III.2.3 Dosage du LDL-Cholestérol.
Principe du dosage :
Les lipoprotéines de basse densité sont
précipitées par addition d'héparine à leur point
isoélectrique (pH 5.04). Les HDL et les VLDL restent dans le surnageant
et peut être déterminée par des méthodes
enzymatiques.
LDL Cholestérol = Cholestérol total #177;
Cholestérol du surnageant.
Mode opératoire :
Préparation des réactifs : Réactif
précipitant R1 et Standard LDL-cholestérol R4 sont priJts
à l'emploi.
Réalisation du test :
- Longueur d'onde : 500nm.
- Température : 37 0C, 30°C ou
25°C.
- Cuvette (trajet optique) : 1 cm.
- Calibration de zéro du spectrophotomètre : Blanc
réactif.
Tableau XII : Procédure de
précipitation.
|
Macro-méthode
|
Semi micro-méthode
|
Echantillon
|
100ul
|
50ul
|
LDL précipitant R1
|
1000ul
|
500ul
|
|
- Bien mélanger et incuber pendant 10 minutes à la
température ambiante. - centrifuger pendant 15 minutes à 4000
TPM.
- Reprendre le surnageant limpide qui est stable pendant une
heure pour déterminer le cholestérol dans le surnageant avec la
solution de travail du cholestérol total et son standard de 200mg/dl.
Tableau XIII : Mode opératoire pour le dosage du
LDL-cholestérol.
|
Blanc réactif
|
Etalon
|
Echantillon
|
Eau distillée
déminéralisée
|
50ul
|
-
|
-
|
Etalon R4 (200mg/dl)
|
-
|
50ul
|
-
|
Surnageant
|
-
|
-
|
50ul
|
Solution de travail
(Cholestérol total)
|
1000ul
|
1000ul
|
1000 ul
|
|
- Bien mélanger et incuber pendant 5 minutes à
37°C.
- Lire l'absorbance de l'échantillon ou de
l'étalon contre le blanc réactif à 500 nm. Cette
réaction est stable pendant une heure.
Calcul de la concentration du cholestérol dans le
surnageant :
D. O echantillon
C. éch. ' D. O etalon x Conc. etalo
ou
La concentration du cholestérol dans le surnageant=
D.OECH. x 1920 à 546nm (ou D.OECH.x 1265 à
500nm). Le résultat est exprimé en mg/dl.
LDL cholestérol= cholestérol total #177;
cholestérol dans le surnageant. Tableau XIV : Valeurs
attendues.
|
Conc. de LDL-Cholestérol
|
mg/dl
|
mmol/l
|
|
Optimale
|
< 100
|
< 2,59
|
|
Limite moyenne
|
100 #177; 129
|
2,59 #177; 3,35
|
|
Limite haute (alarme)
|
130 #177; 159
|
3,36 #177; 4,12
|
|
Risque élevé
|
160 #177; 189
|
4,13 #177; 4,89
|
|
Risque très élevée
|
>190
|
>4,90
|
| 
