, Potassium, Calcium) est déterminé par
spectrophotométrie d'absorption atomique.
? Glucides totaux
Le pourcentage de glucides totaux a été
déterminé selon les formules décrites par Bertrand
& Thomas (1910) :
(7)
Glucides totaux (%) = 100 - (% humidité + %
protéines +% lipides + % cendres)
52
? Détermination de la valeur
énergétique
La valeur énergétique est déterminée
par calcul, selon la formule de Coleman (1970) utilisant
les coefficients d'Atwater & Rosa (1899).
(8)
VE (calories) = (4x% protéines) + (4x% glucides
totaux) + (9x% lipides)
Avec VE = valeur énergétique
? Analyse de la composition en acides gras des
lipides
La composition en acides gras des échantillons est
déterminée en trois étapes. D'abord les
lipides sont extraits à froid selon la méthode
décrite par Folch et al. (1957). Ensuite, les
esters méthyliques d'acides gras sont obtenus par la méthode de
dérivation en milieu acide d'Ichihara & Fukubayashi
(2010). L'identification des esters méthyliques d'acides gras,
est enfin réalisée à l'aide d'un chromatogramme en phase
gazeuse (CPG) couplé à un spectromètre de masse (SM).
? Extraction des lipides
L'extraction des lipides par la méthode de Folch
et al. (1957) est réalisée à partir de
trois prises
d'essai de 1g de l'échantillon (P0)
préalablement séché et finement broyé. Ils ont
été ensuite introduits dans un erlenmeyer, en présence de
solvants d'extraction (folch) et agité pendant 5 h, à l'aide d'un
agitateur magnétique. Le mélange est centrifugé pendant 10
min avec une centrifugeuse à 3000 trs/min. Après les
différentes extractions, le mélange de solvants contenant les
lipides (le surnageant) est transvasé dans un erlenmeyer et lavé
avec une solution de chlorure de sodium (0,9 %) pour éliminer les
composés non lipidiques. Après le lavage, les systèmes
bi-phasiques sont centrifugés pendant 5 min puis séparés
à l'aide d'une pipette de transfert. Les phases organiques sont
transférées dans des ballons préalablement pesés
(P1), pour être évaporé à l'aide d'un rotavapor.
? Méthylation
La méthylation a débuté par la
préparation du réactif R (stable au réfrigérateur)
composé
d'acide chlorhydrique (HCI) concentré (35 %, m/m)
dilué dans du méthanol. Ensuite, 100 ìL de chaque
échantillon lipidique à méthyler, sont ajoutés
à du toluène, du méthanol et au réactif R dans des
tubes à essai vissés. Le mélange est
homogénéisé au vortex (1 mn) puis, porté au bain
marie à 100 °C pendant 1 h. Après refroidissement, 2 mL
d'hexane et 2 mL d'eau distillée sont ajoutés en vue d'en sortir
les esters méthyliques dans la phase supérieure d'hexane. Ces
derniers sont récupérés avec une pipette de transfert, et
conservés également à -20 °C jusqu'à leurs
analyses.
53
? Analyses chromatographiques
Les profils des esters méthyliques d'acide gras (EMAG)
sont déterminés à l'aide d'un chromatographe de type 6890N
de Agilent (WATERS), équipé d'une colonne capillaire. Il est
couplé à un spectromètre de masse (SM) de type Quattro
microTM GC, Micromass (WATERS) équipé d'une source
à impact électronique. L'hélium est utilisé comme
gaz vecteur (1 mL/min). Initialement, la température du four
était maintenue à 40 °C en isotherme pendant 6 min. Le
gradient thermique du four utilisé était de 40 à 60
°C à 1 °C/min, 60 à 140 °C à 2 °C/min,
puis 140 à 240 °C à 12 °C/min, où la
température est maintenue constante pendant 45 min. L'injection
était de type split avec un ratio de 1:10. Les températures de
l'injecteur (doté d'un passeur automatique) et du détecteur
étaient fixées respectivement à 250 et 230°C. Les
EMAG sont identifiés en tenant compte du temps de rétention de
chaque composé sur la colonne considérée, fourni par les
bibliothèques spectrales NIST 2014.
II-2.3. Études des caractéristiques
nutritionnelles du « Garba » chez le rat en croissance II-2.3.1.
Conduite de l'élevage
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