1.1.4. QUATRIEME RAYON
Le dernier rayon s'occupe da la « Coloration de
Gram »et de la stérilisation des tubes.
Coloration de Gram
La coloration de Gram est la méthode de coloration la
plus utilisée en bactériologie médicale; elle permet de
colorer les bactéries et de les distinguer à l'examen direct par
leur aptitude à fixer le violet de gentiane (Gram +) ou la fuchsine
(Gram -). L'intérêt de cette coloration est de donner une
information rapide et médicalement importante.
La coloration de Gram est fondée sur l'action
successive d'un colorant d'Aniline, le cristal violet, d'iode puis d'un
mélange d'alcool et d'acétone. Dans un premier temps, le colorant
pénètre dans la paroi et le cytoplasme. Dans un second temps,
l'iode réagit avec le colorant et le rend insoluble. La
perméabilité plus grande des bactéries à
Gram négatif à l'alcool permet la
décoloration. Les bactéries à
Gram positif restent colorées en
violet ou mauve. Une contre-coloration (par
exemple en rose) permet de visualiser à nouveau, les
corps cellulaires des bactéries à Gram négatif.
1.1.4.1. MATERIELS
· Lames
· Colorants (VLAF) V :
Violet de Gentiane L: Lugol
A: Alcool + Acétone F:
Fuchsine
1.1.4.2. METHODE
> Réaliser un frottis ou un étalement ;
> Fixer la préparation à la flamme,
sécher soigneusement puis laisser refroidir la lame ; > Immerger les
lames dans la solution de Cristal Violet pendant 1mm ;
> Lavage à l'eau en transvasant les lames ;
> Immerger les lames dans du Lugol en les agitant ;
> Laver à nouveau à l'eau ;
> Décolorer jusqu'à disparition de la
couleur violette dans l'alcool en faisant couler goutte à goutte sur la
lame inclinée ou en immergeant les lames pendant une dizaine de secondes
dans le décolorant.
> Laver à l'eau.
> Contre colorer avec la solution de fuchsine diluée
pendant 20 à 30 secondes.
> Laver à l'eau et sécher à l'air.
> Observer à l'objectif X100, en immersion avec de
l'huile.
1.1.4.3. RESULTATS
Les bactéries gram + sont colorées en violet, les
bactéries gram - sont colorées en rose, ceci étant du
à une différence de composition de la paroi.
Lorsque l'on colore peu de lames, plutôt que d'immerger
les préparations, on peu les recouvrir de colorants. Le
décolorant doit être changé chaque jour.
1.2. L'ANTIBIOGRAMME
Un antibiogramme est une technique de
laboratoire visant à tester la sensibilité d'une souche
bactérienne vis-à-vis d'un ou plusieurs antibiotiques
supposés ou connus.
Le principe consiste à placer la culture de
bactéries en présence du ou des antibiotiques et à
observer les conséquences sur le développement et la survie de
celle-ci. On peut par exemple placer plusieurs pastilles imbibées
d'antibiotiques sur une souche bactérienne déposée dans
une boîte de Pétri. Il existe trois types d'interprétation
selon le diamètre du cercle qui entoure le disque d'antibiotique :
souche ou bactérie sensible, intermédiaire ou
résistante.
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