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Validation de procédé de production d'antigène viral sur culture cellulaire BHK21

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par Ghaith Ben Messaoud
Institut supérieur des technologies médicales de Tunis - Licence appliquée en biotechnologies médicales 2013
  

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Annexes


·

C: Protéine C


·

BHK21: Baby Hamster Kidney


·

E1: Protéine E1


·

RK 13: Rabbit kidney


·

E2: Protéine E2


·

ECP: effet cytopathique

 


·

HA: Hémagglutinine


·

HR: Hémolyse radiale


·

ARN: acide ribonucléique


·

IHA: Inhibition d'hémagglutination


·

S: coefficient de sédimentation


·

ELISA: Enzyme-Linked-Immuno

 
 
 

Sorbent Assay


·

DMSO: diméthysulfoxyde


·

PCR: Polymerase Chain Reaction


·

nm: nanomètre


·

RT-PCR: Reverse Transcriptase

 
 
 

PCR


·

kDa: kilo Dalton


·

Nested PCR: PCR nichée


·

Kb: kilobase


·

DMEM: Dulbecco's Modified Eagle

 
 
 

Medium


·

IgM: immuglobuline M


·

SVF: Sérum de veau foetal


·

IgG: immuglobuline G


·

ATB: Antibiotique


·

Ig A : immuglobuline A


·

GR: globules rouges


·

HLA: Human leukocyte antigen


·

UHA: unité hémagglutinante


·

Ac: Anticorps


·

OPD: Ortho-Phénylène-Diamine


·

Ag: Antigène


·

LIRB: Laboratoire

d'Immunotechnologie et Réactifs

 
 
 

Biologiques

Figure 1: Symptômes de la rubéole ( www.larousse.fr) 2

Figure 2: Un enfant atteint de rubéole congénitale (Lasek-Duriez et al., 2008) 4

Figure 3: Représentation schématique du virus de la rubéole (Guillet, 2010) 6

Figure 4: Virus de la rubéole au microscope électronique (Bienvenu et al., 2004) 6

Figure 5: Représentation du génome de la rubéole (Bienvenu et al., 2004) 9

Figure 6: Réplication du virus de la rubéole (Bienvenu et al., 2004) 10

Figure 7: Cinétique d'apparition des anticorps lors d'une infection et réinfection

rubéolique ( www.microbe-edu.org) 11
Figure 8: Détection du virion de la rubéole dans les cellules BHK21 (Risco et al.,2003).....

14
Figure 9: Cellules VERO et BHK21 infectées par le virus de la rubéole. (Risco et al.,

2003) 14
Figure 10: Technique de détection de l'infection rubéolique a partir du liquide amniotique

de foetus par PCR et electrophorese RT-PCR(A),Nested PCR(B) (Bienvenu et al.,2004) 16

Figure 11: Contrôle de stérilité 22

Figure 12: Milieu DMEM 23

Figure 13: SVF 24

Figure 14: Antibiotiques 24

Figure 15: Tryptose phosphate 25

Figure 16: Trypsine 25

Figure 17: Contrôle de stérilité du milieu de culture et additifs 26

Figure 18: Observation microscopique des cellules BHK21 27

Figure 19: Décongélation des cellules BHK21 28

Figure 20: Observation microscopique des cellules BHK21 dans la flasque 150cm2 29

Figure 21: Incubation dans l'étuve à 37°C 29

Figure 22: Passage des cellules BHK21 30

Figure 23: Inoculation du virus 30

Figure 24: Lot d'hémagglutinine 31

Figure 25: Titrage de l'hémagglutinine rubéolique 32

Figure 26: Lavage par le Tampon PBS Tween de la plaque ELISA 35

Figure 27: Incubation du sérum des malades 35

Tableau 1: Résultats de titrage de l'HA 37

Tableau 2: Test numéro 1 . 38

Tableau 3: Test numéro 2 . 39

Tableau 4: Test numéro 3 .. 40

Tableau 5: Test numéro 4 . 41

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"La première panacée d'une nation mal gouvernée est l'inflation monétaire, la seconde, c'est la guerre. Tous deux apportent une prospérité temporaire, tous deux apportent une ruine permanente. Mais tous deux sont le refuge des opportunistes politiques et économiques"   Hemingway