5.5 Identification
des espèces bactériennesà partir des culots
5.5.1 Matériel
nécessaire
Le matériel ayant servi à l'identification des
espèces bactériennes à partir des culots d'urines et
d'hémocultures est représenté dans la figure 5.
A
B
Figure 5: Matériel
nécessaire à l'identification des germes au spectromètre
de masse
A= Pipette + matrice + lame de spectrométrie + E.
coli de contrôle, B = MALDI-TOF-MS,
5.5.2 Réalisation des
identifications
Le test au â-LACTATM était
systématiquement couplé à l'identification d'espèce
bactérienne à partir des culots en spectrométrie de masse
suivant la procédure ci-après.
Dans un tube Eppendorf, 1,5 ml d'urine ou de suspension
d'hémoculture ont été transférés à
l'aide d'une pipette,puis centrifugés à 3000 tours par minute
pendant 5 minutes. Après élimination du surnageant, le culot a
été repris dans 500 ul d'eau distillée puis remis en
suspension par pipetage aller/retour. Cette suspension est ensuite centrifuger
à 13000 tours par minute pendant 2 minutes, le surnageant est à
nouveau éliminé et le culot a été repris dans 50 ul
d'éthanol pure (éthanol 100%). Au moyen d'une pipette, 1 ul de la
suspensiona été déposé dans la cible puis
séché à l'étuve à 37°C. Enfin, 1 ul de
matrice a été ajouté sur chaque dépôt ; le
touta été mis à sécher avant de passer la lameau
MALDI-TOF-MS.
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