Développement d'une technologie en bactériologie : l'aromatogramme

ANNEXE VI : PHOTOGRAPHIES DES AROMATOGRAMMES

REALISES

A1	A2
A3	A4

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A5		A6
A7		A8
A9		A10

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A11	A12
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A15	A16

A17

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A18

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15439 B - fr - 2010/06 Q

EVD

urinaires et l'identification directe d'Escherichia coli,

ANNEXE VII : FICHE TECHNIQUE DE LA GELOSE CHROMID^TM CPS, BIOMERIEUX

chrom iD

00 43 821 / 43 829

Gélose chromIDTM CPS (CPS)

Milieu chromogène pour le dénombrement des germes Enterococcus, KESC et Proteeae.

INTRODUCTION ET OBJET DU TEST

La gélose chromlDT" CPS^c est un milieu d'isolement et d'identification destiné aux prélèvements urinaires- II permet de réaliser:

· le dénombrement microbien du prélèvement grâce â une méthode d'ensemencement standardisée.

· l'identification d'espèce ou des genres bactériens suivants

- Escherichia colt, - Enterococcus,

- Kfebsiela, Enterobacter, Serratia, Citrobacter
(KESC),

- Proteus, Providencia, Morganella (Proteeae). (1, 2, 9, 10)

PRINCIPE

La gélose chromIDTM CPS'' est constituée d'une base nutritive riche associant différentes peptones et 3 substrats chromogènes permettant de révéler l'activité enzymatique correspondante.

La révélation de l'indole est favorisée par l'incorporation de tryptophane dans la gélose.

La concentration élevée en agar évite l'envahissement de la gélose par les Proteus.

L'identification des bactéries les plus fréquemment isolées dans les infections urinaires repose sur ie principe suivant :

· E. cou : coloration spontanée (rose à bordeaux) des souches productrices de f3-glucuronidase (f(-GUR) et/ou 15-galactosidase (15-GAL) (3, 4, 9, 10)_

· Enterococcus : coloration spontanée turquoise des souches exprimant une R-glucosidase (R-GLU) (5).

· KESC : coloration spontanée bleu-vert à bleu-gris des souches exprimant une R-glucosidase (R-GLU).

· Proteeae : coloration spontanée marron des souches exprimant une désaminase.

PRÉSENTATION

REFI PEFI

43 821 43 829

Milieux prêts à l'emploi Coffret de 2x10 boîtes (90 mm) Coffret de 10x10 boites (90 mm) CPS'

imprimé sur chaque boîte

COMPOSITION

Formule théorique :

Ce milieu peut être ajusté et/ou supplêmente en fonction des entraves de performances imposés

Peptone de caséine (bovin) 5 g

Peptone de soja 5 g

Peptone de viande ( bovine vu porcine) 8 g

Hydrates de carbone 1 g

L-Tryptophane 0,9 g

Tampon phosphate 1 g

Substrats chromogènes 1,4 g

Melange nutritif 2.9 g

Agar 18 g

Eau purdiee 1 I

pH 7,4

REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS

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Réactif :

· ID Indole-TDA (Réf. 56 541).

· JAMES (Réf. 70 542).

· Oxydase Reagent (Réf 55 635)

Matériel :

· Oeses calibrées de 10 pl.

· Etuve bactériologique.

· Disques non imprégnés 0 6mm (Réf. 54 991).

PRECAUTIONS D'UTILISATION

· Pour diagnostic in vifra uniquement.

· Pour usage professionnel uniquement.

· Ce coffret contient des composants d'origine animale. La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer ; ne pas inhaler).

· Les prélèvements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent ètre considérés comme potentiellement infectieux et doivent être manipulés de façon appropriée. Les techniques aseptiques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent être respectées tout au long de la manipulation ; se référer à "CLSI^e M29-A, Protection of Laboratory Workers from occupationally Acquired Infections; Approved Guideline -- Révision en vigueur". Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer a "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories -- CDCINIH - Dernière édition ", ou à la réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation.

· Les milieux de culture ne doivent pas ètre utilises comme matériau ou composant de fabrication.

· Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption.

· Ne pas utiliser les réactifs dont l'emballage est détérioré.

· Ne pas utiliser des boites contaminées ou exsudées,

· N'utiliser qu'un seul prélèvement par boite.

· L'utilisation du milieu peut être délicate pour des personnes ayant des difficultés d'appréciation des couleurs.

· Les performances présentées ont été obtenues avec la méthodologie indiquée dans cette notice. Toute déviation de méthodologie peut modifier les résultats.

· La réalisation du test indole pratiquée directement sur la colonie est déconseillée du fait de la difficulté observer le virage dans cette condition.

· Il existe une incompatibilité entre le milieu chromIDTM CPS^°) et le test fosfomycine présent sur les galeries ATB staph, du fait d'une tendance à une non détection des souches résistantes.

Schéma [A]

Nombre da permes Ma (10') Schéma [B]

110 `) (10') 110'1

Gélose chrornlD^TM CPS (CPS)

15439 B - Ir - 2010/06

CONDITIONS DE STOCKAGE

· Conserver à l'abri de la lumière.

· Les boites se conservent entre 2^°C et 8^°C dans leur coffret jusqu'à la date de péremption.

· La durée de conservation des boites hors du coffret, en sachet cellophane, est de 2 semaines a 2-8°C.

ECHANTILLONS

Le milieu est ensemencé directement a partir d'urine.

Il convient de respecter les bonnes pratiques en terme de prélèvements et de transport.

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MODEOPERATOIRE

1. Laisser les boîtes revenir à température ambiante.

2. Sécher si nécessaire la surface de la gélose en plaçant les boîtes à l'étuve à 37°C.

3. Ensemencement - manuel :

Le prélèvement est ensemencé dès son arrivée au laboratoire à l'oese calibrée de 10 pl, de la façon suivante :

· Immerger l'oese dans l'urine en la tenant verticalement,

· Décharger l'oese en réalisant une strie sur un rayon de la boite (a) (vérifier que la goutte a bien été déposée),

· Puis, sans recharger l'oese, faire des stries perpendiculaires très serrées sur toute la surface de la boîte (b).

(a) (b)

- automatique avec PREVI^TM Isola

Suivre les instructions indiquées dans le manuel utilisateur du PREVI^TM Isola

4. incuber à l'étuve, couvercle en bas, à 37°C en aérobiose. Le choix de la température d'incubation est de la responsabilité de l'utilisateur en fonction de i'applicatlon et des normes en vigueur. Les cultures sont examinées généralement après 18 à 24 heures d'incubation

LECTURE ET INTERPRETATION

Après incubation, observer la croissance bactérienne Dénombrement :

Estimer la concentration bactérienne en comparant la densité des colonies présentes sur la moitié supérieure de la boîte à celle du schéma [A] pour un ensemencement manuel, ou à celle du schéma [B] pour un ensemencement automatique sur PREVI^TM Isola (15):

Hnmbre da germa, lm!

(10^') (10') (^10') i^{10 `}1 (^10')

L'interprétation des résultats de la numération doit tenir compte de différents paramètres dont la leucocyturie, les signes cliniques et l'épidémiologie. (6,11,12)

Identification :

	Colonies roses à bordeaux	ô^a a	Colonies bleu vert k bleu gris	Colonies beige avec halo marron		Revelation du test indole	E. coli
+-		-	-			Enrerococcus ·
	+	-	-			Groupe KESC
	-	+	-			P. indologéne Providencia Morganella
-	-	-	+	+		P. mirabilis
-	-	-	+	-

1. Identification directe de E.coli sans réalisation de test indole :

· Colonies de couleur rose à bordeaux ou translucides à centre rose à bordeaux : espèce E. cofi.