II.1.3. Procédures de contrôle de la
qualité du biofertilisant rhizobial
Le contrôle de la qualité des biofertilisants
rhizobiaux est basé sur trois types de test : - Test de culture
Mère
- Test de Bouillon
- Test de la tourbe (support)
a. Test de culture Mère
Au niveau de ce test, les aspects suivants doivent être
vérifiés : La croissance, la pureté et la coloration Gram
négatif des bactéries (Patiyuth et al., 2006).
b. Test de Bouillon
Les qualités suivantes des échantillons de
bouillon doivent être vérifiées:
I pH : Si le pH du bouillon diminue, cela signifie la
présence de contaminants.
I Coloration Gram négatif
I Densité optique : Suite à la
croissance des rhizobiums le bouillon de culture deviendra trouble au bout de
3-4 jours. Cette turbidité, ou la densité optique (DO) est
mesurée en utilisant un spectrophotomètre (à 540 nm). La
valeur de DO corrèle avec le nombre de cellules.
I Nombre total : en utilisant Petroff-Hausser une
chambre de comptage pour déterminer le nombre total des cellules viables
et mortes.
I Nombre viable : Le nombre de cellules vivantes est
pris en compte par des procédés de propagation sur plaque de
diffusion en faisant des dilutions en série 10 - 1, 10 - 6 ou 10 - 7
(dépendent de la concentration). Ensuite, trois échantillons
répétés de 0,1 millilitre du bouillon 10 - 6 et 10 - 5
sont répartis sur les plaques contenant : Extrait de levure + mannitol +
gélose rouge (congo). Les plaques sont incubées à (28 - 30
° C) ou à une température ambiante pendant 7 jours. Les
colonies de cellules de rhizobium sont rondes et à bord lisse. Elles
sont de couleur blanche et n'absorbent pas la couleur rouge.
9 | I NAT
Calcul du nombre de rhizobiums par ml :
nombre de colonies x facteur de dilution
Nombre de cellules /ml =
Volume de l`inoculum
c. La tourbe
Pour la tourbe, on vérifie :
? Le pH : Maintenir le pH neutre pour l'inoculant.
Étant donné que la tourbe est acide, le pH doit être
augmenté avec du CaCO3.
? L'humidité : La teneur optimale en
humidité de la tourbe-inoculant est comprise entre 40 - 50%. A basse
humidité les rhizobiums vont mourir rapidement. Si l'humidité est
élevée, l'inoculant peut coller au sac en plastique et, par
conséquent, détériore la croissance des rhizobiums.
? Nombre Viable : Le nombre de rhizobiums viables est
déterminé par la
méthode de diffusion-plaque comme dans l'essai de
bouillon.
La révélation des infections chez les plantes
peut se faire par une méthode indirecte connue par la méthode du
nombre le plus probable (NPP) suite à la formation des nodules. Elle est
largement utilisée lorsque la tourbe n'est pas stérile.
L'inconvénient de cette technique réside dans la longue
durée de l'obtention de résultat. La lecture des résultats
se fait par le biais des signes où le signe + indique la présence
des nodules et le signe - indique leur absence (Patiyuth et al.,
2006).
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