VI-3-1- Coloration de Gram :
La coloration de Gram se fait selon le protocole de Hans
Christain Gram, il s'agit d'une coloration qui permet de mettre en
évidence les propriétés de la paroi bactérienne, et
d'utiliser ces propriétés pour les distinguer et les classer.
Les bactéries Gram + sont celles qui ont une membrane
qui possède beaucoup d'acide techoique et peu de lipides, l'alcool ne
traverse pas cette membrane et le cytoplasme reste violet.
Les bactéries dont la membrane ne possède pas
beaucoup d'acide techoique et de lipides, l'alcool traverse la membrane et lave
le violet de gentiane. Pendant la coloration suivante a la fuchsine de Ziehl,
le cytoplasme se colore en rose. Ces bactéries sont des bactéries
Gram- (Hart et al., 2002).
VI-4- Méthode d'analyse physico-chimique :
VI-4-1- pH :
La mesure de pH est réalisée à l'aide d'un
pH-mètre.
VI-4-2- Humidité :
La méthode consiste à peser le poids des
échantillons avant et après séchage dans l'étuve
à 105 °C et pendant 14 heures.
VI-4-3-Nitrates :
Les nitrates sont dosés par la méthode de
salicylate de sodium. Les nitrates en présence de salicylate donnent le
paranitro-salicylate de sodium coloré en jaune.
La méthode de dosage consiste à prendre 5 ml du
l'extrait déjà préparé, on ajoute 5 ml de l'eau
distille ainsi qu'1 ml du salicylate de sodium. La solution obtenue est
évaporée dans un bain marie à une température de
80°C. Après on la laisse refroidir et on ajoute 2 ml d'acide
sulfurique concentre (qui doit être dissout totalement).
Après 10 min, on ajoute 15 ml d'eau distille puis 15 ml
de tartrate double de Na et K qui développe une coloration jaune,
après on fait la lecture au spectrophotomètre à une
longueur ë= 415nm et on note la densité optique correspondante.
L'étape suivante consiste à préparer une
solution déjà contaminé par les nitrates connaissant la
concentration et procéder au même protocole déjà
cité et ensuite on note la nouvelle densité.
La méthode qui nous permettra de déterminer la
concentration de notre échantillon s'appelle méthode des ajouts
dosés, qui n'est autre qu'une simple relations de trois
c'est-à-dire qu'à chaque densité optique correspond
à une concentration sachant qu'on a déjà
préparé une solution de concentration en nitrate connue.
NB : pour toutes les mesures effectuées par
spectrophotomètre, nous avons adopté la méthode des ajouts
dosés et pour chaque manipulation, nous avons préparé des
solutions contaminées par les éléments recherchés
avec une concentration connue.
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