Chapitre II:
L'utilisation des enzymes hydrolytiques : une
méthode douce pour la récupération de l'hydroxytyrosol
à partir des margines.
Résultats et Discussion
I. Mise en évidence de la bioconversion des
margines moyennant une réaction
enzymatique
I-1 Introduction
L'hydroxytyrosol est le majeur composé
phénolique naturel des margines (Bonnin et al., 2002). Il est
inséré dans l'oleuropéine aglycone et il est obtenu par sa
libération suite à une hydrolyse des ces glucosides durant le
stockage et la presse des olives, due à l'action des estérases
extracellulaires ou à une catalyse acide (Romero et al., 2002).
De plus ce composé est libéré suite à l'hydrolyse
de l'hydroxytyrosol 4-13-D-Glucoside suite à l'action de 13-glucosidase,
dont les margines présentes une richesse considérable en ce
composé (Romero et al., 2002). Depuis, l'hydrolyse enzymatique
des margines par le jus de culture d'A. niger a été
étudiée dont le but de l'enrichissement de ces margines en
hydroxytyrosol. L'évaluation du procès enzymatique s'avère
nécessaire pour la récupération du maximum d'un tel
produit (Fig. 20).
Action de l'estérase
Action de ?-glucosidase
94
Oleuropéine Hydroxytyrosol glycoside
Hydroxytyrosol
Figure 20 : Proposition d'hydrolyse de
quelques polyhénols des margines
par le jus de culture d'A.
niger.
I-2 Hydrolyse enzymatique des margines par la culture d'A.
niger
I-2-1 Effet du substrat sur la biotransformation en
hydroxytytrosol
La première tentative de l'enrichissement de
l'hydroxytyrosol récupéré à partir des margines a
été portée sur l'extraction à l'acétate
d'éthyle puis à l'exposition de l'extrait à une
activité hydrolytique par les enzymes d'A. niger. Pour cette
raison, la fraction organique récupérée par l'extraction
à l'acétate d'éthyle est séchée par le
rotavapor puis dissoute dans un
95
Résultats et Discussion
volume fixe d'eau distillée. La deuxième et la
troisième alternatives s'intéressent à l'exposition des
margines brutes et la fraction résiduelle (margines obtenus après
une extraction à l'acétate d'éthyle) à une
hydrolyse enzymatique par le jus de culture d'A. niger de 5 jours de
culture qui est utilisé pour des réactions enzymatiques des trois
échantillons préparés pendant deux heures. Ces
réactions enzymatiques préliminaires sont réalisées
par le contenu de culture toute entière (c'est-à-dire sans
séparation de mycélium par filtration). Cette biocatalyse
enzymatique a une activité â-glucosidase de 3000 UI/ml (Fig. 16b).
La concentration en phénols totaux dans la fraction phénolique,
la fraction résiduelle ou épuisée et les margines brutes
sont de 1,2 ; 4,6 et 5,8 g/l, respectivement (Tableau 10). Après le
traitement hydrolytique, ces concentrations croient à 1,5 ; 6,2 et
7,1g/l, respectivement (Tableau 10). La transformation en phénols totaux
contenus dans les margines brutes et la fraction résiduelle est due
à la mobilisation des composés aromatiques à partir des
complexes phénoliques. Néanmoins, pour le cas de la fraction
phénolique la légère augmentation des phénols
totaux dans cette dernière est peut être due à l'addition
de jus de fermentation qui est riche en composés phénoliques issu
de l'hydrolyse du son de blé (Ishii, 1997 ; Williamson et al., 1998). Ce
résultat indique que la fraction résiduelle libère une
large quantité de phénols libres. Initialement, son contenu
phénolique est de 4,6 g/l et croît après le traitement
hydrolytique à 6,2 g/l, ceci indique la libération de
phénols libres actifs par les enzymes fongiques. Cet enrichissement en
contenu phénoliques peut améliorer l'activité antioxydante
des margines particulièrement, si le phénol libéré
est l'hydroxytyrosol.
Tableau 10: Le contenu en phénols totaux
et la concentration d'hydroxytyrosol de la fraction organique, la fraction
épuisée, les margines brutes (fraîches) et les margines
acidifiées avant et après traitement hydrolytique par la culture
entière d'A. niger.
|
Phénols (g/l)
|
Hydroxytyrosol (g/l)
|
|
Traitement hydrolytique
|
Avant
|
Après
|
Avant
|
Après
|
|
Fraction phénolique
|
1,20#177;0,5
|
1,50#177;0,5
|
0,05#177;0,005
|
0,15#177;0,05
|
|
Fraction épuisée
|
4,60#177;0,7
|
6,20#177;0,8
|
0,02#177;0,005
|
0,75#177;0,15
|
|
Margines brutes fraîches
|
5,80#177;0,65
|
7,10#177;0,75
|
0,05#177;0,005
|
0,56#177;0,15
|
|
Margines acidifiés (pH 2)
|
6,40#177;0,85
|
-
|
0,18#177;0,06
|
-
|
|
|
