5.4.2 Réalisation du test
à partir des flacons d'hémocultures
Dans un tube Eppendorf, 1 ml de suspension de sang a
été transféré au moyen d'une pipette,50 ul de
triton 10% ont été ajouté puis laisser reposer pendant 10
minutes et passer au vortex pendant 5 secondes. Le mélange est ensuite
centrifugé à 13000 tours par minutes pendant 2 minutes.
Après élimination du surnageant, le culot est repris en
suspension dans 500 ul d'eau distillée par pipetage aller/retour.
Après une seconde centrifugation à 13000 tours par minutes
pendant 2 minutes, le surnageant est éliminé à
nouveau. Enfin, une goutte de réactifs R1 et une goutte de
réactifs R2 de â-LACTATMpréalablement sorti
à température du laboratoire sont ajoutées au culot et
remise en suspension. La lecture de la coloration du mélange à
T=15 minutes a été réalisée.
- coloration jaune : négatif
- coloration orangé : ininterprétable
-coloration rouge : Positif
5.4.3 Réalisation du test à partir des
échantillons d'urines
Les urines positives à BGN répondant aux
critères d'inclusions sus cités ont fait l'objet de test de mise
en évidence de bactéries résistantes aux
céphalosporines de 3ème génération par
production de béta-lactamases suivant le protocole ci-dessous.
Au total, 1,5 ml d'urine ont été
transférés à l'aide d'une pipette dans un tube Eppendorf,
puis centrifugés à 3000 tours par minute pendant 5 minutes.
Après élimination du surnageant, une goutte du réactif R1
et une goutte du réactif R2 du â-LACTATM
préalablement sortis à température du laboratoire
pendant 10 minutes ont été ajoutées au culot. Le
mélange est remis en suspension au moyen d'une pipette tout en
évitant la formation de mousse.
La lecture de la coloration du mélange a
été faite à T=15 minutes et T=30 minutes. Suivant les
recommandations du fabricant la lecture doit se faire à 15 minutes avec
l'interprétation sus citée.
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