II-6. Prélèvement du sang :
Le prélèvement du sang est effectué
à l'aide d'une pipette pasteur héparinée à travers
le sinus rétro-orbital au niveau de l'oeil. Le sang
récupéré est ensuite centrifugé à 4000 t/min
pendant 10 mn à 10°C, en vue de l'analyse des paramètres
biochimiques (glycémie, triglycéridémie,
cholestérolémie, et protéinémie).
II-7. Techniques analytiques des paramètres
sanguins :
· Dosage du glucose :
Le dosage du glucose sérique est basé sur une
technique enzymatique colorimétrique par Kit-Prochima par la
méthode de Trinder (1969). Le D-glucose est transformé par la
glucose oxydase en acide gluconique et en peroxyde d'hydrogène lequel
oxyde, en présence de la peroxydase, le phénol en un complexe
chromogène coloré en rouge dont l'absorbance est mesurée
à 505 nm.
· Dosage du cholestérol :
Ce dosage se fait par Kit Prochima, par la méthode de
Fasce (1982). Les esters de cholestérol sont hydrolysés par une
cholestérol ester hydrolase en acides gras et cholestérol. Ce
dernier et celui préexistant sont oxydés par une
cholestérol oxydase en A4-cholestenone et peroxyde
d'hydrogène, celui-ci, en présence de peroxydase, oxyde le
chromogène amino-4- antipyrine en un composé coloré en
rouge d'absorbance maximale à 505 nm..
· Dosages des triglycérides :
Le glycérol libéré par hydrolyse des
triglycérides par la lipoprotéine lipase est transformé en
glycérol-3-phosphate par la glycérokinase. Le glycérol
3-phosphate subit l'action de la glycérol phosphate oxydase pour former
la dehydroxyacétone phosphate et du peroxyde d'hydrogène. Celui
ci en présence du peroxydase oxyde un groupement chromogène 4-
aminoantipyrine/phénol pour former un composé coloré en
rouge. Ce dosage se fait par KitProchima selon la méthode de Fassati et
Prencipe (1982).
· Dosage des protéines :
Le dosage des protéines se fait par la méthode
au Biuret selon Henry et al., 1974. En solution alcaline les
protéines forment avec les ions cuivriques un complexe coloré
d'absorbance mesurée à 540 nm. La détermination des
différentes concentrations se fait à l'aide d'une droite
d'étalonnage de la sérumalbumine humaine (voir Annexe
2).
Remarque : La lecture
spectrophotométrique se fait par un spectrophotomètre UV-VIS
(6405 Jenway).
II-8. Chronologie des testes biologiques :
Afin de rechercher d'éventuels effets
antidiabétiques de l'extrait éthanolique, on a
réalisé des tests biologiques sur des rats males Wistar
âgés de plus de trois mois et de poids corporel situé entre
2 15-275 g. Les tests ont été fait en trois étapes :
~ Suivi à long terme :
Après l'installation du diabète chez les rats,
ces derniers sont repartis en quatre groupes: Groupe
1 : Normaux témoins ; Groupe 2
: Normaux traités ; Groupe
3 : Diabétiques témoins ; Groupe
4 : Diabétiques traités.
Les groupes 2 et 4 sont traités pendant 5 semaines par
l'extrait éthanolique à une dose de 500 mg de résidu sec
par kilogramme de poids en monoprise. Parallèlement les groupes 1 et 3
reçoivent le même volume de la solution de Tween 80. Le traitement
se fait par gavage.
A la fin de chaque semaine, le sang est prélevé
pour la détermination des paramètres sériques
mentionnés précédemment. De plus le poids des animaux a
été pris.
Après cette période un test de réponse des
rats à 1 g/kg de l'extrait éthanolique a été
effectué dont on a suivi la glycémie 1 et 3 heures après
gavage de cet extrait.
~ Suivi à court terme :
De la même manière, les rats rendus
diabétiques ainsi que les normaux sont repartis en quatre groupes. La
dose administrée est de 1 g/kg. La glycémie est mesurée
avant gavage, 1, 2, 3, 5, et 7 heures après traitement.
~ Test de tolérance au glucose :
Ce test a été réalisé sur des rats
normaux, répartis en deux lots. Le premier témoin, et un
deuxième traité -1 heure avant le gavage de 3 g/kg de glucose-
par l'extrait éthanolique à raison de 1 g/kg. L'évolution
de la glycémie était suivie chaque une demi heure jusqu'à
2 heures.
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