3.1.2 Préparation de l'échantillon
La quantité de feuilles nécessaire est
prélevée puis coupée à l'aide de ciseaux. Le tout
est introduit dans un récipient en INOX® pour procéder
à un cryobroyage ; de l'azote liquide est versé sur la
matière végétale qui est alors congelée et devient
cassante, le tout est alors broyé
22
à l'aide d'un pilon ce qui donne une poudre
relativement fine et homogène (voir figure 12). Celle-ci est finalement
introduite dans un récipient hermétiquement fermé de 20
mL. Cette technique permet d'obtenir une poudre de fine granulométrie
exempte de solvant et cela sans altérer la matière
végétale. En effet, les température atteintes lors du
broyage restent très faibles, ce qui permet de ne pas altérer les
composés fragiles et instables (Mathieu and Fonteneau 2008).
Figure 11 : Feuilles d'O. centraliafricanum
R.E. Fries.
3.2 Le système « Headspace »
3.2.1 Type d'appareillage
Le modèle de « Headspace »
utilisé dans cette étude est de type statique
équipé d'un système de prélèvement «
Boucle - Pression » (voir point 1.5.1). Il s'agit du modèle «
Agilent® 7694 E Headspace Sampler » et plus
précisément de la version « G1883 ». Cet
appareil analytique est muni d'un plateau tournant dans lequel peuvent
être introduits jusqu'à 12 vials (de 10 ou 20 mL).
Figure 12 : Carrousel du « Headspace
»
Ce modèle dispose de trois zones chauffées
distinctes qui sont le four pour le vial, la boucle et la ligne de transfert.
Au niveau du vial, le système de chauffe est constitué d'un bloc
métallique fonctionnant au moyen d'une résistance. La ligne de
transfert, composée de nickel, sert de jonction entre le «
Headspace » et le GC.
Les pressions de la voie pour le gaz porteur du GC et la voie
servant à la pressurisation du vial peuvent être
réglées manuellement au niveau du « Headspace
».
Cet instrument est également muni d'un bras
robotisé permettant de surélever le vial à analyser et
ensuite de percer le septum du récipient pour le
prélèvement.
Pour rappel, les principales étapes de l'extraction se
succèdent comme tel :
Figure 13 : Succession des étapes lors de
l'extraction « Headspace »
23
Figure 14 : Vue avant et arrière du
« Headspace » (Anonyme 2000)
24
3.2.2 Protocole ? Etalons
Avant de procéder aux diverses analyses, une
série d'étalons externes a été
sélectionnée et analysée selon (Masada 1976). La liste de
ces différents standards est reprise ci-dessous :
|
Composés :
|
T° ébullition (°C)
|
P de vapeur (mm
Hg à 25°C)
|
|
1,8 Cinéole
|
176 - 177
|
1,65
|
|
Citronellol
|
225
|
0,02
|
|
Estragol
|
215 - 216
|
0,21
|
|
Eugenol
|
254
|
0,03
|
|
Limonène
|
176
|
1,98
|
|
Linalol
|
198 - 200
|
0,16
|
|
â-Pinène
|
166
|
2,93
|
|
á-Terpinéol
|
219
|
0,0423
|
Tableau 1 : Liste des étalons externes
(Sigma Aldrich®)
Les étalons ont été prélevés
au moyen de capillaires en verre et une quantité de 5 uL a
été introduite dans chaque vial.
Entre chaque série d'analyses, un essai à blanc a
été effectué afin de détecter d'éventuelles
contaminations (« Carry-Over »).
? Analyse
Pour chaque analyse, une certaine quantité
d'échantillon est introduite dans un vial de type «
Agilent® Technologies, Flat Bottom Headspace Vials » de 10
mL (n° lot : 914-09-12/001) qui est scellé par un septum «
20mm Tan PTFE/White Silicone Septa (Agilent® Technologies)
(n° lot : 122393-1-1) grâce au cerclage en aluminium «
Agilent 20 mm, Crimp Cap Headspace, Safety Release».
25
Figure 15 : Pince, septum et vial.
Le vial est alors introduit dans le carrousel, agité
pendant une minute puis chauffé à 90°C pendant 35 minutes.
Il est ensuite surélevé et percé par une aiguille afin de
prélever un aliquote de l'espace de tête. La suite se
déroule comme expliqué au paragraphe « 1.5.1 » section
« Système Boucle - Pression ». L'ensemble des
paramètres du « Headspace » est repris dans le
tableau ci-dessous.
|
Temps (min)
|
|
Equilibrage du vial
|
34,00
|
|
Pressurisation
|
1,00
|
|
Remplissage de la boucle
|
0,20
|
|
Equilibration de la boucle
|
0,05
|
|
Injection
|
1,00
|
|
Cycle GC
|
33,75
|
|
Mélange
|
1,00
|
|
Température (°C)
|
|
Vial
|
100
|
|
Boucle
|
110
|
|
Ligne de transfert
|
120
|
|
Pression (PSI)1
|
|
Vial
|
22.04
|
|
Gaz porteur
|
21,30
|
Tableau 2 : Paramètres du «
Headspace »
| 
