4.8.3. Lecture
Après incubation, la lecture de la galerie doit se
faire en se référant au tableau de lecture (Annexe
03).
> Noter sur la fiche les résultats de toutes les
réactions spontanées (GLU, ADH, URE, ESC, GEL, PNPG).
> La révélation des 2 testes NO3 et TRP doit
se faire en mettant les tests d'assimilation à l'abri d'une
contamination par l'aire, pour cela placer le couvercle de la boite
d'incubation au-dessus de ces tests pendant la période de
révélation ;
> Ajouter une goutte de réactifs NIT1 et NIT 2 dans la
cupule NO3 ;
> Ajouter une goutte de réactif JAMES dans la cupule
TRP.
2.9. Antibiogramme (Comité de l'antibiogramme
de la société française de microbiologie,
2021)
2.9.1. Principe
L'antibiogramme a été réalisé
selon la méthode de diffusion sur milieu gélosé (Muller
Hinton), méthode recommandée par le CA-SFM. Cette méthode
est utilisée pour déterminer la sensibilité ou la
résistance des bactéries aux antibiotiques.
36
Matériel et Méthodes
2.9.2. Technique
A. Préparation de l'inoculum
> A partir d'une culture pure de 24H sur milieu
d'isolement, racler à l'aide d'une anse de platine quelques colonies
bien isolées et parfaitement identiques ;
> Décharger l'anse dans 5 à 10 ml d'eau
physiologique stérile à 0,9% ;
> Bien homogénéiser la suspension
bactérienne, son opacité doit être équivalente
à 0,5 Mc Farland ;
> L'inoculum peut être ajusté en ajoutant,
soit de la culture s'il est trop faible ou bien de l'eau physiologique
stérile s'il est trop fort.
B. Ensemencement
> Tremper un écouvillon stérile dans la
suspension bactérienne ;
> L'essorer en le pressant fermement (en le tournant) sur la
paroi interne du tube, afin de le
décharger au maximum ;
> Frotter l'écouvillon sur la totalité de la
surface gélosée (Muller-Hinton), sèche, de haut en bas,
en stries serrées ;
> Répéter l'opération deux fois, en
tournant la boîte de 60° à chaque fois sans oublier de
faire
pivoter l'écouvillon sur lui-même ;
> Finir l'ensemencement en passant l'écouvillon sur la
périphérie de la gélose.
C. Application des disques
> Déposer les disques d'antibiotiques à l'aide
d'une pince stérile suivant la Figure6 ;
> Presser chaque disque d'antibiotique à l'aide de
pince, pour s'assurer de son application. Une fois appliqué le disque ne
doit pas être déplacé ;
> Laisser les boites 20 mn à la température
ambiante pour permettre une pré-diffusion de l'antibiotique, puis les
incuber pendant 18-24 H à 37°C #177;1°C.
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Matériel et Méthodes
ATM
IPM
CAZ
AK
TCC
CIP
PRL
Figure 6. Disposition des antibiotiques sur
les boîtes d'antibiogrammes.
AK: Amikacine, CIP:
Ciprofloxacine, PRL : Pipéracilline, CAZ :
Ceftazidime, ATM : Aztréonam
IPM
:Imipénème ,TCC : Ticarcilline/ acide
clavulanique
2.9.4. Lecture
> Les résultats ont été
interprétés selon les critères du comité de
l'antibiogramme de la société
française de microbiologie (CA-SFM, 2021)
;
> Mesurer avec précision les diamètres des zones
d'inhibition à l'aide d'un pied à coulisse ;
> Comparer les résultats obtenus aux valeurs critiques
figurant dans les tables de lecture
correspondante, ensuite la bactérie est classée
dans l'une des catégories: sensiblerésistante ou
intermédiaire(Annexe 4 ).
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