3.1.2 Dosage des Flavonoïdes
Principe
La quantification des flavonoïdes
a été effectuée par une méthode adaptée par
Zhishen et al, (1999) avec le trichlorure d'aluminium et la
soude. Le trichlorure d'aluminium forme un complexe jaune avec les
flavonoïdes et la soude forme un complexe de couleur rose absorbe dans le
visible a 510 nm.
Mode opératoire
Ø 500 ul de l'extrait brut de la poudre de la
tomate/pelure .
Ø Mélangés avec 2 ml d'eau
distillée
Ø Suivis de 150 ul de nitrite de sodium (NaNO2)
à 5%.
Ø Après 5 min, 100 ul de trichlorure
d'aluminium (AlCl3) à 10% (m/v) est rajouté au mélange
.Après 6 min d'incubation à la température ambiante
Ø 1 ml de carbonate de sodium (NaCO3)
à 1 M est additionné. Immédiatement
Ø Le mélange est complètement
agité afin d'homogénéiser le contenu
Ø L'absorbance de la solution de couleur rosâtre
est déterminée à 510 nm contre un blanc.
Préparation de la courbe
d'étalonnage
Une courbe d'étalonnage est
réalisée en parallèle dans les mêmes conditions
opératoires en utilisant de la catéchine comme contrôle
positif.
La teneur en flavonoïdes totaux des extraits de
plante étudiée est exprimée en milligramme (mg)
équivalent de la catéchine par 100 gramme de la matière
végétale sèche (mg EC/100g).
3.1.3 Dosage des Anthocyanes
Le dosage des anthocyanes s'effectue
en utilisant deux propriétés dues à leurs
structures :
- La modification de leurs couleurs en fonction du pH.
- La transformation en dérivés incolores sous
l'action de certains réactifs comme les ions bisulfite.
Principe
La décoloration des anthocyanes
par l'acide sulfureux et les bisulfites alcalins est une réaction qui se
fait à pH 3 jusqu'à pH 1. D'autre part la réaction est
réversible mais uniquement dans le cas des anthocyanines. La
difficulté de la réaction en milieu acide s'explique par le
passage du bisulfite sous forme d'acide sulfureux moins dissocié, avec
diminution de la concentration en ions HSO3 (Ribérau, 1968).
La détection des molécules est assurée par des mesures
spectrophotométrique à 520nm.
Mode opératoire
ü dans un tube à essai, on mélange 1 ml
d'extrait avec 1 ml d'ethanol (solution d'ethanol à 95% acidifiée
à 0.1% d'HCl pur) et 20 ml d'HCl à 35% diluée à 2%
dans l'ED.
ü on prépare des cuves pour le
spectrophotomètre comme suit :
- Cuve A : 5 ml du mélange + 2 ml d'ED
- Cuve B : 5 ml du mélange + 2 ml de bisulfute de
sodium
ü Repos 20 mn
ü Lecture par spectrophotomètre à 520
nm.
On peut exprimer approximativement la variation d'absorbance
(DOA -DOB) par :
C (mg/ml) = (DOA -DOB) x 875
Où :
C : Concentration des anthocyanes en
mg/ml.
DOA : Densité optique de la cuve
A
DOB : Densité optique de la cuve
B
875 : Pente de la droite d'étalonnage
obtenu à partir de malvidine-3 glucoside (Ribérau, 1968).
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