I.2. Matériel
I.2.1. Matériel
animal
Ont fait objet de cette étude, 132 vaches
inséminées dont 72 vaches dans le département de Tivaouane
et 60 dans celui de Thiès. Parmi ces vaches, 128 sont de race locale
(123 zébus Gobra et 5 Djakoré) ; 4 sont des métisses
F1 issues des inséminations des femelles Gobra avec des semences de
Montbéliarde et Holstein. Ces vaches sont âgées de 4
à 13 ans. En effet, on note 22 vaches âgées de 4 à
6ans, 47 vaches âgées de 7 à 8 ans ,46 vaches
âgées de 9 à 11 et enfin 17 vaches âgées de 13
ans.
Dans ces deux départements, ces animaux évoluent
dans les deux systèmes dont le semi intensif est le plus dominant avec
94 animaux. Le reste évolue dans le système intensif dans lequel
les animaux sont parqués dans les enclos où ils
bénéficient du fourrage à volonté et du
concentré.
Concernant l'état général des vaches, ont
été recensées 51 vaches dont la note d'état
corporel (NEC) varie de 1,5 à 2 et 81 vaches dont la NEC est comprise
entre 2,5 à 3,5.
Les critères d'attribution de la NEC sont
présentés dans l'Annexe 1.
Rappelons que pour adhérer au programme
d'insémination, il y a un certain nombre de conditions à remplir
à savoir : pratiquer la stabulation pour les animaux
sélectionnés, assurer la complémentation et en cas de
nécessité, apporter des soins (déparasitage,
vaccination...) aux animaux.
I.2.2. Matériel technique
I.2.2.1. Matériel de prélèvement
de sang
Nous nous sommes servis de tubes secs (de type VENOJECT
ND), d'aiguilles stériles, des portes tubes, de
glacière, de conservateurs de froid (carboglace).
I.2.2.2. Matériel de centrifugation et de
conservation
Une centrifugeuse réfrigérée a
été utilisée et un congélateur (- 20°C) pour
la conservation des sérums.
I.2.2.3. Matériel et réactifs d'analyse
en sérologie.
a) Dépistage de la brucellose
· Pour le Rose Bengale ou Epreuve à
l'antigène tamponné (EAT)
Le matériel et réactifs utilisés sont
composés de :
-Plaque d'opaline
-Baguette fine
-Minuteur
-Sérum(s) témoin(s) positif(s) et
négatif(s)
-antigène coloré au rose bengale des
laboratoires Rhône-Mérieux.
· Pour l'ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent
Assay)
Le matériel utilisé est un Kit BRUCELLA-Ab
C-ELISA (SVANOVIR TM). Ce Kit permet de détecter les
anticorps anti Brucella dans les échantillons de sérum. Il
présente l'avantage de faire une distinction entre les bovins
infectés des vaccinés. Par ailleurs, il évite des
réactions croisées avec d'autres bactéries, car
très spécifique du fait de l'utilisation d'un anticorps
monoclonal dirigé contre l'épitope dominant de
Brucella.
Ø Les réactifs utilisés sont contenus
dans le kit BRUCELLA-Ab C-ELISA (SVANOVIR TM) composé
de :
ü 02 plaques sécables (12 barrettes de 8 cupules
chacune) de microtitration sensibilisées avec l'antigène S-LPS
non infectieux de B.abortus.
ü anticorps monoclonal lyophilisé
ü le conjugué HRP (Acs de chèvre anti Ig G
de souris couplés à la peroxydase de Raifort), (25 ml).
ü solution 20 fois concentrée de PBS-Tween, (125
ml)
ü tampon de dilution des échantillons, (25 ml)
ü solution de substrat (Tetramethylbenzidine dans du
tampon substrat contenant du H2O2). A conserver dans un
endroit sombre, (20 ml)
ü solution d'Arrêt contenant de l'acide sulfurique.
Très corrosif (10 ml)
ü réactif A : Sérum contrôle
positif (0,05% de merthiolate) (100ìl)
ü réactif B : Sérum contrôle
négatif (0,05% de merthiolate) (100 ìl)
ü réactif C : Sérum contrôle
faiblement positif (0,05% de merthiolate) (100 ìl)
Tous ces réactifs ont été
conservés à + 8°C.
Ø Autre matériel utilisé :
ü micropipettes de précision (50 à
200 ìl);
ü micropipettes multicanaux ;
ü embouts de pipettes à usage unique ;
ü éprouvette graduée d'un volume de 1
à 2 litres pour solution de lavage ;
ü eau distillée
ü agitateur électrique de type TITERTEK;
ü lecteur ELISA de type ELX 808 équipé d'un
filtre à 450nm (Photo 3)
Photo 3: Lecteur ELISA de type ELX 808 Photo
4 : Kit ELISA-BVD
(HABIMANA, 2008)
(HABIMANA, 2008)
b) Dépistage de la Diarrhée Virale
Bovine (BVD)
Il s'agit d'un test ELISA indirect permettant de
détecter les anticorps anti BVD dans les échantillons de
sérum.
Le matériel utilisé est un Kit BVDV-Ab ELISA
(SVANOVIR TM) composé de :
ü 02 plaques sécables sensibilisées avec
l'antigène non infectieux de BVD. Le conjugué lyophilisé
HRP (Acs anti Ig G monoclonaux bovins couplés à la peroxydase de
Raifort), (25 ml)
ü solution 20 fois concentrée de PBS-Tween, (125
ml)
ü tampon de dilution des échantillons, (25 ml)
ü solution de substrat (Tetramethylbenzidine dans du
tampon substrat contenant du H2O2). A conserver dans un
endroit sombre, (20 ml)
ü solution d'Arrêt contenant de l'acide sulfurique.
Très corrosif, (10 ml)
ü réactif A : Sérum contrôle
positif (0,05% de merthiolate), (100ìl)
ü réactif B : Sérum contrôle
négatif (0,05% de merthiolate), (100 ìl)
c) Dépistage de la Rhinotrachéïte
infectieuse bovine (IBR)
Il s'agit d'un test ELISA indirect permettant de
détecter les anticorps anti IBR dans les échantillons de
sérum. Le Kit IBR-Ab ELISA (SVANOVIR TM) utilisé est
composé de :
ü 02 plaques sécables sensibilisées avec
l'antigène non infectieux d'IBR. Le conjugué lyophilisé
HRP (Acs anti Ig G monoclonaux bovins couplés à la peroxydase
de Raifort), (25 ml)
ü solution 20 fois concentrée de PBS-Tween, (125
ml)
ü tampon de dilution des échantillons, (25 ml)
ü solution de substrat (Tetramethylbenzidine dans du
tampon substrat contenant du H2O2). A conserver dans un
endroit sombre, (20 ml)
ü solution d'Arrêt contenant de l'acide sulfurique.
Très corrosif, (10 ml)
ü réactif A : Sérum contrôle
positif (0,05% de merthiolate), (100ìl)
ü réactif B : Sérum contrôle
négatif (0,05% de merthiolate), (100 ìl)
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