2.2.6. Polyphénols
Les polyphénols ont été dosés
suivant la méthode décrite par Singleton et al.,
1999. A un gramme (1g) d'échantillon séché et
broyé, seront ajouté 10 Ml de méthanol (70% v/v). Le
mélange sera homogénéisé puis centrifugé
à 1000 trs/min pendant 10 min. Le surnageant est conservé et le
culot est récupéré dans 10 mL de méthanol (70%)
puis centrifugé dans les mêmes conditions que
précédemment. Le surnageant obtenu est
récupéré dans une fiole puis le volume est
complété à 50 mL avec de l'eau distillée. Cet
extrait constituera l'extrait polyphénolique.
KOUAKOU Koffi Jean-Michel/Mémoire Master 2
BTA/ UFR STA/ Année universitaire 2015-2016
Ensuite 1 mL d'extrait polyphénolique est introduit
dans un tube auquel est ajouté 1 mL de réactif de Folin-Ciocateu.
Le tube est laissé au repos pendant 3 min, puis on y ajoutera 1 mL de
solution de carbonate de sodium à 20% (p/v). Le mélange sera
ajusté à 10 mL avec de l'eau distillé jusqu'au trait de
jauge. Le tube est ensuite placé à l'obscurité pendant 30
min puis la lecture de fera au spectrophotomètre à 725 nm contre
le blanc. Une gamme étalon à partir d'une solution mère
d'acide gallique (1 mg/mL) dans les mêmes conditions que l'essai.
|
DO725 X 103
Polyphénols (mg/100g) = 5,04 X me
|
Equation 7
|
|
me: masse (g) de l'échantillon.
|
|
2.2.7. Oxalates
La méthode utilisée pour le dosage des oxalates
est celle décrite par Day and Underwood (1986). Deux
(2) grammes d'échantillon ont été séché et
broyé et homogénéisé dans 25 mL de H2SO4 (3M) sous
agitation magnétique pendant 1 h. le mélange est ensuite
filtré avec du papier filtre Whatman. Un volume de 25 mL de ce filtrat
est titré par une solution de KMnO4 à (0,05 M) jusqu'au virage au
rose persistant.
|
Oxalates (mg/100g) =
|
2,2 X Veq X 100
|
|
val
me
|
Equation 8
me : masse (g) de
l'échantillon.
18
2.2.8. Phytates
Le dosage des phytates est effectué selon la
méthode décrite par Latta and Eskin (1980). Une
masse de 1 g d'échantillon séché et broyé est
homogénéisée dans 20 mL d'acide chlorhydrique (HCL 0,65 N)
sous agitation pendant 40 min. Un volume de 0,5 mL du surnageant est
prélevé auquel sont ajoutés 3 mL de réactif de
Wade. Les tubes à essais sont ensuite laissés au repos pendant 15
min et la densité optique est lue à 490 nm contre le
témoin. Une gamme étalon établie dans les mêmes
conditions que l'essai, à partir d'une solution mère de phytate
de sodium (10 ug/mL) permet de déterminer la quantité de phytate
de l'échantillon.
|
DO490 X 4
Phytates (mg/100g) = 0,033 X me
me: masse (g) de
l'échantillon
|
Equation 9
|
KOUAKOU Koffi Jean-Michel/Mémoire Master 2
BTA/ UFR STA/ Année universitaire 2015-2016 2.2.9.
Flavonoïdes
La teneur en flavonoïde est déterminée par
la méthode décrite par Meda et al. 2005.
Cinq (0,5) mL de surnageant issu de l'extraction des
polyphénols sont prélevés auxquels on ajoute
successivement 0,5 mL d'eau distillée, 0,5 mL chlorure d'aluminium (10%,
p/v), 0,5 mL d'acétate de sodium (1M) et 2 mL d'eau distillée. Le
mélange est ensuite laissé reposer les tubes pendant 30 min
à température ambiante et lire l'absorbance au
spectrophotomètre à 415 nm contre le blanc. Une gamme
étalon réalisée à partir d'une solution
étalon de quercetine à 0,1 mg/mL.
Flavonoides (mg/100g) = 18,12 X me
DO415 X 2 X 103
Equation 10
me: masse (g) de l'échantillon.
19
| 
