II.2 MATERIELS ET
METHODES
Cette étude horizontale est menée dans le but
de ressortir la prévalence apparente d'une zoonose majeure. Elle fait
suite à des constats cliniques établis après quelques
visites de terrain avec un suivi de résultats d'analyses de laboratoire
à partir des sérums bovins récoltés et
livrés au Laboratoire Vétérinaire de Kinshasa. Les
constats reflètent une baisse de la fécondité, une
persistance d'un syndrome périnatal caractérisé par des
avortements, des mort-nés et une mortalité élevée
des veaux dont les foies présentaient des foyers de nécrose
à l'autopsie et cela, malgré un programme de vaccination continue
contre la Brucellose et ce depuis plusieurs années. Ce syndrome
associé aux facteurs climatique et végétal a fait penser
à la fièvre de la vallée du Rift ; ce constat a fait
initié une séro-surveillance, dans un premier temps, avec comme
objectif la connaissance et la détection des anticorps de la maladie
suspectée et l'évaluation de la prévalence.
Lepremier lot de 151
prélèvements sanguins a été réalisé
sur les deux races de bovins de différents âges ayant
présenté des avortements visibles ou non et/ou
réputés stériles au centre de la zone où l'impact
de la maladie, conformément au syndrome, se faisait plus sentir par
rapport aux deux autres sites (Nord et Sud). Le sang était
collecté dans des tubes vacutainer avec anticoagulant
(Acide Ethylène
Diamine Tétra-acétique ou
EDTA) et conservé au froid dans une glacière
à 4°C. Le sérum fut décanté trois jours
après puis aliquotés dans les cryotubes et conservés
à moins 20°C. Vu le caractère pressant et la
nécessité de poser un diagnostic rapide, ce premier lot fut
envoyé au laboratoire régional de référence
"Onderstepoort Veterinary
Institute OVI" d'Afrique du Sud.
Ledeuxième lot de 200
prélèvements était réalisé six mois
après dans le même site, 40 échantillons au Nord ainsi que
quelques tissus, arrière-faix de vaches et organes des veaux.
Les anticorps IgG et IgM
caractéristiques de l'infection, étaient ensuite
détectés afin de conclure sur la présence ou non de la
maladie.
Le bilan nécrosique (diagnostic
posé sur base de l'altération tissulaire) a permis
d'apprécier les lésions macroscopiques et microscopiques, pouvant
confirmer ou infirmer la maladie.
Tous les sérums ont été testés
pour la détection des anticorps IgG et IgM anti-RVFV et pour ce deux
anticorps, différents kits ont été utilisés,
à savoir :
§ le kit ELISA RVF visant les IgG chez les bovins, fourni
par BDSL au Royaume Uni et,
§ le kit ELISA indirect pour les IgG et IgM chez les
ruminants fourni par OVI en Afrique du Sud.
II.2.1 EQUIPEMENTS ET
REACTIFS
Tableau II.1 : Equipements et réactifs pour
Microplaques Elisa.
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Microplaques Elisa
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Embouts pour micropipette
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Substrat ABTS (acide sulfonique 2,2'
-azinodiethylbenzothiazoline)
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Eau distillée
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Solution d'arrêt (Electran)
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Couvercles pour microplaques
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Lait en poudre écrémé
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Incubateur -agitateur
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Tween 20
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Microplaques
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Poudre de PBS
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Sérum de la souris anti-VFVR
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Tampon de lavage
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Ag de VFVR
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Tampon de dilution
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Ag de contrôle (C++, C+ et C-)
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Tampon de blocage
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Sérum à tester
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Solution d'arrêt :Sulfate de Sodium Dodecyl
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Sérums de contrôles
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Lecteur de microplaques ELISA
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Conjugués (HRPO, )
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Centrifugeuse
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Souche rNVFVR
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Tubes de centrifugeuse et microtubes
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pH mètre
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Vortex
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Tampon de carbonate-bicarbonate
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Dispositif de nettoyage des microplaques
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Sérum de chèvre anti-humain
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Micropipette de précision
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Antisérum lapin, Antisérum mouton
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