IV -5- Préparation de l'eau physiologique (9
tubes) :
0.81 g NaCl 90 ml
? Dans une erlenmeyer prendre une masse de 0.81 g de NaCl et
ajouter 90 ml de l'eau distillé
Préparation des dilutions à partir de la solution
mère (10-1, 10-2, 10-3,
10-4, 10-5,
10-6).
o Pipeter 1 ml de solution mère et verser le sur le tube
de l'eau physiologique.
o Pipeter 1 ml à partir du tube 1 et verser le sur le
tube de l'eau physiologique.
o Pipeter 1 ml à partir du tube 2 et verser le sur le
tube de l'eau physiologique.
o Pipeter 1 ml à partir du tube 3 et verser le sur le
tube de l'eau physiologique.
o Pipeter 1 ml à partir du tube 4 et verser le sur le
tube de l'eau physiologique.
o Pipeter 1 ml à partir du tube 5 et verser le sur le
tube de l'eau physiologique.
1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
L'échantillon 9m
9ml
ml
Figure 15 : Schéma de
préparation des dilutions.
IV -5-1-Détermination des coliformes totaux :
? prendre 9 tubes de BCPL.
? Pipeter et verser dans chaque tube 1 ml à partir des
dilutions précédentes. ? Incuber les 9 tubes dans une
étuve à T=37°C (la lecture après 48h
Matériels et méthodes
Solution mère
10 ml dans chaque tube 10 ml dans chaque tube 10 ml dans chaque
tube
10 ml BCPL S /C 10 ml BCPL S /C 10 ml BCPL S /C
Test de confirmation :
BCPL positif Repiquage sur l'eau
ea pptée
eptonée
46
Incubation à 37 °C pendant 24 à 48 heures
Résultat
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Présence de coliformes : virage du milieu BCPL du violet
au jaune avec dégagement de gaze
dans la cloche
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Incubation à 44°C pendant 24 heures ajouter 2
à 3 gouttes de kovacs
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Résultat
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Formation d'anneau rouge à la surface
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Présence des Escherichia coli
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Figure 16 : Recherche et dénombrement des
coliformes en milieu liquide (colimétrie) IV -5-2-
Détermination des coliformes fécaux :
? Prendre 9boites de pétri de VRBG.
? Pipeter et verser 2gouttes a partir de chaque dilution :de
l'eau d'entrée (10-1, 10-3,
10-5),l'eau au niveau de décanteur et de la sortie
( 10-2 , 10-4 , 10-6 ) sur
les 9 boites.
? Incuber les 9 boites dans une étuve à T=44°C
(la lecture après 48 h).
Matériels et méthodes
47
Eau d'entrée eau de décanteur eau de sortie
10-1 10-3 10-5
10-2 10-4 10-6 10-2 10-4
10-6
2goutte
Ajouter environ 20 ml de VRBG, Laisser solidifier sur
paillasse
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Incubation à 44°C pendant 48 heures
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Dénombrer les colonies lenticulaires en masse.
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Figure 17 : Recherche et dénombrement des
coliformes fécaux
IV -5-3-Recherche et dénombrement de la flore
aérobie mésophile :
? Prendre 9 boites de pétri de GN (gélose
nutritif).
? Pipeter et verser 2gouttes a partir de chaque dilution: de
l'eau d'entrée (10-1, 10-3,
10-5), l'eau au niveau de décanteur et de la sortie
( 10-2 , 10-4 , 10-6 ) sur
les 9 boites.
? Incuber les 9 boites dans une étuve à T=30°C
(la lecture après 48 h)
Matériels et méthodes
Ajouter environ 20 ml de gélose GN, Laisser solidifier sur
paillasse
10-1 10-3 10-5
10-2 10-4 10-6 10-2 10-4
10-6
48
L'eau d'entrée l'eau de décanteur l'eau de
sortie
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Incubation à 30 °C pendant 72 heures
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Résultat
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Dénombrer les colonies lenticulaires en masse.
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Figure 18 : Recherche et dénombrement des
germes totaux.
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