Recherche de nouvelles souches fongiques productrices d' antibiotiques à partir du sol et des concrétions sédimentaires des grottes de Aà¯n Fezza.

2- MATERIELS ET METHODES :

2-1- Isolement et identification :

2-1-1- Echantillonnage :

On a réalisé au niveau de chaque station, 1 à 3 points de prélèvements « P » au moyen de 10 échantillons par point. Ces prélèvements effectués entre le mois de Novembre et Mars (2004-2005) ont été pris à partir du sol et des concrétions sédimentaires.

Ceux du sol, ont été effectués par des spatules stériles ; et ceux des concrétions sédimentaires, par frottement à la surface avec des écouvillons stériles.

2-1-2- Examen direct :

Cet examen a été réalisé a l'oeil nue au moment du prélèvement, afin de détecter la présence du mycélium au niveau des points de prélèvement, ainsi d'autre caractéristiques (la flore, la faune...etc.).

2-1-3- Isolement et sélection des souches :

a- Milieu de culture :

On a utilisé dans nos isolements, différents milieux de culture :

* CDA (Czapek Dextrose Agar)

* ISP₂ (International Streptomyces Project)

* MEA (Malt Extract Agar)

* MYEA (Malt Yeast Extract Agar)

* PDA_a (Potatoes Dextrose Agar acidifié)

* PDA_R (Potatoes Dextrose Agar + Rose Bengal)

* SGA (Soil Glucose Agar)

* YSA (Yeast Starch Agar).

Afin d'inhiber la croissance des bactéries, ainsi ralentir la croissance de certains champignons envahissantes on a utilisé des milieux additionnés d' Acide lactique, Rose Bengal, Amphotericine B et Ampicilline.

La préparation de ces milieux a été effectuée en référant à Ramirez (1982), Botton et al (1990) et Khelil (1997). 

b- La mise en culture :

On a additionné 5 g de chaque échantillon de sol à 45 ml d'eau physiologie  homogénéisé ensuite, pendant 30 mn à l'aide d'un agitateur magnétique, puis dilué de 10 en 10 ( 10^-2 à 10^-3 ).

Les solutions mères des échantillons des concrétions sédimentaires, ont été préparées par l'imprégnation des écouvillons dans 7 ml d'eau physiologie, agitées ensuite, pendant 30 mn à l'aide d'un Vortex.

On a étalé 1 ml des suspensions sur les milieux d'isolements précédemment coulés en boites de Pétri. L'incubation a été effectuée à 25°C pendant 7 à 15 jours.

c- Purification et conservation :

Les souches isolées ont été purifiées par repiquage successif sur le même milieu d'isolement. Les souches pures ont été repiquées sur le même milieu coulé en pente dans des tubes à vis, puis conservés à 4°C.