Sommaire
INTRODUCTION GENERALE 1
I- Les légionelles 1
I-1. Historique 1
I-2. Caractéristiques générales de
la bactérie 1
I-3. Position taxonomique. 2
I-4. Écologie des légionelles
2
I-4-1. Les réservoirs de légionelles 2
I-4-2. Mode de vie sessile 2
I-4-1. Cycle de réplication intracellulaire 3
I-5. Maladies du légionnaire 4
I-5-1. Légionellose 4
I-5-2. Fièvre de Pontiac. 4
II- Amibes 5
II-1. Historique 5
II-2. Caractéristiques et morphologie
générales de l'amibe 5
II-2-1. La forme végétative ou trophozoïtes
5
II-2-2. Forme kystique. 5
II-2-3. Cycle de vie 6
II-3. Classification 6
II-4. Répartition dans l'environnement
7
II-5. Maladies Amibiennes. 7
II-5-1. Atteintes du système nerveux. 7
II-5-2. Kératites amibiennes 7
MATÉRIEL ET MÉTHODES 9
I- Souches des micro-organismes 9
I-1. Legionella pneumophila sérogroupe 1
et Escherichia coli 9
I-2. Les amibes 9
I-3. Milieux et conditions de culture des
micro-organismes 10
I-3-1. Culture d'Escherichia coli 10
I-3-2. Culture des légionelles 10
I-3-3. Culture d'amibes 10
I-4. Numération des micro-organismes
11
I-4-1. Dénombrement des légionelles 11
I-4-2. Dénombrement des amibes 11
I-5. Les cultures témoins 11
I-5-1. Témoins amibes 11
I-5-2. Témoins légionelles. 11
I-6. Étude cinétique des co-cultures
12
I-6-1. Pouvoir incubateur des amibes. 12
I-6-2. Cytotoxicité de L. pneumophila
vis-à-vis des amibes 12
I-7. Étude de l'état viable non cultivable
de Legionella pneumophila 13
I-7-1. Traitement thermique 13
I-7-2. Étude de la viabilité des cellules 13
I-8. Analyses statistiques 14
RÉSULTATS 15
I-1. Validation de l'isolement des souches amibiennes
15
I-2. Multiplication intra-amibienne de Legionella
pneumophila 16
I-2-1. Témoins légionelles 16
I-2-2. Témoins amibes 17
I-2-3. Permissivité des souches d'amibes aux L.
pneumophila 17
I-2-1. Cytotoxicité de L.pneumophila
vis-à-vis dessouches amibiennes 20
I-2-2. Affinité de L.pneumophila pour le substrat
(amibes) 21
I-3. Impact du traitement thermique sur Legionella
pneumophila 23
DISCUSSION 25
CONCLUSION ET PERSPECTIVES 27
RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES 28
ANNEXES 30
ANNEXE 1 30
ANNEXE 2 31
ANNEXE 3 32
Liste des figures
Figure 1: La formation d'un biofilm par les
légionelles (Costerton, 1999) 3
Figure 2: Cycle de vie schématique de
L.p dans les macrophages (Swanson et Hammer, 2000). -4
Figure 3: Photos des souches amibiennes
isolées dans différents types de cultures 15
Figure 4: Suivi de la cultivabilité de
L.p dans le milieu de co-culture aux MOI 0,1 et 10. 16
Figure 5: Croissance des souches amibiennes
(MOI 10) dans le milieu de co-culture 17
Figure 6: Prolifération L.p en
Co-culture avec les deux souches à la MOI 0,1 18
durant 72H d'incubation 18
Figure 7: Prolifération de L.p en
Co-culture avec les deux souches à la MOI 10 18
durant 72H d'incubation 18
Figure 8: Inhibition de la croissance des
amibes sur 72 h de co-culture par L.p a un MOI de 10 19
Figure 9: Inhibition de la croissance des
amibes sur 72 h de co-culture par L.p a un MOI de 0,1 19
Figure 10:Taux de trophozoïtes vivants
après 72h de co-culture avec L.p MOI 0,1 20
Figure 11: Taux de trophozoïtes vivants
après 72h de co-culture avec L.p MOI 10 21
Figure 12: Linéarisation de Lineweaver
et Burke de la relation entre la vitesse spécifique de croissance (u)
de Legionella pneumophilla et du ratio initial
(bactéries/amibes) 21
Figure 13: Impact du traitement thermique sur
la cultivabilité de Legionella pneumophila 23
Figure 14: L'état viable non
cultivable de L.p après co-culture avec les amibes 24
Liste des tableaux
Tableau 1: Souches bactériennes et
amibiennes utilisées lors de l'étude et sont origines 9
Tableau 2: Valeurs de KS
(bactéries/amibe) et umax (h-1) à partir de la
linéarisation 22
| 
