I.2. Préparation du matériel
Les flacons, verreries, tubes et bouteilles Roller
utilisés lors de la culture cellulaire doivent être lavés
et stérilisés.
Tout le matériel utilisé a été
lavé par un détergent ou désinfectant, séché
dans un four à 60°C avant d'être stérilisé.
I.2.1. Stérilisation du matériel
La stérilisation du matériel est obligatoire. Elle
peut se faire de deux manières: ? Stérilisation par la
chaleur sèche
? Stérilisation par la chaleur humide
ISTMT-IPT 2012-2013
La stérilisation par la chaleur sèche se fait
grâce au four Pasteur. Les verreries, bouteilles Roller, tubes et flacons
en verre pyrex sont mises 1h à 200°C au four.
La méthode de stérilisation par la chaleur humide
est assurée par l'autoclave.
Tout le matériel (verrerie, tubes, flacons et bouteilles
d'eau distillée...) est mis dans l'autoclave pour une
stérilisation à 120°C pendant 30 min (le cycle dure 2h
tenant compte du temps de chauffage et de refroidissement de l'autoclave).
Le matériel utilisé, les solutions de
contrôle de stérilité (Thioglycolate et Bouillon Trypto
caséine de soja) et Tryptose phosphate passent par un seul cycle
d'autoclavage avec des températures différentes suivant la notice
des milieux de culture.
I.3. Contrôle de stérilité du local
Après la désinfection, la gélose
nutritive a été répartie dans des boites de pétris.
Les boites contenant le gel sont placées semi ouvertes sur les
paillasses et les équipements de culture (Etuve, Appareil Roller, Hotte)
pendant 30 min puis incubées dans l'étuve à 37°C
pendant 14 jours avec lecture tous les 24 h pour s'assurer de la
stérilité du matériel et du local.
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Figure 11: Contrôle de
stérilité
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