b) Dépistage de l'IBR et BVD
Lors du dépistage de chacune de ces deux maladies, tous
les sérums ont été soumis au test ELISA indirect.
· Principe du Test ELISA INDIRECT
Le Kit BVDV-Ab ELISA (ou IBR-Ab ELISA) est conçu pour
détecter les anticorps spécifiques du virus BVD (ou IBR) dans les
échantillons de sérum et de lait. La procédure du Kit est
basée sur un test ELISA indirect en phase solide. Dans la
procédure, les échantillons sont exposés aux
antigènes non infectieux tapissés dans les puits des plaques de
microtitration. La plaque est conçue de telle manière que les
puits des colonnes impaires sont tapissés d'antigène viral et
ceux des colonnes paires d'antigène de contrôle (Figure 4). Les
anticorps anti BVD (ou anti IBR) (s'ils sont présents dans
l'échantillon à tester) se lient aux antigènes dans les
puits. Le conjugué-HRP ajouté ultérieurement forme un
complexe avec les anticorps de la BVD (ou de l'IBR). Le conjugué non
lié est enlevé par rinçage avant d'ajouter une solution de
substrat. Ultérieurement, la couleur bleue qui se développe est
due à une conversion du substrat par le conjugué. Un
résultat positif est indiqué par l'apparition de la couleur
bleue. La réaction est arrêtée par addition d'une solution
stop ; la couleur vire au jaune.
|
AGv
|
AGc
|
AGv
|
AGc
|
AGv
|
AGc
|
AGv
|
AGc
|
AGv
|
AGc
|
AGv
|
AGc
|
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
9
|
10
|
11
|
12
|
|
A
|
T+
|
T+
|
3
|
3
|
7
|
7
|
11
|
11
|
15
|
15
|
19
|
19
|
|
B
|
T+
|
T+
|
3
|
3
|
7
|
7
|
11
|
11
|
15
|
15
|
19
|
19
|
|
C
|
T-
|
T-
|
4
|
4
|
8
|
8
|
12
|
12
|
16
|
16
|
20
|
20
|
|
D
|
T-
|
T-
|
4
|
4
|
8
|
8
|
12
|
12
|
16
|
16
|
20
|
20
|
|
E
|
1
|
1
|
5
|
5
|
9
|
9
|
13
|
13
|
17
|
17
|
21
|
21
|
|
F
|
1
|
1
|
5
|
5
|
9
|
9
|
13
|
13
|
17
|
17
|
21
|
21
|
|
G
|
2
|
2
|
6
|
6
|
10
|
10
|
14
|
14
|
18
|
18
|
22
|
22
|
|
H
|
2
|
2
|
6
|
6
|
10
|
10
|
14
|
14
|
18
|
18
|
22
|
22
|
AGv : Antigène viral (dans les colonnes
impaires)
AGc : Antigène de contrôle (dans les
colonnes paires)
Figure 4 : Configuration
d'une plaque de microtitration sensibilisée
· Lecture et validité du test
La lecture peut se faire à l'oeil nu ou par
spectrophotométrie, où la densité optique (DO) est
mesurée à 450 nm.
La procédure de la manipulation est
détaillée dans l'annexe III.
Dans le cas du test ELISA indirect, avant de conclure quant au
statut de chaque échantillon, il faut vérifier la validité
du test.
Les calculs des résultats sont effectués en 2
étapes comme décrit ci-dessous :
D'abord les valeurs DO corrigées (DO
CORR)
Les valeurs de DO corrigées sont obtenues par
soustraction des valeurs DO dans les puits tapissés par
l'antigène IBR viral aux DO des puits tapissés par
l'antigène de contrôle (Cfr Figure 4) ; d'où,
DOCORRIGEE = DOBVD-DOCONTROLE
Dans le cadre du dépistage de la BVD, pour assurer la
validité des résultats, les valeurs contrôlées
doivent se situer entre les limites suivantes :
Densité optique (DO) du Contrôle positif
> 1,0
Pourcentage de valeurs positives (PP) du
Contrôle négatif = 0,15
Avec PP= Echantillon testé ou
sérum contrôle négatif (DO Corrigée) x100
Contrôle positif (DO
Corrigée)
Dans le cadre du dépistage de l'IBR, pour assurer la
validité des résultats, les valeurs contrôlées
doivent se situer entre les limites suivantes :
DO Contrôle positif >0,5
PP Contrôle négatif = 7%
Il se peut que ces critères ne soient pas remplis, le
test est invalide et on incrimine la technique.
· Interprétation des résultats
Interprétation des résultats (BVD)
|
Echantillon
|
PP
|
Interprétation
|
|
Sérum 10 ìl
|
< 10
>10 et < 25
=25
|
Négatif
Douteux
Positif
|
Interprétation des résultats (IBR)
|
Echantillon
|
PP
|
Interprétation
|
|
Sérum
|
= 7
>8 et < 12
=12
|
Négatif
Douteux
Positif
|
| 
