5- Effet de la
température sur l'activité de la LDC
L'activité spécifique a été
mesurée à différentes températures à pH
8.
Les résultats portés sur la figure 11 montrent
que la LDC est pleinement active entre 40°C et 60°C. La
température optimale est de 60°C. La LDC est inactivée
au-delà de 65°C.
Figure 11 : Effet de la température
sur l'activité de la LDC. L'activité lipasique est
mesurée à pH 8 sur une émulsion de tributyrine à
différentes températures.
6- Stabilité de la
LDC en fonction de la température
L'effet de la température sur la stabilité de la
LDC est présenté sur la figure 12, qui montre que l'enzyme reste
stable et actif après une incubation de 15 min à une
température inférieure à 50°C. A cette
température 80% de l'activité lipasique est mesurée.
Au-delà de 55°C la LDC est totalement inactivée quand elle
est incubée en solution. Par contre quand l'enzyme est incubé en
présence de son substrat (figure 11) il reste stable jusqu'à
60°C.
Ce résultat confirme que la présence de substrat
protège l'enzyme de l'effet de la température. Ce
phénomène est bien connu chez les enzymes qui agissent en milieu
hétérogène.
Figure 12 : Effet de la température
sur la stabilité de la LDC. L'enzyme est préincubé
à différentes températures pendant 15 min.
L'activité lipasique est mesurée sur une émulsion de
tributyrine à pH 8 et à 60°C.
7- Effet de calcium sur
l'activité de la LDC
L'activité spécifique a été
mesurée en présence de concentrations croissantes de calcium. La
figure 13 montre que la LDC est capable d'agir en absence de calcium. En effet,
en présence de 10 mM d'EDTA, la LDC présente son activité
maximale sur une émulsion d'huile d'olive ou de tributyrine comme
substrat.
TC4
HO
Figure 13 : Effet de calcium sur
l'activité de la LDC. L'activité lipasique est mesurée
à pH 8 et à 60°C sur une émulsion de tributyrine ou
d'huile d'olive. L'étoile indique l'activité de la LDC
mesurée en présence de 10 mM EDTA.
8- Effet d'un
composé amphipatique sur l'activité de la LDC
Dans le but d'avoir une idée sur le pouvoir de
pénétration de la LDC, nous avons mesuré l'activité
lipasique en présence d'un composé amphipatique naturel NaDC.
La figure 14 montre que la LDC perd son activité au fur
et à mesure qu'on augmente la concentration du NaDC. L'inactivation
totale est obtenue à 2 mM de NaDC. L'effet inhibiteur de NaDC dans le
système tributyrine/eau ou huile/eau peut être relié
à un changement de la qualité de l'interface qui diminue le
pouvoir de pénétration de la LDC. L'enzyme est alors
relargué dans la phase aqueuse (Gargouri et al., 1986).
Figure 14 : Effet de NaDC sur
l'activité de la LDC. L'activité lipasique est mesurée
à pH 8 et à 60°C sur une émulsion d'huile d'olive ou
de tributyrine en présence de concentrations croissantes de NaDC.
L'addition de colipase pancréatique de dromadaire ne
permet pas de réactiver la LDC ce qui est en faveur de l'absence
d'homologie structurale entre la lipase pancréatique et la lipase
purifiée à partir de l'hépatopancréas de crabe.
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