2.3.2. Test de quantification du nombre de spores
collectée par mouche
Cette expérimentation effectuée sur C.
capitata et sur B. dorsalis est destinée à
déterminer le nombre de conidies qu'une seule mouche a pu collecter
après une exposition au substrat traité. Dix-huit mouches (9 par
espèce) mâles et femelles de B.dorsalis et de
C.capitata adultes, contenues dans une cage en plexiglas (150 X 150 X
240 mm), ont été exposées à 0,3 ; 0,15 et 0,075 g
de spores de Metarhizium réparties de façon uniforme sur
un tissu en velours contenu
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dans trois chambres d'auto-inoculation fait à partir
d'un flacon vide. Les mouches ont séjourné dans la chambre de
contamination respectivement pendant 1, 2 et 3 minutes avec 2
répétitions par temps de séjours. Immédiatement
après l'exposition, 10 mouches vont être placées
individuellement dans des tubes de Falcon contenant 2 ml d'eau
mélangée à 0,05% de Tween-80. Les tubes vont être
agités avec un vortex pendant 5 minutes pour enlever les spores du corps
et des pattes de l'insecte. Le nombre de spores est ensuite estimé en
utilisant un hémocytomètre.
2.3.3. Tests préliminaires de la
pathogénicité des spores du Metarhizium acridum (Maximum
challenge tests)
2.3.3.1. Effet du Metarhizium acridum sur les adultes
de Ceratitis capitata
Vingt mouches adultes, mâles et femelles, de
Ceratitis capitata, contenus dans une cage, ont été
exposées à 0,3 g de spores sèches de Metarhizium
acridum réparties de façon uniforme dans une chambre
d'auto-inoculation à l'aide d'une spatule. La chambre est
composée d'un tube cylindrique en plastique (6,8 cm de longueur et 3,5
cm de diamètre) garnie d'un tissu de velours. Une
extrémité est munie d'un filet de moustiquaire et l'autre
perforée d'un trou qui a servi de source de lumière pour les
mouches (Dimbi et al. 2003). Chaque mouche va séjourner pendant
3 minutes dans la chambre d'inoculation et les 20 mouches sont ensuite
transférées dans une cage. Une cage avec 20 mouches
passées dans une chambre de contamination sans spores de Metarhizium
a servi de témoin. La mortalité est enregistrée
quotidiennement et le ramassage des cadavres de mouches est fait
quotidiennement pendant 6 jours d'après Awuor en 2010. Les mouches
mortes récupérées sont lavées dans de
l'hypochlorure de sodium 2 % pendant une minute, puis dans de l'alcool 70°
C pendant une minute et rincées 3 fois avec de l'eau distillée
avant d'être mises en incubation pendant 3 à 5 jours dans des
boîtes de Pétri contenant du papier buvard imbibé d'eau.
L'expérience a été répétée 2 fois.
L'étude a démarré le 05 Août 2014 et a pris fin le
11 Août 2014.
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