Analyse physico-chimique et microbiologique du lait caillé produit dans le groupement de miti et commercialisé dans la ville de Bukavu.

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Après incubation à température constante, on observe sur le milieu des colonies bactériennes et parfois des levures et des moisissures. Chaque colonie provient d'une UFC (Unité Formant Colonie) cela veut dire que l'on considère que la colonie est issue soit d'une unité microbienne : un micro-organisme ou d'un spore qui a germé, et que cette unité était présente sur la surface ou dans l'aliment. Plus rarement, il se peut que la colonie provienne d'un amas de micro-organismes si serrés qu'ils se sont développés en formant une seule colonie.

Après le dénombrement des colonies formées, une deuxième analyse a été effectuée pour la détermination du genre (groupe) des bactéries.

II-4-2-Analyses microbiologiques

Le choix du milieu de culture pour la détermination et le dénombrement des bactéries a été porté sur :

Ø PCA Standard

Ø L'Agar à la lysine et au fer

Ø Kliger Iron Agar

Ø Citrate de Simmons

Ø Mac Conkey (McC)

Ø Sabouraud

Ø Gélose au Sang Frais (GSF)

Ø Sim

Nous avons commencé par le dénombrement des bactéries présentent dans nos échantillons à analyser, ainsi pour dénombrer nous avons utilisé le milieu de culture PCA.

Pour chaque prélèvement, 10 ml d'échantillon à analyser ont été ajoutés dans un Erlenmeyer à 90 ml d'eau physiologique stérile. On obtient ainsi une dilution mère de 10-1 à partir de laquelle on réalise des dilutions décimales jusqu'à 10-7.

La flore mésophile aérobie totale (FMAT), bon indicateur de contamination, est dénombrée sur gélose PCA incubée 24 h à 37°C.

Les coliformes sont recherchés sur gélose lactosée et citratée au désoxycolate (DCL) incubée 24 heures à 37°C pour les coliformes totaux.

Les staphylocoques sont dénombrés sur la Gélose au Sang Frais (GSF) et incubée 24 heures à 37°C.

Pour les salmonelles, on réalise un pré-enrichissement sur milieu sélénite-cystéine 24 heures à 37°C, suivi d'un enrichissement sur bouillon au tétrathionate 24 heures à 37°C, puis le dénombrement et l'isolement ont été réalisés sur le milieu SS (Salmonella-Shigella) après incubation 24 heures à 37°C.

Les levures et les moisissures sont dénombrées sur le milieu Sabouraud glucosé à 4 % et incubé 24 heures à 37°C.

Dénombrement de la flore mésophile aérobie totale :

Les microorganismes aérobies et aérobies anaérobies facultatifs se développent dans un milieu nutritif gélosé défini non sélectif incubé à 37°C pendant 24 heures.

Ils apparaissent sous forme de colonies de tailles et de formes différentes. Des levures et des moisissures peuvent également se développer, ces dernières peuvent être différenciées.

a. Recherche de la â-galactosidase :

A une suspension dense des bactéries testées en eau distillée stérile, un disque imprégné d'Ortho-Nitro-phényl-â-Galactoside (ONPG) est ajouté puis incubée à 37°C pendant 24 heures. L'apparition d'une couleur jaune indique l'hydrolyse de l'ONPG et donc la présence d'une â-galactosidase.

b. Milieu « glucose-lacose-H2S » Kligler-Iron Agar :

Il est utilisé pour l'identification des entérobactéries à Gram négatif. Il permet de mettre en évidence en 24 heures les fermentations du glucose, du lactose, et la production d'H2S.

c. Test Citrate :

Le milieu au citrate de Simmons est un milieu minéral synthétique tamponnée avec comme source d'azote un sel d'ammonium et comme source unique de carbone et d'énergie du citrate, dont l'utilisation en aérobiose par certaines bactéries se traduit par leur croissance et l'alcanisation du milieu (virage au bleu du milieu indique une réaction positive). Les entérobactéries, qui exigent des facteurs de croissance (auxotrophes, par ex. : Salmonella Typhi et les Shigella), ne peuvent pas pousser sur ce milieu.

d. Recherche des décarboxylases et dihydrolase (LDC, ODC, ADH) par alcalinisation de milieux liquides :

Les décarboxylases présentant un intérêt taxonomique sont :

ü La lysine-décarboxylase ou LDC (lysine cadavérine) ;

ü L'ornithine - décarboxylase ou ODC (ornithine putrescine) ;

ü L'arginine - décarboxylase et dihydrolase ou ADH (arginine agmatine et ornithine).

La synthèse de ces enzymes est favorisée par un pH acide (3,5-5,5) et des conditions d'anaérobiose.

Ce procédé utilise des milieux liquides tels que celui de Falkow sans peptone. Ce milieu renferme un amino-acide (lysine ou ornithine ou arginine), du glucose, de l'extrait de levure et du bromocrésol pourpre comme indicateur de pH (jaune à pH= 5,2-violet pourpre à pH=6,8).

Dans un premier temps, les Enterobacteriaceae fermentent le glucose. Cette acidification des milieux favorise l'activité des décarboxylases (LDC et/ou ODC et/ou ADH).

Les décarboxylations éventuelles entraînent une alcalisation des milieux (virage violet de l'indicateur), surtout en anaérobiose. Un milieu témoin sans aminoacide doit être acidifié (virage au jaune de l'indicateur).

e. Milieu Urée Indole :

Ce milieu permet de rechercher l'uréase, la production d'indole et la tryptophane désaminase (TDA).

A partir d'une culture en milieu urée indole pendant 24 heures à 37°C, on peut rechercher la production de l'indole à l'aide du réactif de Kovacs (anneau rouge), et la tryptophane désaminase par le rajout de quelques gouttes du réactif de TDA. La coloration en rouge violacé du milieu (urée indole) indique la présence d'une uréase.