Confession, coloration et examen des frottis

REPUBLIQUE DU BENIN

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MINISTERE DE L'ENSEIGNEMENT SUPERIEUR

ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

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UNIVERSITE D'ABOMEY-CALAVI (UAC)

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ECOLE POLYTECHNIQUE D'ABOMEY-CALAVI (EPAC)

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DEPARTEMENT DE GENIE DE LA BIOLOGIE HUMAINE (GBH)

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2^ème ANNEE D'ETUDE

CONFESSION, COLORATION ET EXAMEN DES FROTTIS

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Réalisé par: Sous la direction du :

Christ AMOU Dr SONON Jules Arès

Année académique : 2012-2013

Sommaire

Introduction 3

1. CONFECTION DES FROTTIS SANGUINS 4

a. Conditions à observer pour confectionner un bon frottis sanguin 4

b. Qualités d'un bon frottis sanguin 5

c. Les frottis sur les lamelles 6

2. COLORATION PANOPTIQUE 6

a) Coloration MGG 6

b) Les résultats de coloration panoptique 7

Conclusion 10

Introduction

Le sang, liquide noble de l'organisme, baigne plusieurs types de cellules (hématies, globules blancs etc...) et les nutriments utiles au bon fonctionnement de l'organisme. Bon nombre d'entre ces cellules interviennent dans la défense de l'organisme contre les agents pathogènes ou corps étrangers (bactéries, virus, etc...). L'étude du sang peut donc nous apporter de nombreux renseignements sur notre état de santé par la détection de ses affections.
Pour une bonne étude du sang, il est nécessaire de réaliser un frottis sanguin, de procéder à sa coloration au MGG pour distinguer aisément les différents types globules par l'observation au microscope. La confection d'un bon frottis sanguin et la coloration panoptique feront donc l'objet de notre présent exposé.

Quelles sont les conditions à respecter pour la confection d'un bon frottis sanguin ? quelles sont les qualités d'un bon frottis sanguin ? Qu'est que la coloration MGG ? Et quels sont les résultats des colorations panoptiques ?

1. CONFECTION DES FROTTIS SANGUINS

Un frottis sanguin est un étalement d'une goutte de sang sur une lame de verre, dans le but d'observer les cellules qui y sont présentes et de les dénombrer. Il permet également de repérer d'éventuels parasites dans le sang comme l'agent du paludisme, Plasmodium falciparum. Pour atteindre ce but, le frottis doit subir une coloration pour révéler certaines cellules qui sans cela seraient transparentes, donc non visibles.

Le principe de confection d'un frottis consiste donc à étaler une goutte de sang uniformément sur une lame de verre, de manière à obtenir une seule couche de cellules, qui après coloration et fixation, pourra permettre d'effectuer l'étude morphologique des éléments figurés du sang, et de déterminer s'il y a anomalies de présence, d'aspect ou de nombre de cellules.

a. Conditions à observer pour confectionner un bon frottis sanguin

La réalisation ou la confection d'un frottis sanguin de bonne qualité ou d'un bon frottis sanguin doit suivre une procédure précise avec un minimum d'entrainement et une maitrise parfaite de la manipulation des produits sanguins. La réalisation d'un bon frottis nécessite également la maitrise des manipulations à effectuer en adéquation avec le matériel choisi. Il faut également disposer des équipements de protection individuelle (blouse propre et fermée, gants au moment des gestes à risque), avoir une très bonne approche de gestion des déchets et procéder éventuellement à la désinfection du matériel réutilisable par immersion dans la javel pendant au moins 15 minutes (l'alcool peut être utilisée) et de la paillasse en début et en fin de TP.

v Les matériels utilisés pour la confection d'un frottis sanguin

- Une aiguille stérilisée pour le prélèvement du sang

- Alcool à 90° (ou désinfectant)

- 2 lames de verre ou une lame et une lamelle

- Un microscope

- Eventuellement des colorants

v Mode opératoire

La procédure de réalisation ou de confection d'un bon frottis sanguin doit suivre les étapes suivantes :

- Disposer d'échantillon de sang ou faire le prélèvement du sang capillaire ou du sang veineux du sujet.

- Il faut homogénéiser le prélèvement ou l'échantillon de sang par des mouvements de retournement doux et successifs pour éviter l'apparition de caillot.

- Prélever, à l'aide d'une pipette bien propre et préalablement désinfectée, 10uL de sang

- Déposer la goutte de sang prélevée sur une lame en verre (environ 2cm x5 cm), dégraissée et identifiée à 1 cm environ du bord lame.  

- Placer le bord de la lame rodée ou de la lamelle sur la lame et glisser celle-ci jusqu'à ce qu'elle entre au contact avec la goutte, en maintenant un angle de 45°.

- La goutte de sang se répartir régulièrement par capillarité en une couche mince uniforme le long du bord de la lamelle en quelques secondes.

- Faire glisser alors la lamelle, jusqu'au bout, d'un mouvement assez lent et régulier en maintenant le contact et la pression nécessaire pour que le sang s'étale. Un bon frottis doit être contenu entièrement sur la lame, bords et franges compris.

- Si le frottis est jugé correct, sécher immédiatement le frottis en agitant à l'air par des mouvements d'éventails vifs. Temps de séchage minimum 5 minutes.

- Identifier enfin le frottis.

Le schéma suivant résume les directives sus citées.