Annexe (1)
Annexe (2)
Fiche de renseignements -Trichinellose-
Identification du patient:
NOM
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PRENOMS
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AGE
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EMARGEMENT
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Race/Nationalité: Profession:
Commune de résidence: Clinique:
Symptomatologie
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OUI
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NON
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NSP
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Complications
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OUI
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NON
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NSP
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Troubles digestifs
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Fièvre> 39°C
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Myalgies
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OEdème facial
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Autres:
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Nombre de cas familiaux ou dans l'entourage
Date supposée de la contamination
Lieu supposé de la contamination
Cause supposée: Sanglier
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Cheval
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Porc
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Autre
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Provenance: Détaillant
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Grande surface
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Chasse
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Restaurant
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Autre
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Mode de préparation de la viande: Activité
de chasse/ gibier:
Examens complémentaires:
Biochimie
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OUI
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NON
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NSP
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Hémogramme
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OUI
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NON
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NSP
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CPK
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LDH
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ASAT-ALAT
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Hypoglycémie
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Annexe (3)
Test ELISA Trichinella IgG (EIA-3521) / IVD-
BIO advance- DRG
International, Inc. USA
Indication :
La sérologie ELISA Trichinella spiralis IgG est
utilisée en diagnostic In Vitro, elle est destinée au screening
qualitatif des anticorps IgG dirigés contre Trichinella dans le
sérum.
Principe du test :
Les puits de la microplaque sont coatés avec
l'antigène Trichinella, qui est un antigène
d'excrétion-sécrétion (ES) purifié de la larve de
porcs infectés de haut degré de spécificité pour
Trichinella spiralis.
Durant la première incubation avec les sérums de
patients dilués, tout anticorps qui réagit avec l'antigène
se fixe sur les puits coatés.
Après une étape de lavage pour éliminer
le reste de l'échantillon, le conjugué enzymatique est
ajouté. Si les anticorps se sont fixés sur les puits, le
conjugué enzymatique doit donc se fixer à son tour à ces
anticorps.
Après d'autres séries de lavages, un
chromogène (tétraméthylbenzidine ou TMB) est
ajouté. Si le conjugué enzymatique est présent, la
péroxydase va catalyser une réaction qui consommera le
péroxyde et transforme la couleur du chromogène du clair au
bleu.
L'addition de la solution d'arrêt termine la
réaction et change la couleur bleue en une couleur jaune brillant.
La réaction peut alors être lue visuellement ou
avec un lecteur ELISA .
Précautions d'utilisation des réactifs
:
· Ne pas utiliser les solutions si elles ont
précipité ou sont devenues troubles. La solution de lavage
concentrée peut cristalliser au cours de la conservation à
2-8°C. La cristallisation doit disparaître après sa
dilution.
· Ne pas utiliser un sérum qui peut avoir subi une
croissance microbienne, ou s'il est trouble à cause d'un contenu
lipidique élevé. Les échantillons avec des contenus en
lipides élevés doivent être clarifiés avant
utilisation.
· Traiter tous les sérums comme potentiellement
infectieux. Le contrôle négatif a été testé
et trouvé négatif pour l'antigène de surface de
l'Hépatite B et pour l'anticorps anti-VIH par les méthodes de
tests recommandées. Ce produit doit être utilisé dans le
respect des conditions de sécurité appropriées qui doivent
être respectées pour tout agent infectieux potentiel.
· Ne pas ajouter les azides aux échantillons ou
à tout autre réactif.
Réalisation du test : (figure
n°18)
1. Prélever le nombre de puits nécessaires (deux
pour les contrôles plus le nombre d'échantillons à tester)
et placer les sur le support de barrettes.
2. Ajouter 100 ul (ou deux gouttes) du contrôle
négatif dans le puits N°1, 100 ul du contrôle positif dans le
puits N°2 et 100 ul d'échantillons dilués au 1:64 à
tester dans les puits restants (faire une dilution des sérums des
patients au 1:64 avec le tampon de dilution : nous avons choisi la combinaison
: 10 ul de sérums et 630 ul de tampon de dilution).
Remarque : les contrôles négatif
et positif sont fournis pré-dilués. Ne pas les diluer.
3. Incuber à température ambiante (15 à
25°C) pendant 10 minutes.
4. Eliminer le contenu et laver 3 fois avec le tampon de lavage
dilué. Taper la plaque contre le papier absorbant pour éliminer
l'excès d'humidité. Remarque : les lavages se
font par : remplissage des puits jusqu'à ra-bord, élimination du
contenu et remplissage. Eviter la formation des bulles d'air dans les puits
durant les étapes de lavage.
Nous avons utiliser durant cette étape un laveur
automatique que nous avons réglé selon les modalités de
lavage stipulées sur le kit.
5. Ajouter deux gouttes du conjugué enzymatique dans
chaque puits.
6. Incuber à température ambiante pendant 5
minutes.
7. Eliminer le contenu et laver 3 fois avec le tampon de lavage
dilué. Taper la plaque contre le papier absorbant pour éliminer
l'excès d'humidité.
8. Ajouter deux gouttes du chromogène dans tous les
puits, en travaillant avec un minimum de lumière.
9. Incuber à température ambiante pendant 5
minutes, à l'abris de la lumière.
10. Ajouter deux gouttes de la solution d'arrêt et
mélanger en tapotant le support des barrettes.
Lecture des résultats :
Visuellement : observer à l'oeil nu
chaque puits sur un fond blanc (exemple du papier absorbant) et enregistrer
comme réaction claire ou +, ++ ou +++.
Lecteur ELISA : lecture du zéro sur
l'air.
Fixer les lectures en bichromatique à 450/650-620 nm.
Contrôle de qualité :
L'utilisation des contrôles permet la validation de la
stabilité du kit. Le kit ne doit pas être utilisé si un des
contrôles est hors gamme. Les valeurs attendues pour les contrôles
sont :
Négatif : 0.0 à 0.3 unités
de DO
Positif : 0.5 unités de DO et plus
Interprétation des résultats - lecteur
ELISA :
Faire le zéro du lecteur ELISA sur air. Lire tous les
puits à 450/650-620 nm.
Négatif : absorbance lue inferieure
à 0.1 unités de DO
Positif : absorbance lue supérieure ou
égale à 0.3 unités de DO
Une DO lue négative indique que le patient n'a pas un taux
détectable en anticorps. Ceci est dü à l'absence d'infection
ou à une réponse immune très faible chez le patient.
Les critères d'interprétation de l'analyse
sérologique par ELISA (IVD Inc.) Trichinella spiralis IgG se
basent sur le degré de la coloration éventuellement
développée, qui est appréciée par la mesure de la
densité optique (DO) à l'aide d'un lecteur ELISA à 450/620
nm :
Une DO < 0,1 unités est considérée comme
résultat négatif ;
Une DO = 0,3 unités est considérée comme
résultat positif.
La persistance des anticorps IgG anti-Trichinella dure
de neuf à dix huit mois.
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