II.3.2. Activité antibactérienne des
composés phénoliques
Mode opératoire
La méthode sur le milieu gélosé
utilisée est celle citée par (Hayouni et al,
2007)
- A l'aide d'une pince stérile des disque de papier
Whatman (de 6mm de diamètre)
sont imbibés dans 10 ul des extraits (extrait
phénolique reconstitué dans le MéthanolEau ( 80 : 20), et
extrait phénolique reconstitué dans le DMSO ) puis
déposés sur la gélose M-H ensemencée de suspension
bactérienne par écouvillonnage un contrôle négatif a
été effectué en utilisant un disque de papier
trempé dans 10 ul de DMSO et Méthanol --Eau (80 : 20) pour
vérifier l'activité éventuelle de ces solvants contre les
souches bactériennes testées.
- Laisser diffuser durant 1 heure.
- Incubation à 37 C° durant 24 heures.
L'évaluation de l'activité antibactérienne
des composés phénoliques est également effectuée
sur milieu liquide , selon le protocole de Bosio et al, (2000)
:
- préparation de la suspension bactérienne, mesurer
la densité optique.
- à l'aide d'une pince stérile saisir un disque de
papier Whatman (de 6mm de diamètre)
et l'imprégné dans 10 ul de chaque extrait, le
déposer dans le tube contenant la suspension bactérienne.
- incuber à 37C° durant 18 à 24heures, puis
mesurer la densité optique (DO). - Les tests sont effectués une
seule fois.
II.3.3. Activité antifongique de l'huile essentielle
et composés phénoliques de J.phoenicea
Dans le cadre de notre étude, On a essayé trois
méthodes pour l'activité antifongique de l'HE de J.phoenicea
et une méthode pour les composés phénoliques :
II.3.3.1. Méthode des puits
Dans cette méthode le milieu utilisé est la
gélose Sabouraud. La procédure suivie est celle d'Ismail
et al (2008) :
- Des spores d'Aspergillus flavus d'une semaine
sont mises en suspension, 1mL de la
suspension est ensemencée sur gélose Sabouraud par
inondation.
- creuser des puits de 6 mm de diamètre à l'aide
d'une pipette Pasteur stérile. Dans le
but d'éviter la diffusion des extraits sous la
gélose, 20 uL de la gélose blanche est déposée dans
chaque puits (Fig. 10).
- La première boite : Dans deux puits, déposer 50
uL de l'HE.
- La deuxième boite : dans un puits déposer 50 uL
d'extrait phénolique reconstitué dans le MeOH- Eau (80 :20), et
le deuxième puits, 50 uL d'extrait phénolique reconstitué
dans le DMSO.
- Laisser diffuser durant 1heure
- Incubation à 28 C°, durant 24 heures
puis 48 heures.
- Les tests sont effectués en double pour l'HE.
Ensemencement de la suspension sporale sur le milieu Sabouraud
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(2)
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Puits de 6mm de
diamètre préformés
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Réalisation des puits de 6 mm de diamètre sur le
milieu ensemencé et injecter 50 ul de l'extrait dans chaque puits
Zones d'inhibition
Mesure des diamètres des zones d'inhibition après
24 - 48 h et 7 jours d'incubation
Figure N ° 10 : Illustration de la
méthode des puits. II.3.3.2. Méthode des
disques
Le protocole suivi est celui d'El-Sawi et al
(2007) avec une légère modification (gélose
Sabouraud à la place de la gélose PDA) :
- Ensemencement d'une gélose Sabouraud avec 1mL de la
suspension de spores d'Aspergillus flavus par inondation.
- Des disques de papier Whatman de 7 mm de diamètre sont
imprégnés dans 20 uL de l'HE, et déposer
stérilement sur la gélose.
- Laisser diffuser durant 1 heure.
- Incubation à 28 C°, durant 24 heures, 48 heures
puis 7 jours.
- Les tests sont effectués en double. II.3.3.3.
Microatmosphére
La démarche suivie est celle de Pibiri (2006)
:
- Ensemencement d'une gélose Sabouraud avec 1 mL de la
suspension de spores
d'Aspergillus flavus par inondation.
- Des disques de papier Whatman de 7 mm de diamètre sont
imprégnés dans 20 uL de
l'HE, et déposer stérilement sur le couvercle de la
boite. Laisser diffuser durant 1heure - Incuber à 28 C°,
durant 48 heures.
- Le test est effectué une seule fois.
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