Développement d'une technologie en bactériologie : l'aromatogramme

ANNEXE VIII : FICHE TECHNIQUE DE LA GELOSE CHAPMAN,

BIO-RAD

CHAPMAN - MANNITOL SALT AGAR

53647 - 63844 - 64134

Milieu d'isolement et de Différenciation des Staphylocoques

1. APPLICATION

La gélose Chapman - Mannitol Salt Agar est un milieu sélectif pour l'isolement et la numération des staphylocoques. Il permet également de différencier les espèces fermentant le mannitol de celles qui ne le fermentent pas.

2. PRINCIPE

La sélectivité de ce milieu est basée sur la présence de chlorure de sodium qui inhibe la plupart des bactéries à Gram (+) et à Gram (-). La différenciation des Staphylocoques est basée sur leur capacité à fermenter ou non le mannitol. S'il y a fermentation, cela induit une acidification qui entraîne une coloration jaune du milieu en présence de rouge de phénol (indicateur de pH).

3. PRESENTATION

· Milieu prêt à l'emploi

- coffret de 20 boîtes de Petri (90 mm) (MSA) code 63844

· Milieu prêt à l'emploi (à répartir)

- 6 flacons de 200 ml (MSA) code 53647

· Milieu déshydraté

- flacon de 500 g code 64134

4. COMPOSITION THEORIQUE (en g/l d'eau distillée)

Le milieu Chapman - Mannitol Salt Agar est preparé selon la formule décrite par Chapman (1).

·	Peptone		10	·
Extrait de viande de boeuf	1		·
Chlorure de sodium	75		·
Mannitol	10		·
Rouge de phénol	0.025		·
Agar	15		·
pH final :	7.4 #177; 0.2

Préparation du milieu :

Homogénéiser la poudre contenue dans le flacon.

Mettre 111 grammes de milieu déshydraté dans un litre d'eau distillée stérile. Mélanger jusqu'à obtention d'une suspension homogène. Chauffer lentement en agitant fréquemment, puis porter à ébullition jusqu'à dissolution complète. Stériliser à l'autoclave à 121° C pendant 15 minutes. Répartir en boîtes de Petri ou en flacons.

5. CONSERVATION

· Milieu prêt à l'emploi (Petri) : à + 2 - 20°C.

· Milieu prêt à l'emploi (tubes et flacon) : à + 2 - 8°C.

· Milieu déshydraté : flacon soigneusement fermé dans un endroit sec à +15-25°C. La date de péremption et le numéro de lot sont indiqués sur le conditionnement.

6. UTILISATION

Matériel :

· Matériel fourni : milieu Chapman - Mannitol Salt Agar

Ensemencement :

Ensemencer directement en stries à partir de l'échantillon à étudier. Pour la conservation des échantillons biologiques, se référer aux recommandations en vigueur (2).

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Incubation :

Incuber pendant 24 à 48 heures à 37°C.

Lecture :

· Mannitol (+) : coloration jaune du milieu.

· Mannitol (-) : absence de coloration.

Les souches de Staphylococcus aureus élaborent leur propre pigment. Les colonies s'entourent en 24 à 48 heures d'une auréole jaune due à la fermentation du mannitol. Les souches de Staphylococcus epidermidis et autres Micrococcaceae donnent naissance à de petites colonies, qui, dans la majorité des cas, se développent sans modifier la teinte du milieu. Cependant, une minorité non négligeable de souches de S. epidermidis est capable de fermenter le mannitol.

7. PERFORMANCES 1 CONTRÔLE QUALITE DU TEST

· Aspect du milieu prêt à l'emploi : gélose limpide rouge.

· Aspect du milieu déshydraté : poudre rosée.

· Les performances culturales du milieu de Chapman - Mannitol Salt Agar sont contrôlées à l'aide des souches suivantes :

SOUCHES	RÉSULTAT DE LA CULTURE EN 2448 H à 37°C
Staphylococcus aureus ATCC 25923	Colonies jaunes
Staphylococcus saprophyticus A TCC 15305	Colonies jaunes
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228	Colonies rosées
Proteus mirabilis ATCC 25933	Inhibition partielle
Escherichia toll A TCC 25922	Inhibition

8. CONTRÔLE QUALITE DU FABRICANT

Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits f nis. Chaque lot de produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant.

9. LIMITES D'UTILISATION

· Il est nécessaire de faire des tests complémentaires pour une identification d'espèce de la souche isolée.

· Les entérocoques et les streptocoques du groupe D peuvent se développer sur ce milieu et présenter une légère fermentation du mannitol. Cependant les colonies sont petites et peuvent facilement être différenciées des staphylocoques par coloration de Gram ou parle test de la catalase.

10. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

1. CHAPMAN, G.H., The significance of sodium chloride in studies of staphylococci, J. Bact. 1945. 50 : 201-203.

2. Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.

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