II.3.2- Technique.
Dans le cadre de nos travaux de recherche, nous avons
utilisé la technique en milieu Coombs-LISS.
II.3.2.1- Réalisation du test de
compatibilité (TC).
Nous compatibilisons parallèlement au travail des
techniciens de la Banque de sang, tous les sérums des receveurs
âgés de 2 ans au moins.
a-) Principe
Ce test permet de rechercher d'éventuels allo
anticorps IgG présents dans le sérum du receveur dirigés
contre les antigènes des GR à transfuser.
b-) Mode opératoire
Il se résume en 2 étapes à
savoir :
Première étape
- Réunir le matériel nécessaire à
la réalisation du test.
- Numéroter les échantillons et les bulletins de
demande de sang qui les accompagnent.
- Incuber à 37°C les échantillons (si
nécessaire) dans un bain-marie pendant cinq à dix minutes pour
accélérer la coagulation.
- Centrifuger à 3.000 tours /minutes les
échantillons de sang pendant une à trois minutes.
- Décanter le sérum en respectant les
numéros de chaque échantillon.
- Laver trois fois les GR du receveur en eau physiologique
à 0,9%.
- Laver trois fois les GR de la poche de sang en eau
physiologique à 0,9%.
- Faire la suspension à 5% de chacun des GR
lavés.
Deuxième étape
- Disposer et numéroter les tubes
- Distribuer les réactifs dans les tubes. (Voir annexe
3 pour le TC en milieu Coombs-LISS)
NB : Nombre de tubes à disposer = nombre de
poches à céder + 1 tube (pour auto-test).
Lorsque le TC se révèle positif nous
réalisons le test de Coombs Direct sur les poches de sang et sur les
hématies des receveurs.
(Voir annexe 6 pour le test de Coombs Direct.)
Figure n°10: Disposition du
matériel pour le TC au laboratoire
- Evaluation de la réaction.
· Lecture
*Positionner le tube au dessus d'un éclairage.
*Agiter légèrement le tube de manière
à décoller le culot d'hématies à l'aide du
surnageant.
*Lire et noter les résultats. (Voir annexe 12 pour la
fiche de résultats).
Surnageant clair clair
clair rose rose
Agglutinats 1-3 4-10 >10
fins 0
Positivité +++ ++
+ +/- -
Figure n°11:
Présentation des différentes réactions en tube
II.3.2.2 - Recherche d'agglutinines
irrégulières (RAI).
Pour cette étude, nous avons procédé
au dépistage et à l'identification des anticorps
dépistés.
Les panels utilisés proviennent du laboratoire suisse
DiaMed
La technique utilisée est celle du Micro Typing System
qui est très simple et de réalisation très
aisée.
a-) Principe du Micro Typing System (MTS)
La technique du MTS appliquée à la RAI est une
micro méthode qui permet de réaliser avec de faibles
quantités de réactifs et d'échantillons les tests
immuno-hématologiques. La réaction Ag-Ac se développe dans
un gel spécial sur lequel on dépose les hématies tests et
l'échantillon de sérum. Elle se produit effectivement pendant une
centrifugation de dix minutes à 900TPM et consiste en des
réactions d'agglutination.
b-) Dépistage des agglutinines
irrégulières
Cette recherche préliminaire d'agglutinines
irrégulières permet de détecter la présence d'allo
ou d'auto anticorps dans le plasma ou le sérum mais ne permet pas de
déterminer la spécificité de l'anticorps trouvé. Le
panel de dépistage utilisé pour notre étude est
composé des hématies-tests prêts à l'emploi,
ID-DiaCell I-II-III.
Les sérums révélés positifs au
dépistage sont testés pour l'identification du ou des anticorps
présents.
c-) Identification des anticorps
dépistés
Elle permet d'identifier les anticorps dépistés
à l'aide des hématies-tests, ID-DiaPanel prêtes à
l'emploi. Elle consiste à faire réagir sur les
hématies-tests d'identification ID-DiaPanel, le sérum dans lequel
des anticorps ont été dépistés.
Dans le cadre du présent travail, le panel
d'identification est composé de 11 hématies.
d-) Evaluation de la réaction
-Une réaction est positive lorsque les
hématies agglutinées forment une ligne rouge à la surface
du gel ou sont dispersées dans le gel.
-Une réaction négative se traduit par la
sédimentation complète des hématies au fond du tube.
Positivité +++ ++
+ (+) -
Figure n°12 :
Présentation des différentes sortes de réactions en gel
[23]
Nos résultats se présenteront en deux volets
sous forme de tableaux.
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