Antibiorésistance des bacilles à gram négative non fermentant ressponssable des mammites en élevages bovins laitiers dans la wilaya de Chlef

2.7.2. Technique

A l'aide d'une pipette Pasteur boutonnée, une colonie est déposée sur un disque oxydase placé sur

une lame.

2.7.3. Lecture

La présence d'une cytochrome-oxydase se traduit, pendant 20 à 60 secondes, par l'apparition d'une

coloration rouge virant rapidement au violet foncé

2.8. Galerie API 20NE ( www.biomerieux.com)

2.8.1 Principe

Le principe consiste à inoculer dans les microtubes, à l'aide d'une pipette pasteur, une suspension bactérienne homogène. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs.

Cette technique est utilisé pour déterminer certains caractères biochimiques des bactéries Gram négatif non fermentants tel que : la production des sucres (mannose, glucose...), assimilation d'azote...

2.8.2 Technique

A. Préparation de la galerie

? Réunir fond et couvercle d'une boite d'incubation et répartir environ 5ml d'eau physiologie

dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide ;

? Inscrire la référence de la souche sur la languette latéral de la boite (ne pas inscrire la

référence sur le couvercle celui-ci pouvant être déplacé lors de la manipulation) ;

? Sortir la galerie de son emballage individuel ;

? Placer la galerie dans la boite d'incubation.

B. Préparation de l'inoculum

? Ouvrir une ampoule d'API NaCl 2ml de la notice du produit ou utiliser un tube contenant 2ml de la solution saline à 0,85 sans additif ;

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Matériel et Méthodes

> A l'aide d'une pipette pasteur, prélever 1 à 4 colonies de morphologie identique, par aspiration ou par touche successives, utiliser préférentiellement des cultures jeunes (18-24) heures ;

> Réaliser une suspension d'opacité «égale à 0,5 de Mc Farland, cette suspension doit être utilisée extemporanément.

C. Inoculation de la Galerie

> Remplir les tubes (et non les cupules) des tests NO3 à PNPG avec la suspension précédent en utilisant la pipette ayant servi au prélèvement, pour éviter la formation des bulles au fond des tubes, poser la pointe de la pipette sur le côté de la cupule, en inclinant légèrement la boite d'incubation vers l'avant ;

> Remplir tubes et cupules des tests GLU à PAC en veillant à créer un niveau horizontal ou légèrement convexe, mais jamais concave, des cupules incomplètement remplier ou trop remplier peuvent entrainer des résultats incorrect ;

> Remplir d'huile de paraffine les cupules des trois tests (GLU- ADH- URE) pour former un ménisque convexe ;

> Refermer la boite d'incubation et incuber à 29C° pondant 24 heures.