Portage vaginal et profil de sensibilité du streptocoque du groupe b chez la femme enceinte à l'hôpital gynéco-obstétrique et pédiatrique de Yaoundé

II.9 Diagnostic bactériologique

Le diagnostic bactériologique du Streptocoque du groupe B est facile et repose sur la mise en évidence de l'antigène du groupe B de Lancefield.

III.9.1 Prélèvement

Le Prélèvement cervico-vaginal ou PCV doit être fait dans les conditions rigoureuses d'asepsies indiquées telles qu'on évite au maximum les contaminations et en ramenant la plus grande quantité possible des secrétions.

Le prélèvement cervico-vaginal nécessite que la patiente soit mise en confiance et on doit lui expliquer les conditions et la simplicité de l'examen et de son utilité.

Mise en place du spéculum

On maintien les petites lèvres écartées avec deux doigts de la main gauche en évitant la zone sous urétrale sensible et le clitoris, le spéculum est introduit en appuyant sur la fourchette, soit perpendiculairement à l'axe de la vulve directement dans le plan de la cavité vaginale, soit parallèlement à l'axe de la vulve en tournant de 90° tout en l'enfonçant pour le ramener dans le plan de la cavité vaginale.

Après introduction sur 5 à 6 cm, l'ouverture légère du spéculum permet un control visuel de sa progression vers le col, selon un axe de 45° par rapport au plan de la table. Lorsque le spéculum est bien en place, il convient de bien éclairer le col pour faire les prélèvements convenables. Une lampe électrique a été utilisée pour l'éclairage.

II.9.2 Examen macroscopique

On décrit d'abord l'aspect du col et de la paroi vaginale. La macroscopie des leucorrhées permet d'apprécier leur abondance leur aspect, leur couleur et leur odeur.

Portage vaginal et profil de sensibilité du Streptococcus agalactiae aux antibiotiques chez la femme enceinte à HGOPY

II.9.3 Examen microscopique

Il est basé sur la morphologie des bactéries, leur regroupement, leur abondance, leur mobilité, la présence éventuelle d'un parasite (Trichomonas) à l'aide d'un microscope. Il constitue l'examen direct qui intègre l'état frais et la coloration de gram.

II.9.4 Examen direct

L'examen direct intègre l'état frais et la coloration de Gram

Etat frais

Sur une lame propre, une goutte de sécrétion vaginale est mélangée avec une goutte de solution saline (eau physiologique) et recouverte d'une lamelle. La préparation s'observe à l'objectif à sec (10X ou 40X). Cet examen met en évidence les cellules vaginales, les leucocytes, les levures et la mobilité des Trichomonas. On peut aussi apprécier la morphologie bactérienne et la mobilité de certaines bactéries.

Coloration de Gram

C'est la coloration la plus importante dans le laboratoire de bactériologie

On précisera la cytologie, la présence des leucocytes, des levures et des Trichomonas ainsi que l'aspect de la flore bactérienne vaginale (Flore de Doderleïn composée de bactéries du genre Lactobacillus) qui est rattachée à l'un des 4 types décrits ci-dessous :

Type I : présence exclusive de bacilles de Doderleïn.

Type II : Prédominance nette de bacilles de Doderleïn.

Type III : présence de bacilles de Doderleïn, mais prédominance d'autres bactéries (Gram+ et Gram-)

Type IV : Absence de bacilles de Doderleïn et présence d'une flore mono ou polybactérienne (Gram+ ou Gram-).

Les Streptocoques apparaissent sous formes de coques de couleur violette en petites chainettes ou longues chainettes.

Portage vaginal et profil de sensibilité du Streptococcus agalactiae aux antibiotiques chez la femme enceinte à HGOPY

Etapes de la coloration de Gram

V' Fixer le frottis à la flamme ou à l'alcool

V' Recouvrir le frottis de la solution du cristal Violet ou violet de gentiane, laisser agir 45 seconde à 1 minute ;

V' Sans rincer, rejeter le colorant avec la préparation de lugol, laisser agir une minute ;

V' Rejeter le lugol, sans rincer ;

V' Décolorer à l'alcool à 95°C ou au mélange alcool-acetone.la durée de la décoloration doit être adaptée à l'épaisseur du frottis. Plus il est épais, plus il a fixé le colorant au cours des deux premières étapes. L'action de l'alcool devra être plus longue dans cette éventualité que lorsqu'on traite un frottis fin. La méthode qui consiste à laisser couler l'alcool sur le frottis tenu verticalement ou du moins en position très inclinée, jusqu'à ce que l'alcool s'écoule non teinté, s'avère à l'usage être la plus pratique.

V' Rincer à l'eau courante et recouvrir la lame de la solution de fuchsine diluée ou de safranine, laisser agir quelques secondes.

V' Rejeter la fuchsine ou la safranine. Laver abondamment, égoutter, sécher entre deux feuilles de papier buvard très propres.

V' La lecture se fait à l'objectif 100X à immersion.