Bioconversion enzymatique des composés phénoliques des effluents issus de l'extraction d'huile d'olive: une voie prometteuse de valorisation par la production de l'hydroxytyrosol naturel

III- Caractérisation de la Ji-glucosidase d'A. niger

n

_Ccen

_{Avit stse}

III-1 Détermination de pH optimum

L'étude caractéristique du jus enzymatique a été développée afin de déterminer le pH

optimum de l'activité 3-glucosidase. L'enzyme est testée dans un large domaine de pH (de 2 à 10). Conformément à la Fig 17a les résultats montrent une meilleure activité pour les pH acide que pour les pH alcalin. A pH 4,8 l'enzyme montre 100 % d'activité. Cependant, une négligeable activité est obtenue pour les pH de 7 à 10. Donc la 3-glucosidase obtenue est active dans des environnements acides de pH allant de 4 à 5. Ceci est assez avantageux pour des applications industrielles par cette enzyme et notamment pour le traitement des margines.

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Résultats et Discussion

III-2 Détermination de la température optimale

L'étude thermique de l'activité enzymatique a été également effectuée. La température optimale de la préparation enzymatique est déterminée à pH 4,8. Une variation de température de 25 °C à 100 °C a été choisie. Les résultats relatifs à cette étude thermique sont collectés et présentés sur la Fig. 17b. La préparation enzymatique est plus active à 50 °C et l'activité 13-glucosidase décroit à 40 % à 70 °C (Fig. 17b). Donc cette enzyme s'avère non thermophile. La stabilité thermique de la 13-glucosidase est déterminée par incubation du jus enzymatique à trois différentes températures à savoir : 4 °C, 25 °C et 50 °C. L'activité résiduelle est déterminée après 1 heure d'intervalle durant 48 heures d'incubation. Le résultat est résumé dans la Fig. 17c. D'après ce résultat, la conservation à 4 °C garde la bonne activité de la 13-glucosidase durant la période d'étude. Ainsi, la demi-vie de l'enzyme est de 24 heures à 50 °C. A la température optimale de 50 °C au bout de 3 h, on trouve encore 75% d'activité résiduelle. Cette enzyme est alors non thermostable mais elle est convenable à la température optimale pour des applications en bioconversion.

¹⁰⁰

⁸⁰

⁶⁰

⁴⁰

²⁰

⁰

b

¹²⁰

⁸⁰

⁴⁰

⁰

¹²⁰

a

^{2 3 4 4,8 5 6 7 8}

^pH

^{25 30 40 50 60 70 80 100}

^{Température (°C)}

^{4 °C 25 50 °C}

c

^{0 1 2 3 4 6 24 48}

^{Temps (h)}

¹⁰⁰⁰⁰

⁸⁰⁰⁰

⁶⁰⁰⁰

⁴⁰⁰⁰

²⁰⁰⁰

Figure 17 : Caractérisation de la 13-glucosidase d'A. niger: Influence du pH (a), Influence de la température (b), stabilité du jus enzymatique à 4°C, 25 °C et 50 °C (c).

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