V. Etude de l'activité antioxydante: Test DPPH
Différentes techniques sont employées pour
mesurer l'activité antioxydante des extraits et des huiles essentielles
des plantes. Dans notre étude, on s'est basée, pour
l'évaluation de cette activité, sur la mesure de
l'activité antiradicalaire par la méthode du DPPH.
? Principe
Le test DPPH, le radical libre synthétique
2,2-diphenyl-1-picryle-hydrazyle, est le procédé le plus
utilisé dans l'évaluation de l'activité antioxydante. Le
DPPH est caractérisé par coloration violette en cas d'absence de
l'antioxydant. En contact d'antioxydants, la couche électronique de ce
radical est saturée d'où la disparition de sa coloration
violette.
Cette décoloration représente l'aptitude de
l'extrait de la plante à piéger ce radical (figure 16) (Akrout et
al., 2009).
Figure 16: Mécanisme d'action d'un
antioxydant (Akrout et al., 2009)
? Mode opératoire
L'activité antiradicalaire est mesurée selon la
méthode de Hanato et al. (1988). La solution DPPH.
(0,2 mM) est obtenue en dissolvant 7.8mg de DPPH. dans 100 ml de
méthanol. 250 ul de cette solution sont additionnés à 1 ml
d'extrait/huile essentielle à différentes concentrations.
31
Après une agitation vigoureuse du mélange, il est
conservé au repos pendant 30 minutes à l'obscurité.
L'absorbance est mesurée à 517 nm l'aide d'un
spectrophotomètre UV visible en se référant à un
témoin sans extrait.
Selon Rashid et al. (2010) L'activité antiradicalaire est
estimée en pourcentage d'inhibition grâce à la formule
suivante :
PI = (DO témoin - DO échantillon / DO
témoin)* 100
? PI : pourcentage d'inhibition
? DO témoin : lecture de l'absorbance du témoin
? DO échantillon : lecture de l'absorbance de la solution
de l'échantillon
La courbe représentant la variation de l'absorbance en
fonction de la concentration permet de déterminer la valeur de
CI50 (concentration correspondant à 50 % d'inhibition,
exprimée en ug.ml-1).
La valeur de CI50 la plus faible correspond
à l'efficacité de l'extrait la plus élevée. Le
témoin positif est le BHT : 3, 5-
ditertiobutyl-4-hydroxytoluène.
L'étude quantitative et qualitative des huiles
essentielles extraites à partir des plantes aromatiques et
médicinales permet leur valorisation afin de les cibler selon leurs
rendements, leurs compositions et leurs activités pour de futures
applications.
? Analyse statistique
Dans le présent travail, Le traitement statistique des
données est réalisé à l'aide du logiciel SPSS 18
(par la méthode ANOVA).La comparaison des moyennes a été
effectuée par le test de comparaison multiple de Newman-Keuls au seuil
de 5% (la différence est significative pour une valeur de p<0,05).
32
| 
