Memoire Online - Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de detarium microcarpum

REPUBLIQUE DU CAMEROUN
Paix - Travail - Patrie
MINISTERE DE L'ENSEIGNEMENT
SUPERIEUR

UNIVERSITE DE NGAOUNDERE

REPUBLIC OF CAMEROON
Peace - Work - Fatherland
MINISTRY OF HIGHER
EDUCATION

THE UNIVERSITY OF NGAOUNDERE

ECOLE NATIONALE SUPERIEURE DES SCIENCES
AGRO-INDUSTRIELLES

NATIONAL SCHOOL OF AGRO-INDUSTRIAL SCIENCES
B.P:455 Ngaoundéré-CAMEROUN Tel / Fax: (+237) 22 15 81 89

Mémoire présenté et soutenu publiquement le 14 Janvier 2019 en vue de l'obtention du Diplôme de Master en Sciences et Technologie Parcours : Sciences Alimentaires et Nutrition

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Je dédie ce modeste travail à ma chère mère MAGONNE Angèle et mon cher père MALLAYE KOUMAYE que Dieu les garde et les protège.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Ce travail a été réalisé au laboratoire de Biophysique, Biochimie Alimentaire et de Nutrition (LABBAN) du Département Sciences Alimentaires et Nutrition de l'ENSAI à l'Université de N'Gaoundéré.

J'adresse mes vifs remerciements et ma profonde gratitude au Pr. NJINTANG YANOU Nicolas pour avoir accepté de superviser ce travail avec intérêt, pour son dévouement, ses précieux conseils, ses encouragements, sa patience, sa disponibilité et sa gentillesse.

Je tiens à remercier particulièrement mon encadreur, Dr. NGATCHIC Josiane pour sa patience, sa disponibilité, son aide durant toute la période de recherche, surtout ses judicieux conseils louables. Son ouverture d'esprit et sa vision de la recherche scientifique, ont été importants pour moi ses connaissances scientifique et ont largement contribué à l'évolution de cette étude. Pour tout cela, je tiens à lui exprimer toute ma gratitude.

Mes remerciements vont également à tous les enseignants et tous les responsables de l'ENSAI en général et particulièrement à ceux du département de SAN. Merci pour la meilleure formation que j'ai pu acquérir de votre part.

J'adresse mes remerciements à l'ensemble de personnel de laboratoire de Biophysique, Biochimie Alimentaire et de Nutrition (LABBAN). Etudiants de doctorat en occurrence, FOMEKONG Guy Christian, DELI Markusse, TEDOM Williams, et master, MAIDE Colette pour l'aide, les encouragements qu'ils m'ont prodigué durant les moments difficiles et Pour le soutien apporté lors des manipulations.

J'exprime mes remerciements et ma reconnaissance à tout le personnel du laboratoire des analyses médicales de l'hôpital régional de NGaoundéré, de m'avoir permis de réaliser le dosage des paramètres hématologiques et biochimiques de mes échantillons de sang.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

A mes parents, MALLAYE KOUMAYE, MAGONNE Angèle pour m'avoir permis de réaliser ces études dans les meilleures conditions. Merci de m'avoir soutenu dans les

A la famille de mes oncles maternels, DAMA KEOUA Elie et PADJOULI PABAME, c'est l'occasion pour moi de vous témoigné ma reconnaissance.

Je réitère mes plus vifs remerciements à tous mes frères et soeurs, MAZIEBKI MALLAYE, DELI MALLAYE, MAMOUNE MALLAYE, LANDJOLLA MALLAYE, LAYEBE MALLAYE, KOYABE MALLAYE, MAKOBOURNE MALLAYE, DAKA MALLAYE, KAZIRI MALLAYE et KOTAYA MALLAYE, qui m'ont soutenu sur tout plan, qu'ils reçoivent ici mes sincères remerciements car sans eux je ne s'aurais arrivé à ce stade.

Je tiens a remercié particulièrement mon grand frère DEUBALBE MALLAYE pour son aide précieuse à la réalisation de ce travail et son soutien durant toutes mes parcours scolaires et Universitaires.

A mes connaissances, OUAWE MOGUENA, TCHINDEBE POULONG, KEBGONBA GONDANG Cyrille, merci pour votre soutien et pour les conséils louables.

A mes amis : ALLE Jérémie, PAYANG PALLAYE, CHINDANNE Paulin, DJONGALI Valérie, BOTA BARE, Votre soutien moral, physique et fraternel a contribué à la réalisation de ce travail. Qu'il soit pour vous une source de motivation et de réussite.

Je tiens à remercier tous les camarades de la promotion en occurrence FOOKAO NEUYAMNE Armelle, MODINGAM Pamela, TIAZE Fétus ASAAH pour cette aventure de trois ans qu'on a vécu ensemble, et pour tous les bons moments qu'on a passés.

Je remercie enfin tous ceux qui m'ont rendus service dont leurs noms ne figurent pas et qui ont contribué de près ou de loin pour accomplir ce travail.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

D. microcarpum : Detarium microcarpum

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Figure 11: Artère rétrécie, plaque d'athérome brisée et constitution d'un caillot de sang 14

Figure 12: Cibles biologiques et endommagements oxydatifs induits par les ERO 20

Figure 13 : photographie de plante entière(a) et l'écorce (b) de Detarium microcarpum 26

Figure 14 : photographie de feuille (a) et la fleur (b) de Detarium microcarpum 26

Figure 15 :photographie de la graine (a) et pulpe (b) de Detarium microcarpum 27

Figure 18 : Procédé de production de la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum. 34

Figure 19: Réaction de l'ammoniac avec l'acétylacétone et formaldéhyde en milieu aqueux

Figure 20: Equation de la réaction des oses avec le phénol en milieu acide et à chaud 36

Figure 21 : Equation de la réaction de l'acide ascorbique avec le 2,6 DCIP 41

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Tableau 4 : Composition chimique de fruits de Detarium microcapum rapporté par différents

Tableau 7 : valeurs moyennes des pourcentages d'inhibition et des (IC50) du DPPH des

différentes concentrations des extraits et de la vitamine C. 57
Tableau 8: poids et masse relative des différents organes des rats ayant reçus la poudre de la

pulpe de D. microcarpum à différentes doses 58
Tableau 9: Taux de Créatinine, d'ALAT, d'ASAT des rats ayant reçus la poudre de la pulpe

de Detarium .microcarpum à différentes doses. 60
Tableau 10 : Taux de cholestérol total, de triglycérides de cholestérol-HDL et de LDL-cholestérol des rats ayant reçus la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum à différentes

doses. 61
Tableau 11: Taux de de malondialdéhyde (uM/mg de protéine) des rats soumis à la poudre

de pulpe du fruit de D. microcarpum à différentes doses 63
Tableau 12 : Paramètres hématologiques des rats soumis à la poudre de la pulpe de D.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

RESUME

Originaire d'Afrique tropicale, Detarium microcarpum appartient à la famille des Caesalpiniaceae et au genre Detarium. Le fruit est caractérisé par sa pulpe verte. C'est un fruit très populaire et largement consommé dans la zone soudano-sahélienne principalement cru ou cuite. Le présent travail vise à étudier les propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum. La pulpe a fait l'objet d'une caractérisation chimique en nutriments et en quelques composés bioactifs, d'une évaluation biologique chez les rats mâles adultes et donc a consisté à quelques analyses biologiques (dosages de la créatinine, transaminases, LDL-c, HDL-c, les triglycérides et le molondialdéhyde). Trois différentes doses (250 mg, 500 mg et 750 mg) de poudre de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum ont fait l'objet d'une évaluation biologique. L'analyse phytochimique indique la richesse en sucres disponibles (79,47#177; 3,83%), composés phénoliques totaux (6710 #177;182 mg /100g MS) équivalent à l'acide gallique, en flavonoïdes (537 #177; 46mg /100 g MS) équivalent de la rutine, en tanins (1454 #177; 254 mg /100gMS) équivalent de catéchine, vitamine C (51,04 #177; 0,42 mg/100g MS) et en fibres brutes (10,08 #177; 0,12 mg/100g MS). S'agissant des analyses biologiques les résultats obtenus ont révélé que la consommation de la pulpe du fruit de D. microcarpum augmente de 85,87 % soit 1,85 fois le nombre de globules rouges, 57,72% soit 1,57 fois le taux d'hématocrite 60% soit 1,6 fois le taux d'hémoglobine dans la dose 750 mg comparé au contrôle normal. La consommation de la pulpe chez les rats a permis une réduction de 47% soit 1,48 fois le taux de LDL-c, de 48% soit 1,48 fois le taux des triglycérides, une augmentation 40% soit 1,4 fois le taux de HDL-c dans la dose 750 mg. La réduction de malondialdéhyde a été observée de manière très significative (p<0,01) dans la dose 750 mg (coeur : 0,66 #177; 0,08 uM /mg protéines ; foie : 0,25 mg #177; 0,04 uM /mg protéines ; rein : 0,34 mg #177; 0,02uM /mg protéines et comparé au contrôle normal qui est de coeur : 2,12 #177; 0,62 uM /mg protéines ; foie : 3,84 #177; 0,10 uM /mg protéines ; rein : 1,06 #177; 0,01 uM /mg protéines). Au regard de résultat, la consommation de la pulpe du fruit serait une solution alternative pour traiter une des perspectives sur l'usage antistress, antihyperlipidemiantes et anti anémiques.

MOTS CLES : Detarium microcarpum, pulpe, rats mâles adultes, paramètres lipidiques, hématologiques et antioxydantes

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

ABSTRACT

Originally from tropical Africa, Detarium microcarpum belongs to the family Caesalpiniaceae and the genus Detarium. The fruit is characterized by its green pulp. It is a very popular and widely consumed fruit in the Sudano-sahelian zone mainly raw or cooked. The present work aims at studying the biological properties of the fruit pulp of Detarium microcarpum. The pulp has been the subject of a chemical characterization in nutrients and in some bioactive compounds, of a biological evaluation in the adult male rats and thus consisted of some biological analyzes (assays of the creatinine, transaminases, LDL-c, HDL-c, triglycerides and molondialdehyde). Three different doses (250mg, 500mg and 750mg) of Detarium microcarpum fruit pulp powder were evaluated biologically. The phytochemical analysis indicates the richness in available sugars (79,47 #177; 3,83%), total phenolic compounds (6710 #177; 182 mg / 100g MS) equivalent to gallic acid, in flavonoids (537 #177; 46 mg / 100 g MS) equivalent of rutin, in tannins (1454 #177; 254 mg / 100gMS) equivalent of catechin, vitamin C (51.04 #177; 0.42 mg / 100g DM) and crude fiber (10.08 #177; 0.12 mg / 100g) MS). With regard to the biological analyzes, the results obtained revealed that the consumption of the fruit pulp of D. microcarpum increases by 85.87% or 1.85 times the number of red blood cells, 57.72% or 1.57 times the hematocrit 60% or 1.6 times the hemoglobin level in the 750 mg dose compared to normal control. The consumption of the pulp in the rats allowed a reduction of 47% or 1.48 times the LDL-c level, 48% or 1.48 times the triglyceride level, an increase of 40% or 1.4 times the HDL-c level in the 750 mg dose. The reduction of malondialdehyde was observed very significantly (p <0.01) in the dose 750 mg (heart: 0.66 #177; 0.08 ìM / mg protein; liver: 0.25 mg #177; 0.04 ìM / mg protein: kidney: 0.34 mg #177; 0.02ìM / mg protein and compared to normal control that is heart: 2.12 #177; 0.62 ìM / mg protein; liver: 3.84 #177; 0.10 ìM / mg protein, kidney: 1.06 #177; 0.01 ìM / mg protein). In view of the result, the consumption of the fruit pulp would be an alternative solution to treat one of the perspectives on anti-stress, antihyperlipidemic use. KEY WORDS : Detarium microcarpum, pulp, adult male rats, lipid, hematological and antioxidant parameters

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

II.2.2 Détermination de la composition chimique de la pulpe de D. microcarpum 34

DU FRUIT DE D. microcarpum 42
II.2.3.1 Evaluation de l'activité anti radicalaire de 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle (DPPH) 42

II.2.3.2 Pouvoir réducteur total 43
II.2.4 EVALUATION DE L'ACTIVITE BIOLOGIQUE in vivo DE LA PULPE DU

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

III.1 Composition chimique et valeur énergétique de la pulpe du fruit de Detarium

III.2 ACTIVITES BIOLOGIQUES in vivo DE LA PULPE DE Detarium microcarpum 58

III.2.1 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum sur,

le poids des animaux et la masse relative des organes des rats albinos 58
III.2.2 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum sur

quelques paramètres de toxicité 59
III.2.3 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de Detarium

microcarpum sur la lipidémie. 60
III.2.4 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum sur

le taux de Malondialdéhyde 62
III.2.5 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum sur

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

INTRODUCTION

Les maladies non transmissibles (MNT) telles que : les maladies cardiovasculaires, les cancers, l'obésité, le diabète de type 2, les maladies respiratoires chroniques constituent aujourd'hui un énorme problème de santé publique. En effet, 70% des tous les décès par an sont dus aux maladies non transmissibles ce qui fait d'elles la première cause de mortalité dans le monde (OMS, 2016). La charge des MNT en Afrique connait la même tendance qu'au niveau mondial on estime qu'en 2008, 40% des décès survenus était dus à ces maladies et si rien n'est fait cette, prévalence passera à 55% en 2025 (OMS, 2013). Plusieurs facteurs de risque sont associés à la survenue de ces maladies notamment les facteurs comportementaux comprenant le manque d'exercice physique, le tabac, l'alcool et la mauvaise alimentation (Chevallier, 2009, Yessito, 2015). Mais aussi les facteurs métaboliques tels que les dyslipidémies, Hyperglycémies etc. Ces facteurs entrainent dans l'organisme la production importante des radicaux libres à l'origine du stress oxydatif qui vont altérer les macromolécules biologiques en favorisant l'installation de ces maladies (Yessito, 2015). De nombreuses stratégies ont été proposées pour lutter contre ces maladies avec un accent particulier mis sur les interventions diététiques (Moro et al, 2000). C'est ainsi que les politiques de santé recommandent la consommation des fruits et légumes quotidiennement car consommé en quantité suffisante, ils pourraient aider à prévenir des affections d'importance majeure, comme les maladies cardiovasculaires et certains troubles métaboliques (Hercberg, 1994). Par ailleurs l'Organisation des Nations Unies (OMS) estime que globalement, jusqu'à 2,7 millions de vies pourraient être sauvées chaque année en augmentant suffisamment la consommation de fruits et légumes (OMS, 2016). C'est ainsi qu'il est recommandé de consommer au moins 5 fruits et légumes par jour ou Consommer au minimum 400g des fruits et légumes par jour (OMS, 2013).

. Les effets protecteurs ou bénéfiques des fruits et légumes sur la santé résultent de leurs
teneurs en certains nutriments et composés bioactifs tels que les fibres, les micronutriments protecteurs (vitamines C, E et le sélénium, le fer, le zinc, le manganèse...), les composés phénoliques qui leur attribuent les effets hypocholestérolémiants, anti anémiques et antioxydantes (Anderson et al., 2001; Genkinger et al.2004 ;). Cependant, il existe une diversité de fruits avec des compositions variées en substances bénéfiques (Ake et al, 2006). Généralement on rencontre les fruits cultivés et améliorés génétiquement et les fruits sauvages. Les fruits sauvages moins connus de la population sont très peu exploités mais pourtant sont une source importante en nutriments et des molécules bioactives (Herzog, 1992). Parmi elle on

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

retrouve Detarium microcarpum qui est une plante dont la répartition naturelle couvre toute l'Afrique subsaharienne aride, du Sénégal au Soudan. La pulpe du fruit se mange cru ou cuite et est utilisée dans la bouillie des bébés généralement pour augmenter la saveur sucrée (Kouyaté, 2005). La consommation de la pulpe est surtout conseillée en temps d'épidémie de méningite. Son fruit renferme une teneur élevée en composés phénoliques, en fibres alimentaires, en vitamine C, et minéraux a l'instar du fer (Makalao et al., 2016 ; Bamisaye et al., 2014 ; Oibiokpa et al., 2014 ; Keni et al., 2014 ; Lamien et al.,2008 ) et pourrait donc être utilisé pour le management des troubles comme le stress oxydant, la dyslipidémie et certaines carences en fer.

En effet les activités antioxydantes de la pulpe du fruit ont été déjà prouvées in vitro par Rouamba et al. (2018) ; Lamien et al.(2008) ; et Aline.(2008) et aussi leurs propriétés antimicrobiennes ( Kini et al., 2010). A la limite de nos connaissances, aucune étude n'a évalué l'effet in vivo de la consommation de la pulpe fruit de Detarium microcarpum sur les paramètres biologiques. D'où la question de recherche, quelles sont les propriétés biologiques de la pulpe de fruit Detarium microcarpum ? Pour répondre à cette question l'objectif général fixé de ce travail est l'évaluation des propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum chez les rats mâles adultes.

1-Determiner les teneurs en nutriments et quelques composés bioactifs présents dans la pulpe du fruit de Detarium microcarpum.

Hypothèse 1 : La pulpe des fruits de Detarium microcarpum présente une teneur importante en nutriments et composés bioactifs.

2- Évaluer l'effet in vivo de la consommation des pulpes de fruits de Detarium microcarpum sur les paramètres sanguines (cholestérol total, HDL-cholestérol, LDL-cholestérol, triglycérides, malondialdéhyde, la créatinine et les transaminases) et hématologiques (numérotation des formules sanguines) des rats mâles albinos adultes.

Hypothèse 2 : la consommation la pulpe de fruit améliore le profil lipidique, hématologique ainsi que l'activité antioxydante des rats mâles albinos adultes.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

I. REVUE DE LA LITTERATURE

I.1 MALADIES CARDIOVASCULAIRES

Sous la terminologie de MCV, la littérature médicale fait le plus souvent référence à des affections chroniques cardiaques ou vasculaires ayant en commun un lien avec l'athérosclérose (ANAES, 2004). Les facteurs de risque» essentiels : le tabagisme, l'hypertension artérielle (HTA), le diabète, la sédentarité, l'obésité et les dyslipidémies. Les dyslipidémies sont les causes majeures de la survenue des maladies cardiovasculaires qui sont définies par une augmentation des taux sériques du cholestérol et/ou des triglycérides. Les sujets dyslipidémies ont de ce fait, le plus souvent, un risque accru de développer une athérosclérose dont les complications cliniques les plus fréquentes est la maladie coronaire, les accidents vasculaires cérébraux (Yessito, 2015).

I.1.1 Les lipides

Les lipides sont des substances organiques hétérogènes apolaires, solubles dans les solvants non polaires. Ils sont constitués d'acides gras à chaîne carbonée plus ou moins longue dont l'estérification des fonctions alcool permet de synthétiser des lipides de composition variée. Les lipides sont séparés en trois sortes de composés : les acides gras, les stérols, et les phospholipides. (Feillet, 2000 et Murray et al., 2013).

I.1.2 Fonction des lipides

- Structurale des tissus et des vaisseaux, puisqu'ils constituent les membranes cellulaires ;

- Dans la physiopathologie vasculaire, les lipides et les lipoprotéines jouent un rôle important dans la genèse des lésions d'athérosclérose ;

- Dans les communications intracellulaires et la signalisation cellulaire puisque de nombreux médiateurs (eicosanoïdes) et hormones (stéroïdes) sont des dérivés lipidiques (du cholestérol ou d'acides gras (Robert et al. (2007).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Ce sont des composés de chaînes linéaires de 4 à 24 carbones avec un groupement COOH à l'extrémité. Les AG sont les unités de base de la synthèse lipidique, estérifient le glycérol pour former des mono-, di- ou triglycérides (Wémeau, 2014 et Feillet, 2000)

Les stérols sont des stéroïdes comprenant au moins un groupement OH. Ils sont, pour la plupart dans leur composition construits sur un noyau à 4 cycles dérivant du noyau de cyclopentanoperhydrophénantrénique. Le chef de file est le cholestérol (Wémeau, 2014 et Feillet, 2000).

Ce Sont des lipides membranaires qui ont la particularité d'être amphiphiles. Ce sont soit des glycérophospholipides, soit des sphingomyélines où le glycérol est remplacé par la sphingosine qui possède une chaîne grasse très longue Christiann, (2006).

Les triglycérides(TG) (ou triacylglycérols) sont des esters d'acides gras et de glycérol (Figure 1), ce sont des graisses neutres, très hydrophobes. Il existe deux types de triglycérides : Les triglycérides simples (homotriglycérides) contiennent le même Acide gras. Les triglycérides mixtes (hétéotriglycerides) contiennent deux ou trois acides gras diffèrent (Christiann, 2006).

Les triglycérides représentent plus des 90% des apports alimentaires, ce sont les véhicules des

vitamines liposolubles (vitamine A, D, E, et K) et source d'acides gras polyinsaturés.

Ils constituent la réserve énergétique le plus important de l'organisme localisés

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Le cholestérol est une substance naturelle vitale de l'organisme humain insoluble, appartient à la famille des stérols, il est à 95% intracellulaire et pèse dans le corps humain environ 140 g. Le cholestérol est présent dans le tissu nerveux, surtout dans la substance blanche, le rein, la peau, le foie, les hématies, les muscles, les intestins et le coeur (Claverie, 2008). La molécule du cholestérol comprend quatre cycles notés A, B, C et D (noyau cyclopentano-phenanthrenique), 8 carbones asymétriques (les carbones 3, 8, 9, 10, 13, 14, 17et 20) (Figure 3).

Le cholestérol est le précurseur de la synthèse des acides biliaires, dans le foie, indispensables à la digestion des lipides. Les hormones stéroïdes, dans les organes stéroïdogènes (corticosurrénales, gonades et placenta), du vitamine-D de la peau.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

- Dans le cytoplasme des cellules (surtout l'intestin et le foie) à partir de l'hydroxy-méthyl-glutaryl-CoA (HMG-CoA). L'HMG-CoA provient de la condensation de 3 Acétyl-CoA venant des peroxysomes. Les acides gras à chaînes courtes (C8), les corps cétoniques et la leucine sont aussi de bons substrats pour la synthèse du cholestérol ;

- L'étape d'engagement est la transformation de l'HMG-CoA en mévalonate par l'HMG-CoA réductase. Les radicaux isoprènes activés, isopentényl pyrophosphate (IPPP) et di méthylallyl pyrophosphate (DMPP) sont produits à partir du mévalonate ;

- Les étapes intermédiaires de la voie, jusqu'au farnésyl pyrophosphate conduisent aux synthèses des radicaux isopentényl et farnésyl (modifications post-traductionnelles des protéines) et des isoprénoïdes (dolichols, ubiquinone et cytochromes a) ;

- A partir du scalènes, débutent les synthèses des stérols : choléstanol, vitamine D et cholestérol (Raisonnier, 2004).

I.1.2.2 Physiologie des lipides

Les lipides alimentaires ne sont pas absorbables directement, car les triglycérides et les phospholipides, leurs formes principales dans l'alimentation sont trop complexes. Les formes absorbables par les entérocytes sont les acides gras libres, les monoglycérides, le cholestérol et les vitamines liposolubles (Ferran, 2011). Les lipides alimentaires ne sont pas hydrosolubles dans la muqueuse intestinale. Afin d'être absorbés, les lipides doivent d'abord passer par différentes étapes : l'émulsifiassions, l'hydrolyse, la formation de micelles et l'absorption par diffusion du contenu micellaire. (Ferran, 2011 et Raisonnier, 2004).

- Des sels biliaires qui aident l'activité enzymatique et l'absorption des produits de la lipolyse ;

- Des enzymes : les lipases ; colipases ; cholestérol estérases et les phospholipase A2 (Ferran, 2011).

I.1.2.3 Digestion intestinale et absorption des lipides

Elle commence par l'émulsifiassion qui est le processus de dispersion de ces grosses gouttelettes en petites particules ; elle est initiée par les sels biliaires déversés dans le duodénum. Par la suite, les produits de l'hydrolyse des TG (MG et AG) s'associent avec les sels biliaires et forment de petites gouttelettes émulsifiées, appelées micelles (Figure 4). Ce sont ces

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

dernières qui permettent de garder en solution les produits provenant de la digestion des lipides qui seraient autrement insolubles. Donc, la micellisation est une étape indispensable à l'absorption optimale des graisses alimentaires. Grace aux sels biliaires qui jouent le rôle d'émulsifiant, ce mélange reste stable.

Les sels biliaires sont des produits de l'oxydation du cholestérol au niveau du foie.

L'émulsion va rendre les lipides accessibles alors à la lipase pancréatique (Ferran, 2011).

Les lipases pancréatiques hydrolysent les molécules lipidiques contenues dans les micelles. Grâce aux micelles qui les contiennent, les produits de dégradation des lipides gagnent la membrane apicale des entérocytes (Figure 5) (Ferran, 2011)..

La traversée de la membrane apicale par les produits lipidiques de dégradation enzymatique (surtout acides gras, monoacylglycérol, cholestérol) se fait par diffusion et par l'intermédiaire de protéines de transport. Dans le cytosol entérocytaire. Les lipides sont dirigés vers le réticulum endoplasmique pour une reconstitution de triglycérides, de phospholipides et d'esters de cholestérol. L'élaboration de lipoprotéines se fait de façon progressive au sein du réticulum endoplasmique puis de l'appareil de Golgi. Les principales lipoprotéines élaborées par l'entérocyte sont les chylomicrons, qui quittent l'entérocyte au pôle basal par exocytose. Le diamètre des chylomicrons les exclut d'un passage dans les vaisseaux sanguins des villosités intestinales. Les chylomicrons quittent donc l'intestin grêle par le système lymphatique et

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

regagnent la circulation sanguine via le canal thoracique. Seuls les triglycérides à chaînes moyennes sont absorbés intacts et gagnent directement le système sanguin porte (Figure 7) (Elesevier-Masson, 2014).

Lorsque le drainage lymphatique de l'intestin grêle est défectueux, comme par exemple au cours de la maladie l'apport alimentaire au moins partiellement sous forme de triglycérides à chaînes moyennes permet de limiter la maldigestion des lipides (Elesevier-Masson , 2014). La colipase, petite protéine de 10 kDa, est secrétée par le pancréas sous la forme d'une procolipase, elle est activée par la trypsine. La colipase possède trois domaines, l'un va servir d'ancrage à la lipase pancréatique, un autre est spécifique de la reconnaissance interfaciale et le dernier est un site de reconnaissance micellaire (Bouquelet, 2008). En l'absence de colipase, la lipase pancréatique serait inhibée par les acides gras libérés et par les sels biliaires de l'émulsion (Bouquelet, 2008). Les triacylglycérides hydrolysés par la lipase pancréatique se verront enlever préférentiellement les acides gras en position 1 et 3 ( Figure 6)

La deuxième enzyme à intervenir est le cholestérol estérase, elle hydrolyse les esters de cholestérol, de vitamines A, D et E, et de Glycérides, et libère des acides gras libres. Elle est capable de lyser les 3 liaisons des triglycérides car c'est une estérase non spécifique. Son activité ne peut se faire qu'avec la présence des sels biliaires (Ferran, 2011, Raisonnier, 2004). Enfin, la troisième et dernière enzyme, la phospholipase A2, hydrolyse les phospholipides pour libérer les acides gras et le lysophospholipidefigure (Figure 6). Elle est activée par la trypsine et ne peut fonctionner qu'avec la présence des sels biliaires (Ferran, 2011).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

I.1.3 Devenir des lipides après absorption

Après l'absorption des lipides, ils seront re-synthétisés à partir du glycérophosphate pour les phospholipides et des monoglycérides pour les triglycérides au niveau des entérocytes. Le cholestérol, quant à lui, est en partie estérifié dans les entérocytes (Raisonnier, 2004). Les acides gras sont aussitôt activés en acyl-CoA pour servir de substrats aux synthèses des lipides. Ces synthèses sont faites par les voies citées précédemment. Les phospholipides sont synthétisés à partir du glycérophosphate provenant du glucose par les enzymes de la voie de Kennedy, la plus importante étant la glycérophosphate acyl-transférase) (Raisonnier, 2004).Les triglycérides des chylomicrons sont synthétisés à partir des monoglycérides parune monoglycéride acyl-transférase propre aux entérocytes et la diglycéride acyl-transférase. Cette voie plus économique en énergie et s'accompagne de synthèse de phospholipides à partir des lysophospholipides absorbés et d'esters de cholestérol (Ferran, 2011 et Raisonnier, 2004).

I.1.4 Dyslipidémies et risque cardiovasculaire

Les dyslipidémies sont des anomalies du taux de lipides circulants dans le sang. Elles constituent avant tout des facteurs de risque de coronaropathie. C'est en fait l'hypercholestérolémie qui apparaît dans la majorité des cas comme étant en cause.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Les lipides sanguins que sont le cholestérol, les triglycérides et les phospholipides sont transportés sous une forme plus hydrosoluble : les lipoprotéines. Celles-ci sont constituées d'un noyau central (cholestérol ou TG) et d'une couche plus superficielle de phospholipides, de cholestérol et de protéines dénommées apolipoprotéines (Bruckert (2007). Ces dernières ont un rôle de solubilité dans le plasma, de fixation au récepteur spécifique des lipoprotéines, et de régulation enzymatique. En pathologie, ce sont surtout le cholestérol et les TG qui sont responsables de la formation de plaques d'athérome (Gautier, 2011).

Les lipoprotéines forment un système macromoléculaire de transport dans le secteur vasculaire dont le centre est composé de lipides hydrophobes triglycérides et des esters de cholestérol, enrobés d'une monocouche de phospholipides amphipathiques et d'apoprotéines hydrophiles (Figure 8) (Chevallier, 2009). Elles assurent le transport des molécules lipidiques et leur exposition aux enzymes contenues dans l'endothélium vasculaire. (Ferran, 2011).

Les lipoprotéines sont classées en fonctions de la taille, de leur composition en lipide et de leur fonction.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

	Taille	Composition	Fonction
Chylomicrons	Très grosse	Très grosse	Transport des TG de l'intestin vers le foie
VLDL	Grosse	TG Cholestérol	Distribution des TG vers les tissus
LDL	Moyenne	Cholestérol ApoB	Distribution du cholestérol à toutes les cellules
HDL	Petite	Cholestérol Apo AI et AII	Retour du cholestérol en excès vers le foie

Le métabolisme des lipoprotéines s'articule autour de trois voies essentielles :

- la voie entéro-hépatique, permettant le transport des lipides exogènes de l'intestin vers le foie ;

- la voie d'apport, assurant le transport centrifuge des lipides du foie vers les tissus périphériques ;

- la voie de retour ou Reverse Cholestérol Transport, permet au cholestérol en

excès dans les tissus extra hépatiques de revenir vers le foie qui l'excrète, par

l'intermédiaire des lipoprotéines HDL ce qui explique les propriétés anti athérogènes des HDL (Gautier, 2011 et Wémeau, 2014).

Elles sont les principales lipoprotéines, favorisent le développement de l'athérosclérose, ce qui explique pourquoi on parle aussi pour elles de «mauvais» cholestérol (Chevallier, 2009). Les LDL sont avant tout chargées de cholestérol, que la cellule utilise à la fabrication de parois cellulaires et d'hormones. Les LDL sont détruites dans les cellules du foie. Si l'entrée des LDL dans le foie est perturbée, le taux de LDL dans le sang augmente. Le cholestérol LDL excédentaire, non détruit, va alors se déposer dans la paroi des vaisseaux, signant l'acte de naissance de l'athérosclérose. Un taux de cholestérol LDL trop élevé est donc mauvais pour le coeur et les vaisseaux. (Robert., 2013 et FSC,2014).

Elles ont des propriétés qui protègent de l'athérosclérose, on comprend donc pourquoi on les appelle aussi «bon» cholestérol (Chevallier, 2009). En effet, les HDL récupèrent dans

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

l'organisme le cholestérol excédentaire surtout celui qui s'est déjà déposé dans les parois vasculaires et l'accompagnent jusqu'au foie où il sera détruit et éliminé avec la bile. Un faible taux de HDL dans le sang est donc mauvais pour le coeur et les vaisseaux. (Hennen., 1996)

Elles transportent surtout des graisses neutres, appelées triglycérides. Ceux-ci sont stockés dans des cellules graisseuses à titre de réserve énergétique ou sont utilisés dans les cellules musculaires pour produire de l'énergie. Les dangereuses LDL vont naître plus tard de ces VLDL qui se «dégonflent» comme des baudruches. De plus, la transformation des VLDL utilise des éléments du «bon» cholestérol, et le taux de cette dernière baisse dans le sang. Un taux élevé de triglycérides est donc mauvais pour le coeur et les vaisseaux FSC, 2014) : L'élévation des lipides sanguins agit comme un «carburant» du rétrécissement des artères. La situation est particulièrement critique si le taux de mauvais cholestérol LDL est trop élevé et le taux de cholestérol HDL protecteur trop bas. C'est souvent le cas chez des patients qui souffrent déjà de symptômes d'athérosclérose (par exemple angine de poitrine, infarctus du myocarde ou attaque cérébrale).

I.1.5 L`athérosclérose

L'Organisation Mondiale de la Santé(1958) définie l'athérosclérose comme une association de remaniements de l'intima et de média des artères (Figure 9) de gros et moyen calibre. Elle Constitue une accumulation focale de lipides, glucides complexes, de sang et de produit sanguin, des tissus fibreux et de dépôts calcaires. La cause essentielle de l'athérosclérose est l'excès de cholestérol (Figure 10) sanguin correspondant à l'élévation permanente (ou transitoire) des LDL qui après modification chimique (oxydation, modification enzymatique) sont captées par les macrophages de l'endothélium vasculaire (Aurélie, 2012). De grosses cellules spécialisées dans le nettoyage (macrophages) se gavent de cholestérol, gonflent et donnent l'impression d'être remplies de mousse (cellules spumeuses). S'y ajoutent des cellules musculaires lisses et des cellules du tissu conjonctif avec leurs fibres. Le tout façonne une sorte de coussinet (plaque d'athérome) autour des substances graisseuses déposées là. Cette saillie fait peu à peu irruption dans la lumière de l'artère et contrarie le flux sanguin (Figure 11). Il y a danger lorsqu'une plaque se rompt. Il se forme rapidement un caillot de sang (thrombus) susceptible d'obstruer l'artère. Si la thrombose se produit dans une artère coronaire, elle déclenche un infarctus du myocarde, témoin de l'arrêt subit du flux sanguin dans un

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

territoire cardiaque. Si l'accident survient dans une artère qui alimente le cerveau, c'est l'attaque cérébrale, car une aire cérébrale est brusquement privée de son approvisionnement sanguin.

L'artère normale est revêtue d'une seule couche de cellules (endothélium), qui reposedirectement sur la couche musculaire.

Le début de l'athérosclérose s'extériorise sous forme de stries graisseuses. Elles se caractérisent par des dépôts sous l'endothélium de cholestérol LDL oxydé et de grosses cellules nettoyeuses macrophages.

Si un tel coussinet (plaque d'athérome) se rompt, la coagulation sanguine entre aussitôt en action (Aurélie, 2012). Les plaquettes et les fils de fibrine se positionnent au point de rupture pour y former un caillot de sang (thrombus) qui peut obstruer complètement l'artère. Suivant le lieu où survient l'accident, il peut avoir pour conséquence un infarctus du myocarde, une attaque cérébrale où une oblitération artérielle dans une jambe (FSC, 2014 ).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Figure 11: Artère rétrécie, plaque d'athérome brisée et constitution d'un caillot de sang (thrombus)

I.1.6 Traitement des hyperlipidémies

Il existe différents médicaments hypolipémiants. Le choix dépend entre autres du ou des lipides sanguins en excès et de la spécialité qui sera la mieux supportée par le patient. On distingue :

Le mécanisme d'action principal de toutes les statines est d'inhiber la biosynthèse du cholestérol par inhibition compétitive de l'HMG-CoA réductase (3-hydroxy 3-méthyl-glutaryl coenzyme A réductase), Cette inhibition compétitive est due à l'analogie structurale des statines avec l'HMG-CoA, le substrat naturel de l'enzyme (Sparks et al., 2005 ). Le cholestérol arrive donc en moindre quantité dans le sang et les cellules hépatiques peuvent détruire plus de «mauvais» cholestérol. Les LDL et les triglycérides diminuent dans le sang et les HDL s'élèvent légèrement. Les statines peuvent aussi influencer favorablement les processus complexes à l'oeuvre dans la couche interne des artères, en rendant plus difficile la pénétration du cholestérol et en s'opposant à son dépôt (Lauer, 2002.). L'évolution de l'athérosclérose ralentit et le risque d'infarctus du myocarde ou d'attaque cérébrale (éventuellement le risque de nouvel infarctus ou de nouvelle attaque) diminue. Les statines sont à prendre une fois par jour. Elles occasionnent parfois des effets secondaires à type de troubles musculaires ou abdominaux ou de nausées (Lauer, 2002).

Les fibrates font baisser l'excès de triglycérides sanguins. On les utilise lorsqu'un taux de triglycérides très élevé ne baisse pas suffisamment en dépit d'une modification rigoureuse

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

de l'alimentation. Les effets secondaires éventuels sont des troubles gastro-intestinaux et des taux d'enzymes hépatiques trop élevés (FSC, 2014). Il peut être indiqué de prescrire un fénofibrate (substance active hypolipémies appartenant au groupe des fibrates) en plus d'une statine si l'on parvient à bien contrôler le cholestérol LDL, mais pas à faire baisser les triglycérides de manière optimale. Dans ce cas également, il s'agit d'apporter une protection supplémentaire aux vaisseaux contre l'athérosclérose et donc de réduire le risque

Ils agissent sous forme de poudre dans l'intestin et empêchent les acides biliaires de passer à nouveau dans le sang et le foie pour y être recyclés. Les acides biliaires étant des éléments importants de la production de cholestérol, cette action diminue le taux de cholestérol sanguin. Les acides (ou sels) biliaires liés aux médicaments sont éliminés par les selles. Possibles effets secondaires à type de ballonnements, constipation, nausées et éructations. (Fruchar et al.,1999). Ils s'opposent à ce qu'il soit réabsorbé par l'intestin. En conséquence, les taux de (mauvais) cholestérol LDL et de triglycérides chutent et celui de cholestérol HDL s'élève légèrement. La combinaison d'un inhibiteur de l'absorption du cholestérol avec une statine va à la fois inhiber l'absorption de cholestérol dans l'intestin et la production de cholestérol dans le foie, ce qui fait baisser efficacement les taux de LDL. On relève parfois des effets secondaires à type de maux de tête, douleurs abdominales ou diarrhée (Lauer, 2002).

I.1.7 Prise en charge nutritionnelle

De nos jours on recommande la consommation des fruits et légumes, ceux-ci renferment de fibres, des composés phénoliques et des vitamines et des minéraux protecteurs.

I.1.7.1 Fibres alimentaires.

Il est prouvé que les fibres hydrosolubles sont capables de se lier aux sels biliaires présents dans l'intestin et de les éliminer dans les selles. La muqueuse sensible de l'intestin est ainsi protégée. Pour remplacer les sels biliaires éliminés après liaison par les fibres, le foie doit synthétiser de nouveaux acides biliaires. Pour réaliser cette synthèse, du cholestérol sanguin est transportée dans le foie, ce qui fait baisser le taux de cholestérol dans le sang (Claudia, 2014). L'action hypocholestérolémiante de certaines fibres pourrait également être méditée par l'acide propionique issu de leur fermentation intracolique. Cet acide est en effet capable d'inhiber la

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

synthèse hépatique du cholestérol (inhibition in vitro de l'HMG CoA reductase) (Rouanet, 2012).

I.1.7.2 Vitamines et composés phénoliques

L'oxydation est un facteur important de dépôt de cholestérol LDL dans la paroi interne des artères où se développent alors des formes réactives d'oxygène appelées «radicaux libres». Ceux-ci accélèrent les processus de vieillissement comme l'athérosclérose. Mais l'action néfaste des radicaux libres peut être partiellement freinée à l'aide de ce que l'on appelle des antioxydants (Amiot et al., 2007). Des antioxydants naturellement présents dans les aliments, par exemple les vitamines E et C et le bêta-carotène, contenus principalement dans les fruits et légumes, protègent notre organisme des radicaux libres. De nombreuses substances végétales secondaires (par exemple des polyphénols tels que les flavonoïdes) ont aussi une action antioxydante et inhibe la lipase pancréatique. On les trouve surtout dans la peau, l'écorce et les substances aromatiques des fruits et légumes. Il n'existe ni recette miracle pour un apport quotidien optimal d'antioxydants, ni «potion magique» antioxydante, bien au contraire : plusieurs vastes études ont montré que les antioxydants sous forme de comprimés ou de compléments vitaminés n'ont pas l'effet escompté, voire portent atteinte à la santé (Galan et hercberg, 1994). On peut donc seulement recommander de suivre les principes de l'alimentation méditerranéenne et de consommer chaque jour des vitamines sous leur forme naturelle : fruits, légumes et salades (5 portions ou 600 g par jour).

I.1.7.3 Les phytostérols

Les phytostérols sont des lipides végétaux. Ils ont une structure chimique très proche de celle du cholestérol.

Bien que structurellement très proches du cholestérol, les phytostérols sont très peu absorbés par le corps et restent dans la lumière intestinale avant d'être évacués dans les selles. L'action principale, bien décrite, et de diminuer l'absorption du cholestérol. Ils entrent en compétition avec le cholestérol dans la formation des micelles. Ayant une plus grande affinité, ils déplacent le cholestérol libre vers la lumière intestinale, cholestérol qui ne sera donc pas absorbées et sera éliminé dans les fèces (Lecerf, 2006).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

I.2 GENERALITES sur le stress oxydant

I.2.1 Les radicaux libres

Ce sont les entités chimiques très instables et réactionnelles suite à la présence d'un électron libre dans leur structure (Gerschman, 1950).

Les radicaux libres (RL) qui proviennent de l'oxygène sont appelés espèces réactives de l'oxygène (ERO) alors que les RL qui sont génères de la réaction de l'oxygène avec le nitrogène sont appelés espèces réactives de nitrogène (ERN) (Penna et al., 2009).

I.2.2 Espèces réactives de l'oxygène (ERO)

Les espèces réactives peuvent être d'origine endogène, apparaissant comme sous-produits du métabolisme de certaines enzymes telle que : la xanthine oxydase, la lipoxygénases et les cyclooxygénases. Les cellules phagocytaires activées sont le siège d'un phénomène appelé ½explosion oxydative½, consistant en l'activation du complexe NADPH oxydase, enzyme capable d'utiliser l'oxygène moléculaire pour produire de grandes quantités d'anions superoxyde au niveau de la membrane cellulaire. Ce mécanisme lorsqu'il est contrôlé est capital dans la lutte infectieuse car il permet la phagocytose des bactéries et des corps étrangères (Favier, 2003).

Les ERO sont aussi produits par le processus de transfert des électrons au niveau des mitochondries des cellules aérobies de l'organisme. Elles peuvent être également formées aux niveaux de cytoplasme, membrane cytoplasmique, le peroxysome et lysosome etc.(Fiorucci, 2006).

Les ERO sont également générées sous l'effet de stress environnementaux comme la pollution, l'exposition prolongée au soleil, l'absorption d'alcool ou de médicaments, l'effort intense et prolongé, ainsi que le tabagisme (une bouffée de cigarette contient environ 10 radicaux) (Panda et al., 1999 ; Pincemail et al., 2002 ; Fiorucci, 2006). Dans les circonstances normales, cette surproduction est parfaitement maitrisée par des systèmes de défense donc la balance antioxydant/pro-oxydant est en équilibre.

les espèces réactives sont également d'origine exogène, elles sont générées sous l'effet des facteurs environnementaux, des polluants divers, des radiations (UV, rayons gamma), certains produits chimiques, ainsi que des contamination par des pesticides ou des métaux lourds ou carences nutritionnelles (Rao et al., 2011 ).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Les ERO constituent une classe important produite dans les systèmes vivants. Les ERO radicalaires sont O2°-, OH°, O2¹ et non radicalaire est H2O2 (Tableau 2) (Seifried, 2007).

Tableau 2: Les espèces réactives de l'oxygène les plus importants (Seifried, 2007).

ERO radicalaires
Anion super oxyde (O2°-)	C'est un radicale relativement issu de la réduction mono- électronique (addition d'un seul électron). selon la réaction : O2 + O2^°- e-
	Participe à l'inactivation des virus et bactéries
Radical hydroxyle (OH^°)	-Il est formé à partir de (O2^°-) et (H2O2) en présence d'ions ferriques selon : d'Haber H2O2 + O2° OH°+ OH^-+ O2 -Réaction weiss :
	de fenton H2O2 + Fe²⁺ OH°+ OH^-+ Fe³⁺ -Réaction :
	-provoqué des lésions oxydatives sur L'ADN, les protéines et les lipides.
ERO non radicalaires
Oxygène singulet (O2¹)	-C'est la forme excitée de l'oxygène moléculaire ou O2°-, obtenu par appariement des deux électrons célibataire de l'O2. Selon la réaction : O° + O° O2¹ -Il peut sous l'action des UV d'oxyder de nombreuses molécules
Peroxyde d'hydrogène (H2O2)	Le H2O2 est toxique pour la cellule, formé par dismutation, soit spontanée ou suit à l'action de l'enzyme de superoxyde dismutase, selon la réaction : SOD O2°- + O2° H2O2 + O2

I.2.3 Espèces réactives de nitrogène (ERN)

Les ERN radicalaires sont le monoxyde d'azote et dioxyde d'azote. Alors que l'ERN non radicalaires la plus connus est le peroxynitrite (Tableau3) (Delater et al., 2003).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

ERN radicalaires
Monoxyde d'azote (NO°)	Le NO° est un radical qui possède un seul électron célibataire, il est formé dans les tissues biologiques, par le nitrique oxyde synthase (NO synthase). - Il est susceptible de réagir avec d'autres radicaux libres pour former des espèces oxydantes telles que l'O2 pour donner le (ONOO^-). NO°+ O2° ONOO^-

	Le NO2° se forme à partir de radical peroxyde et le monoxyde d'azote, il est très abondant dans les polluants atmosphériques.
ERN non radicalaires
	Le ONOO^- est un oxydant très puissant, capable d'endommager de nombreuses molécules biologiques (ADN, protéine et lipides...). ONOO^-+H⁺ ONOOH HO°+NO2 NO3^-+H⁺

I.2.4 Le stress oxydant

Le stress oxydant est le déséquilibre entre la génération des ERO et la capacité du corps à les neutraliser et à réparer les dommages oxydatifs, ce déséquilibre a pour conséquences l'apparition de dégâts souvent irréversibles pour les cellules (Aravodis, 2005).

I.2.4.1 Les conséquences du stress oxydant.

Les cibles biologiques (Figure 12) les plus vulnérables à cet endommagement oxydatif sont : l'acide désoxyribonucléique (AD N) (modification des bases, cassure des brins) (Rehman et al.,1999),les protéines (modification structurales et fonctionnelles) et les lipides (peroxydation lipidique) (Hu et al., 2005). L'accumulation des ERO a pour conséquence l'apparition de dégâts cellulaires et tissulaires souvent irréversibles (Halliwell et Whiteman,2004 ; Valko et al., 2006).

Les lipides et précisément leurs acides gras polyinsaturés sont la cible privilégiée de l'attaque par les ERO, réaction appelée peroxydation lipidique. Ses conséquences seront différentes :

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

- L'attaque des lipides circulants aboutit à la formation des LDL oxydées, qui captées par des macrophages forment le dépôt lipidique de la plaque d'athérome des maladies cardiovasculaires ;

- L'attaque des phospholipides membranaires entraine la perte d'acides gras polyinsaturés, modifie la fluidité de la membrane et donc le fonctionnement de nombreux récepteurs et transporteurs et la transduction des signaux (Favier, 2003) ;

- La majorité des acides aminés des protéines peuvent êtres oxydés par les ERO. Les aminoacides soufrés (méthionine, cystéine) et aromatiques (tyrosine, tryptophane) sont les plus sensibles. L'oxydation des acides aminés génère des groupements hydroxyles et carboxyles sur les protéines, mais peut également induire des modifications structurales plus importantes comme la fragmentation des chaines, formation des réticulations intra ou intermoléculaires, ce qui affecte leurs fonctionnements et leurs activités (Martinez ,1995 ; Leucher et al., 2001; Valko et al., 2007). Les protéines ainsi modifiées deviennent plus sensibles à l'action des protéases et alors dirigées vers la dégradation protéolytique au niveau du protéasome (Jung et al., 2007).

Figure 12: Cibles biologiques et endommagements oxydatifs induits par les ERO (Kohen et Nyska, 2002)

I.2.4.2 Facteurs aggravants le stress oxydant

Les facteurs aggravants le stress oxydant entrainent la surproduction de dérivés réactifs de l'oxygène ce sont :

Le vieillissement diminue les défenses antioxydantes et augmente la production mitochondriale de radicaux accompagnés d'une diminution de l'efficacité des systèmes de

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

réparation et de dégradation des constituants oxydés (Sohal et al., 2002). Une alimentation non optimisée peut causer une surproduction d'ERO, notamment en cas de carence ou de surconsommation protéique. Certaines protéines comme l'homocystéine induisent une surproduction du radical superoxyde. De plus, une consommation trop importante de protéines stimule la synthèse d'ERO,en particulier dans les leucocytes. Une surconsommation de lipides cause également l'augmentation de leur oxydation par le peroxyde d'hydrogène et donc sa synthèse (Fanga et al., 2002).

I.2.5 Les antioxydants

Un antioxydant est défini comme étant toute molécule ou réseau de molécules variées (enzymes, protéines, oligo éléments) qui réagissent entre elles , sont produites par l'organisme, mais aussi apportées par notre alimentation, à concentration relativement faible, capable d'entrer en compétition avec d'autres substrats oxydables et peut retarder, inhiber ou empêcher l'oxydation des substrats biologiques (Boyd et al., 2003; Berger, 2006). Ce sont des composés qui réagissent avec les ERO et les rendent ainsi inoffensifs (Vansant, 2004).

Les défenses antioxydantes reposent sur des systèmes enzymatiques : superoxyde dismutases (SOD), catalases et glutathions peroxydases ; et non enzymatiques comme les vitamines C, E, les polyphénols, les caroténoïdes etc. (Leverve, 2009). Ainsi le cuivre, le zinc et le fer sont des cofacteurs pour la superoxyde dismutase, le fer est également un cofacteur pour la catalase et le sélénium est le cofacteur du glutathion- peroxydase (Delattre et al., 2003).

I.2.5.1 Les antioxydants enzymatiques

Le superoxyde distumase (SOD) constitue la première ligne de défense contre les radicaux libres de l'oxygène, découvert par Mecord et Fridovih en 1969, elle catalyse la dismutation de l'anion superoxyde en oxygène et en peroxyde d'hydrogène (Libbey, 2007).

Chez l'homme, trois isoformes compartimentées de l'enzyme SOD ont été caractérisées de façon biochimique et moléculaire. La Cu/Zn-SOD ou SOD1cytosolique, et la EC-SOD ou SOD3 extracellulaire, qui utilisent le cuivre et le zinc comme cofacteurs nécessaires à l'activité enzymatique, alors que la SOD2 mitochondriale utilise le manganèse (Zelko et al., 2002).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Les catalases sont des enzymes qui permettent de transformer le peroxyde d'hydrogène en oxygène moléculaire et en eau : sont localisées à l'intérieure de peroxysome exclusivement, ce qui limite leur action par rapport à d'autre enzyme, cytoplasmique (Libbey, 2007).

Les Glutathion peroxydase (GPx) sont des enzymes tétramérique à sélénium cytoplasmique et mitochondrial, qui peuvent réduire le peroxyde d'hydrogène en eau, en utilisant la capacité réductrices du couple glutathion /glutathion disulfite (GSH/GSSG), son rôle principal consiste en l'élimination des peroxydes lipidiques résultant de l'action du stress oxydant sur les acides gras polyinsaturés. La GPx est effondrée en cas de déficit majeur en sélénium, ce dernier étant essentiel pour l'activité de cette enzyme (Nasri et al., 2014).

I.2.5.2 Les antioxydants non enzymatiques :

La vitamine C ou l'acide ascorbique est un antioxydant majeur présent dans tous les organes, elle est l'un des principaux antioxydants hydrosolubles présent dans les fluides intra et extracellulaire, la vitamine C peut directement réagir avec des espèces réactives de l'oxygène comme OH
· et O2
·, la vitamine C régénère la vitamine E à l'interface membrane/cytosol Medjoujda (2013), Haleng et al.,2007). La vitamine C protège ainsi les biomembranes et les lipoprotéines (Bouldjadj, 2009).

Le vitamine E étant liposoluble, elle se fixe aux membranes et peut ainsi séquestrer les radicaux libres empêchant la propagation des réactions de peroxydation lipidique. En protégeant ainsi les cellules contre les dommages associés aux radicaux libres et par conséquent, prolonge la vie cellulaire tout en ralentissant le processus de vieillissement (Atti, 2014).

La â-carotène, précurseur de la vitamine A, est apporté par l'alimentation. Elle est douée de plusieurs capacités, elle capte l'oxygène singulet sous faible pression d'oxygène et, avec les autres caroténoïdes, elle a le pouvoir de terminer les réactions en chaine de lipoperoxydation. Elle protège les structures cellulaires contre l'agression oxydante en s'opposant à la

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

génotoxicité de nombreux agents. L'activité antioxydante de ceux-ci est liée à leur longue chaîne polyénique qui leur permet de réagir avec les radicaux ROO
·, HO
·, O2
·-, R
· par simple addition électrophile et transfert d'électron (Valko et al., 2006)

Ces oligo-éléments interviennent comme cofacteurs d'enzymes indispensables dans la lutte contre les radicaux libres. Parmi ces oligo-éléments, le zinc, le sélénium et le manganèse ont une action définie (Priymenko, 2005).

Le zinc joue un rôle antioxydant indirect en assurant la stabilisation de la Cu-Zn SOD.

Le zinc inhibe la production des espèces radicalaires de l'oxygène ERO par les métaux de transitions, en entrant en compétition avec le fer et le cuivre dans la réaction de Fenton. Le zinc protège les groupements thiols (SH) des protéines contre l'oxydation induite par le fer, en empêchant la formation de ponts disulfure intramoléculaires (Delattre et al., 2005).

Cette enzyme fait partie du système de défense antioxydant endogène de l'organisme. Elle permet la conversion de l'anion superoxyde en peroxyde d'hydrogène (Priymenko, 2005). Le sélénium n'est pas un antioxydant en tant quetel, car il ne peut piéger les radicaux libres, mais il joue un rôle primordial comme cofacteur de la GPx. Dans l'alimentation, on retrouvera essentiellement du sélénium organique, lié à un acide aminé, la cystéine. Le sélénium organique est mieux absorbé, il subit une métabolisation hépatique qui conduit à des intermédiaires nécessaires à la synthèse de dérivés physiologiquement actifs comme la GPx (Priymenko, 2005).

Le cuivre, a concentration physiologique, le cuivre est le cofacteur d'enzymes comme la SOD, le cytochrome C oxydase, la dopamine hydroxylase. Cependant, en tant que métal de transition, il joue un rôle important dans le déclenchement de réactions de production d'ERO (réactions de Fenton) et peut lorsque sa concentration est élevée devenir pro-oxydant (Haleng et al.,(2007)

Les polyphénols, groupe de molécules de structures variées, trouvent d'ores et déjà une large utilisation en phytothérapie. Pour autant, leur connaissance est encore imparfaite. Ils suscitent actuellement beaucoup d'intérêt en raison du bénéfice qu'ils pourraient apporter en termes de prévention des maladies liées au vieillissement : infarctus du myocarde, cancers, maladies neurodégénératives (Halliwell, 1994). Ils sont rencontrés spécialement chez les

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

végétaux (fruits et légumes surtout) et font parties des métabolites secondaires ou substances bioactives.

Les polyphénols exercent une activité antioxydante via plusieurs mécanismes :

- La chélation des ions de métaux de transitions, responsables de la production des ERO ; - L'induction de la biosynthèse d'enzymes antioxydantes (Halliwell, 1994).

Des effets protecteurs de la consommation d'aliments riches en polyphénols vis-à-vis de différentes pathologies (maladies cardiovasculaires, cancers, diabète...) ont été mis en évidence tant d'un point de vue épidémiologique qu'expérimental. De nombreuses études se sont penchées sur l'analyse du mode d'action des polyphénols dans la prévention de ces pathologies, qui met en cause les propriétés réductrices des polyphénols et/ou leur affinité pour une grande variété de protéines (enzymes, récepteurs, facteurs de transcription). Plusieurs auteurs ont rapporté ces effets sur les maladies cardiovasculaires en inhibant de l'oxydation des LDL, l'inhibition de l'agrégation des plaquettes et l'inhibition de la formation de cellules spumeuses dans les aortes). Ils agissent également sur le diabète par différents mécanismes dont l'inhibition de l'absorption du glucose au niveau intestinal encore son assimilation dans les tissus périphériques par inhibition de la gluconéogenèse ou stimulation de la libération de l'insuline par les cellules â du pancréas), et préviennent le cancer par induction de l'arrêt du cycle cellulaire ou de l'apoptose et autres pathologies. (Scalbert et al., 2005 ; Garcia et al., 2009)

I.3 GENERALITES sur Detarium microcarpum

I.3.1 Origine et répartition géographique

Detarium microcarpum est présent à l'état naturel dans les régions arides d'Afrique de l'Ouest et d'Afrique centrale, depuis le Sénégal et la Gambie jusqu'au Soudan. Une espèce des savanes boisées et des forêts claires des zones soudano-guinéenne et soudano-sahélienne du continent africain (Arbonnier, 2000 ; Kouyaté, 2011). Elle couvre toute l'Afrique subsaharienne aride, du Sénégal au Soudan. On trouve notamment cette espèce au Bénin, au Burkina Faso, au Cameroun, en Côte d'Ivoire, en Gambie, au Ghana, en Guinée, en Guinée Bissau, au Mali, au

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Niger, au Nigeria, en République centrafricaine, au Sénégal, au Soudan et au Tchad (Kouyaté

La plante est connue sous plusieurs appellations qui dépendent d'un pays à l'autre ou

d'une langue à une autre. C'est ainsi qu'en français elle est connue sous les appellations Petit

I.3.2 Morphologie de Detarium microcarpum

Detarium microcarpum est un arbre de 8 à 12 de haut (Figure 13a), possédant une écorce écailleuse à tranche rouge (Figure 13 b).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Figure 13 : photographie de plante entière(a) et l'écorce (b) de Detarium microcarpum

Les feuilles sont pennées et comportent de 6 à 8 (-12) folioles, disposées de manière alterne ou subopposée. La foliole est ovale à elliptique, longue de 7 à 11 cm, large de 3 à 4 cm dans la partie inférieure. Elle est arrondie aux deux extrémités et émarginée au sommet. Le limbe est coriace, glauque, gris-blanchâtre dessous, et comporte des points translucides (Figure 14a).

La fleur apétale, de couleur crème, comporte 4 sépales, 10 étamines. Le calice en bouton est densément pubescent à l'extérieur (Figure 14b) (Anne-Laure., 2007).

Figure 14 : photographie de feuille (a) et la fleur (b) de Detarium microcarpum

Le fruit est une drupe globuleuse ou subglobuleuse, aplatie, de 2.5 à 5 cm de diamètre. L'épicarpe se craquelle à maturité, le mésocarpe verdâtre est entremêlé de fibres insérées sur le noyau (figure 15a). Le fruit est comestible. Son fruit est une drupe qui se caractérise par une graine (plus rarement plusieurs graines) enfermée dans un endocarpe qui est entouré par un mésocarpe (Figure 15b), juteux, parfois fibreux et protégé extérieurement par un épicarpe (Schmidt, 2000).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Figure 15 : photographie de la graine (a) et pulpe (b) de Detarium microcarpum

I.3.3 Écologie de Detarium microcarpum

Le petit détar est réparti de manière irrégulière dans les parties semi-arides des zones agro-écologiques sahélienne et soudanienne. Il est très répandu dans les savanes boisées, les savanes arbustives et les zones forestières sèches semi-défrichées. Par ailleurs, c'est l'une des espèces les plus abondantes sur les terres en jachère. En général, il pousse sur des sols sableux ou durs à forte teneur en fer et en présence de champignons mycorhiziens (Kouyaté., 2005). Il est fréquent et largement répandu dans les savanes arbustives et arborées (Adama., 1997)

I.3.4 Composition chimique du fruit

La composition en nutriments en substances bioactives est très importante dans la matière sèche de fruit Detarium microcapum. Généralement la teneur est influencée par plusieurs facteurs tels que la maturité, le type de sol, la période de récolte et le temps de conservation. Le tableau 4 montre la composition chimique de fruits Detarium microcapum.

Tableau 4 : Composition chimique de fruits de Detarium microcapum rapporté par différents auteurs.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

I.3.5 Utilisations du fruit

I.3.5.1 Utilisations alimentaires

Possédant un gout sucré, la pulpe est utilisée comme substitut du sucre. Il est consommé à l'état cru, cuit ou transformé mais traditionnellement la pulpe est transformée en farine utilisée dans la préparation de gâteaux, de pain, de semoule. La farine du fruit est utilisée dans la bouillie des bébés, la bière locale, préparation des nectars et des sirops très appréciés par le

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

consommateur. Il est aussi consommé comme source de vitamine C et font partie des habitudes alimentaires chez les Sénoufo et les Minianka (Kouyate., 2005 ; Onweluzo et al., 1999). Les grands consommateurs sont les enfants car les adultes accordent peu d'importance aux fruits sauvages. (Brigitte et al., 2008 ; Oibiokpa et al., 2014 ; Kouyate et al.,2002) ont rapporté également l'utilisation alimentaire de la pulpe de fruits. Certains données ajoutent que les graines sont parfois utilisées pour la préparation des gâteaux et du pain (Burkill, 1995 ; Arbonnier, 2000) pour l'alimentation humaine. La graine est consommée au Cameroun et Tchad principalement chez les Masa et les Muzey (Garine, 2002), tandis qu'elles sont également utilisées comme épices et condiments au Nigeria (Falconer, 1990). Les graines de D. microcarpum avaient une application culinaire au Nigeria et dans certains pays ouest-africains comme épaississant et émulsifiant dans les préparations des nourritures traditionnelles (Onweluzo et al., 1999).

I.3.5.2-Utilisations en médecine traditionnelle

La plante occupe une place importante dans la pharmacopée traditionnelle. Au Mali la décoction de racine et d'écorce est utilisée pour le traitement de maux de tête chez les enfants, le rhumatisme, le maux de ventre, la diarrhée et celui des feuilles pour maux de poitrine, folie, anémie et la démangeaison. La décoction d'écorces est également utilisée pour traiter la Rougeole, le Paludisme. Le fruit cru est utilisée dans le traitement la méningite et du paludisme, (Kouyaté et al., 2002).

Généralement en Afrique de l'ouest le fruit est utilisé pour soigner le vertige, méningite et nombreux usages magico-religieux. Au Nigeria et au Mali les feuilles sont utilisées dans le traitement des diarrhées et de la dysenterie, employées comme pansement pour les blessures. Au Nigeria toujours l'écorce est utilisée dans le traitement de la dysenterie alors qu'au Niger il est utilisé dans l'amibiase et rhumatismes (Garine, 2002). Au Sénégal les feuilles sont utilisées pour soigner les hémorroïdes et de la blennorragie et l'infusion de ces feuilles sont utilisée comme anti-inflammatoire et diurétique et la décoction de la racine pour traiter la Syphilis. La cendre de l'écorce est utilisée pour traiter l'épilepsie (Anne-Laure., 2007).

I.3.6 Les études réalisées sur les fruits.

Detarium microcarpum a fait l'objet de plusieurs études démontrées par des propriétés pharmacologiques. Parmi ces propriétés on peut citer :

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

I.3.6.1 Propriétés antioxydantes

La capacité antioxydante in vitro des extraits éthanolique de la pulpe des fruits de D. microcarpum a été démontrée par les travaux de Rouamba et al. (2018). L'extrait à l'éthanol de la pulpe de fruits de D. microcarpum a présenté une activité antioxydante intéressante dans les essais de dégradation du 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle (DPPH), avec un pourcentage d'inhibition de 47,87%, de la dégradation du désoxyribose (69,06 %), la peroxydation lipidique (69,06 %) à la concentration de 100 jig / mL. L'extrait ethanolique de la pulpe du fruit a également présenté une activité anti-radicalaire au test ABTS avec un pourcentage de 159,55% (Rouamba et al., 2018). L'activité antioxydante in vitro des extraits méthanoliques et acétones de la pulpe de fruit D. microcarpum ont également présenté une activité antioxydante plus intéressante en utilisant les trois dosages antioxydants : la capacité de piégeage des radicaux libres par la DPPH, le pouvoir antioxydant réducteur ferrique (FRAP) et la capacité de piégeage des cations radicaux (ABTS) (Lamien et al., 2008).

L'extrait d'éthanol de D. microcarpum fruit (100jig /ml) a montré aucun effet hémolytique mais réduit significativement l'hémolyse des érythrocytes humains et de rats avec des pourcentages inhibiteurs supérieurs à 50 et 75%, respectivement provoqué par une induction de le nitroprussiate de sodium et le sulfate ferrique.

I.3.6.2 Effets hématologiques

La consommation de 500 mg par jours pendant 4 semaines de la pulpe de Detarium microcarpum a montré des effets benefiques principalement sur l'augmentation de poids chez les rats adultes mâles, une multiplication des cellules sanguines (globules rouges) et augmentation de l'hématocrite. (Wahedi et al., 2013).

I.3.6.3 Etudes toxicologiques.

L'activité génoprotectrice a été évaluée in vitro de l'extrait éthanolique de fruits de Detarium microcarpum sur des cellules hépatiques de souris femelles en utilisant du cyclophosphamide comme agent génotoxique chez les souris femelle. Apres une administration jusqu'à la 2000mg/kg de l'extrait éthanolique de la pulpe de Detarium microcarpum du poids. Aucun effet délétère n'a été enregistré mais plutôt protège les gènes. Ils ajoutent que L'extrait d'éthanol possède des composés antioxydants ayant des propriétés génoprotectrices (Roumba et al.,2018) et comparativement aux travaux Hanan et al.(2009) qui ont montré que les extraits aqueux a dose de 100-150mg de Detarium senegalense était déjà toxique.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

I.3.6.4 Propriétés antimicrobiennes

Kini et al. (2010) ont montré que l'extrait hydroalcoolique et du macéré de la pulpe du fruit présentaient une activité antibacterienne. Loubak et al.(1999) ont montré les activités antimicrobiennes des extraits aqueux totaux(les fruits, les feuilles et les écorces) de Detarium microcarpum sur huit espèces bactériennes impliquées dans certaines maladies infectieuses au Burkina Faso, il ressort que le décocté de la pulpe n'agit que sur Neisseria meningitidis (bactérie responsable de la méningite chez l'homme) a des concentrations comprises entre o et 30 mg/ml. La consommation accrue des fruits de D. microcarpum pendant la période d'épidémie de méningite à titre préventif et/ou curatif se justifierait aussi par l'action du fruit sur Neisseria meningitidis.

I.3.6.5 Propriétés immunologiques

Nikiéma et al.(2009) ont montré que dans la Stratégie d'utilisation des substances naturelles pour la prise en charge des personnes vivants avec le VIH que des substances naturelles sont également recommandées par les tradipraticiens de santé pour la récupération immunologique et nutritionnelle, le traitement précoce de l'infection à VIH et la réduction des effets secondaires des traitements ARV (antirétroviral). Il s'agit respectivement pour les plus importantes d'entre elles, des feuilles de Moringa oleifera (Moringaceae), de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum, de la spiruline et du pollen issu de la ruche.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

II. MATERIEL ET METHODES

II.1 MATERIEL

II.1.1 Matériel végétal

Les fruits de Detarium microcarpum ont été collectés en janvier 2018 à Guindi dans le département de Mayo-Dallah, région de Mayo-Kebbi ouest, Tchad.

II.1.2 Matériel animal

Dans ce travail, nous avons utilisé les rats (Rattus norvegicus) (Figure 17) mâles adultes âgés de 3 mois. Le poids de ces animaux variait entre 200-300g. Ils étaient maintenus dans des conditions favorables d'élevage (au niveau de l'animalerie du département des Sciences Alimentaires et Nutrition(SAN) de l'Ecole Nationale des Sciences Agro-Industrielles (ENSAI). Ils recevaient à volonté et quotidiennement, de l'eau du robinet et les aliments à base du régime normal formulé selon Hamlat et al. (2008).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

II.2 METHODES

II.2.1 Production de la poudre de fruits Detarium microcarpum

La production de poudre de la pulpe (Figure 18) a été obtenue à partir des fruits secs qui ont été décortiqués manuellement, pilés à l'aide d'un mortier puis tamisés encore manuellement à l'aide d'un tamis de maille égale à 500 um. la poudre obtenue est conservée dans les sachets plastiques scellé jusqu'à son utilisation.

Figure 18 : Procédé de production de la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum. II.2.2 Détermination de la composition chimique de la pulpe de D. microcarpum

II.2.2.1 Détermination de la teneur en protéines totales

L'azote total a été déterminé après minéralisation des échantillons selon la méthode de Kjeldahl (AFNOR, 1982), et le dosage selon la technique colorimétrique de Devani et al. (1989).

La minéralisation selon Kjeldahl consiste à détruire la substance organique contenue dans la denrée alimentaire par l'acide sulferique concentré en présence de 0,5 mg de catalyseur de minéralisation Dumazert (mélange de 200g NaSO4 + 3,5g de sélénium +3,2g de CuSO4). Pour cela 1g d'échantillon, 5 mL de H2SO4 concentré, une pincée de catalyseur de

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

minéralisation ont été introduits successivement dans un matras de minéralisation qui a été porté à chaud sur une rame de minéralisation jusqu'à obtention d'une solution limpide, soit pendant 6 heures. Apres refroidissement, le minéralisâ a été récupéré dans une fiole jaugée de 50mL et son volume complété au trait de jauge avec de l'eau distillée.

Le dosage colorimétrique de l'azote selon Devani et al. (1989) utilise la réaction de Hantzsch. C'est une méthode basée sur la réaction de l'ammoniac avec l'acétylacétone et de formaldéhyde en milieu aqueux pour donner un produit jaune ; le 3,5- diacétyl-1,4-dihydrolutidine (Figure 19)

Figure 19: Réaction de l'ammoniac avec l'acétylacétone et formaldéhyde en milieu aqueux (réaction de Hantzsch)

Le composé formé présente un maximum d'absorption à 412 nm et peut être lire par spectrophotométrie. L'intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration en

azote. Les résultats en g/100g de matière sèche ont été exprimés par la relation :

Avec : q la quantité d'azote correspondant à la densité optique lue ; f le facteur de dilution ; m la masse de d'échantillon minéralisé et MS la matière sèche de l'échantillon analysé.

Le coefficient conventionnel de conversion (6,25) est utilisé pour convertir l'azote en protéines (AOAC, 1995). La teneur en protéines brutes totales est donc 6,25Q (g/100gMS), les résultats étant la moyenne de trois essais.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

II.2.2.2 Détermination de la teneur en sucres disponibles ? Extraction des sucres totaux

Dans un tube à essai bouchant de 50 mL contenant 5mL d'acide sulfurique 1,5N, 0,2g de poudre de la pulpe de D. microcarpum ont été introduits. Le mélange a été porté au bain-marie à 100°c pendant 45 minutes, puis refroidi à température ambiante. 10mL d'éthanol à 70%, 1mL d'acétate de zinc (2g/100mL) et 1mL de ferrocyanure de potassium (10,6g/100mL) y ont été ajoutés pour la défécation. Le mélange a alors été filtré dans un erlenmeyer de 50mL et le volume du filtrat complété au trait de jauge avec de l'eau distillée.

En milieu acide et à chaud, les pentoses et les hexoses subissent une cyclisation pour donner respectivement le furfural et l'hydroxyméthyl furfural (Figure 20). Les composés ainsi formés réagissent avec le phénol pour former un complexe coloré jaune orangé présentant une absorption maximale à 450 nm. Le complexe coloré ainsi formé permet le dosage spectrophotométrie des sucres et leurs dérivés par la méthode de Dubois et al., (1956).

Figure 20: Equation de la réaction des oses avec le phénol en milieu acide et à chaud

Soient Q : la quantité des sucres dans la prise d'essai ; Vt : le volume total de l'extrait ; m : la

prise d'essai en g ; v : le volume d'échantillon analysé et Hr : la teneur en eau résiduelle.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

II.2.2.3 Détermination de la teneur en lipides totaux

La teneur en lipides totaux a été évaluée après extraction au Soxhlet par l'hexane selon la méthode Russe décrite par Bourely (1982). L'extraction est basée sur la solubilité différentielle des lipides dans un solvant organique (hexane ou éther de pétrole) à chaud.

2g de poudre de la pulpe de fruit de D. microcarpum ont été introduits dans du papier filtre préalablement séché a l'étuve 105°c pendant 1h 30min et pesé. Le tout a été placé dans l'extracteur du soxhlet. L'extracteur a été ensuite monté sur un ballon contenant 200 mL d'hexane placé dans le chauffe ballon. Une fois le réfrigérant du soxhlet installé, le robinet ouvert et le chauffe ballon allumé. Le tout a été chauffé et l'extraction effectué pendant 10 heures environs jusqu'à décoloration des échantillons emballés contenu dans l'extracteur. A la fin de l'extraction, le système a été arrêté. Les sachets ont été retirés et passé à l'étuve à 105°C pendant 1heure puis pesés.

La teneur en lipides totaux (TL) exprimé pour (g/100g MS de la poudre a été calculée par la formule suivante :

m1: la masse du sachet plein renfermant la prise d'essai avant extraction (papier +

masse de l'échantillon + huile), m2: la masse du sachet plein renfermant la prise d'essai après extraction de l'huile (papier + masse de l'échantillon - huile).

II.2.2.4 Détermination de la valeur énergétique

La valeur énergétique est l'énergie disponible (Merrill et al., 1973). Elle est calculée en utilisant des coefficients adaptés par la FAO en 1970 donné par la formule suivante : X= P×4+G×4+L×9

X= Energie évaluée en Kcal/100g ; P = Pourcentage de protéines ; G = Pourcentage de glucides ; L = Pourcentage de lipides.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

II.2.2.5 Détermination de la teneur en cendres totales

Les cendres totales sont quantifiées par la méthode décrite par AFNOR (1982). Elle consiste à incinérer complètement un échantillon jusqu'à obtention des cendres blanches dans un four à moufle réglé à 550 °C. Pour cela, les creusets en porcelaine contenant les poudres de la pulpe du fruit de D. microcarpum issus de l'étuvage à 105 #177; 2 °C (M2) ont été placés dans le four. Après incinération pendant 12 heures, les creusets sont retirés du four à l'aide des pinces, puis refroidis dans l'atmosphère d'un dessiccateur pendant 30 minutes et pesés (M3).

II.2.2.6 Détermination de la teneur en fibres brutes

Le dosage des fibres brutes a été effectué selon la méthode de Weende (Wolff, 1968). Elle consiste en une hydrolyse à l'acide sulfurique suivie d'un traitement alcalin à la soude d'une prise d'essai et incinération du résidu.

1 g (P1) de la poudre a été mélangé à 100 mL de H2SO4 (0,26N) et porté à ébullition dans un bain marie d'eau régler à 95° C pendant 30 min. Le mélange a été filtré et lavé trois fois 75 mL de l'eau distillée pendant 5 minutes. 100 mL de KOH 0,23N a été ajouté au résidu puis porté en ébullition pendant 30 min, ensuite filtré et lavé trois fois à l'eau distillée et deux fois à l'acétone. Le résidu de filtration a été séché à 100° C pendant 8 h et pesé (P2) puis incinéré pendant 3h à 500°C dans un four à moufle et pesé de nouveau (P3).

Avec P1 : masse en grammes de la prise d'essai ; P2 : masse en grammes de l'échantillon sec ; P3 : masse en grammes des cendres ; MS : matière sèche.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

II.2.2.7 Détermination de la teneur en composés phénoliques totaux.

0,025g de la poudre a été pesée dans 25 mL de mélange méthanol (70 : 30, V/V) et maintenue sous agitation à température ambiante du laboratoire pendant 24 h. Le mélanges a été filtré sur papier Whatmann N°1. L'extrait obtenu a servi pour le dosage des polyphénols totaux.

Le dosage spectrophotométrique utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu décrite par Wafa et al. (2014) a été utilisée pour la détermination des polyphénols totaux.

En milieu alcalin, les polyphénols réduisent le réactif de Folin-Ciocalteu en oxyde de tungstène et de molybdène de couleur bleue. L'intensité de cette coloration renseigne sur le contenu en polyphénols totaux dans le mélange (Dewanto et al.,2002). Les composés phénoliques totaux présentent un maximum d'absorption à 760 nm et l'intensité est proportionnelle à la quantité de polyphénols présents dans la poudre.

Une prise de 20 uL d'extrait convenablement dilué a été mise dans un tube en présence de 2980 uL d'eau distillée. Par la suite, 500 uL du réactif de Folin-Ciocalteu 1/10^eme et 400 uL d'une solution de Na2CO3 à 20 % ont été respectivement ajoutés. L'ensemble des tubes contenant les échantillons et ceux du blanc a été agité au vortex et laissé au repos pendant 20 min à température ambiante du laboratoire et à l'obscurité, l'absorbance a été mesurée à 760 nm. L'étalonnage (Annexes 1) a été réalisé à l'aide d'une solution aqueuse d'acide gallique à différents concentration.

Les résultats exprimés en mg équivalent d'acide gallique/g de matières sèches (EAG/gMS).

II.2.2.8 Détermination de la teneur en flavonoïdes

La teneur en flavonoïdes est déterminée suivant la méthode décrite par Mimica Dukic, (1992).

En milieu basique et en présence du nitrate de sodium et de chlorure d'aluminium, les

flavonoïdes donnent une coloration rouge qui présente un maximum d'absorbance à

L'extraction des polyphénols totaux a été servie directement pour le dosage des

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Dans les tubes d'étalon, ont été introduit la rutine de concentration 0,1mg/mL à différents volumes et 0,1 mL de poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum a été introduit dans le tube inconnu puis l'eau distillée a été ajouté dans les tubes. Après incubation à 25°C pendant 5 min, 0,15 mL d'AlCl3 10% puis 1 mL de nitrite de sodium (NaNO2 5 %) ont été ajouté dans chaque tube. L'étalonnage est établi à partir de la solution de rutine 0,1mg/ mL et la densité optique est lue à 510 nm contre un blanc. La quantité en flavonoïde de la prise d'essai (Q) est exprimé en équivalent mg de la rutine/100g de matière sèche, en se référant à la courbe d'étalonnage (Annexes 2) d'équation de régression

La quantité des poudres en flavonoïdes a été calculée à l'aide d'un standard préparé à partir d'une solution de rutine (0,1 g/L) et les résultats sont exprimés en mg d'équivalent de rutine/g de matière sèche.

II.2.2.9 Détermination de la teneur en tanins condensés

Les tanins condensés, également connus sous le nom de proanthocyanidines ont été dosés par la méthode de Sun et al. (1998).

La méthode consiste à dépolymériser les tanins en milieu méthanolique acide et par réaction avec la vanilline, ils se transforment en anthocyanidols de couleur rouge spécifique. ? Mode opératoire

Une prise de 0,05 uL de l'extrait convenablement dilué est mélangée avec 3 mL de vanilline de préparation de méthanol (4 %), 1,5 mL d'acide sulfurique concentré a été additionné. Après homogénéisation manuel. Le mélange est mis en incubation à température ambiante pendant 30 min. L'absorbance est mesurée à 500 nm contre un blanc contenant du méthanol pur. Les teneurs en tanins condensés sont déterminées en se référant à une gamme étalon (Annexes 3) de catéchine (0 à 0,600 mg/mL).

Les teneurs en tanins condensés sont exprimées en mg d'équivalent catéchine par gramme de matière sèche.

II.2.2.10 Détermination de teneurs en vitamine C

Le dosage de la Vitamine C est fait par la méthode titrimétrique de Harris et Ray (1935).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

La méthode est basée sur la décoloration (réduction) du 2,6 dichlorophénol indophénol à pH < 3. La solution de 2,6 dichlorophénol indophénol (2,6 DCIP) bleue au départ devient rose en milieu acide. Pendant la titration avec une solution d'acide ascorbique, elle est réduite en une leuco base incolore et en même temps l'acide ascorbique est oxydé en acide déhydroascorbique (Figure 21). Cette méthode qui exploite les propriétés réductrices de la vitamine C ne permet donc que le dosage de l'acide ascorbique et non l'acide déhydroascorbique. En effet en milieu acide ou neutre, c'est à dire sous l'influence des oxydants, il y a ouverture de la double liaison C~C et formation d'une á dicétone.

Pour déterminer la teneur en vitamine C des fruits. On a procèdé d'abord à une extraction selon le protocole suivant Sun et al. (1998):

Une quantité de poudre du fruit a été pesé et triturer dans un mortier en présence d'un gramme de sable de Fontainebleau et d'acide acétique 90 % (5 ml). 5 ml d'eau distillée a été ajoutée et laisser décanter puis filtrer ou centrifuger à 3500 tours / minute pendant 5 minutes. Le surnagent a été récupéré pour le dosage de la vitamine C.

Répéter 2 fois l'extraction et noter le volume total (V) de l'extrait, à conserver au réfrigérateur. Le Dosage proprement dit commence par une Introduction dans une burette, la solution étalon de vitamine C 1 mg / 100 ml d'acide acétique puis Introduit dans un bécher, 1 ml de la solution de 2,6 DCIP 0,1 g/l dans l'eau distillée portée ébullition dans une goutte d'acide acétique 5 %. La solution bleue au départ devient rose.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Une goutte a été laissé tomber dans le contenu de la burette jusqu'à décoloration totale du contenu du bêcher. Le volume a été Noté de la solution de vitamine C ayant permis ce virage. 5 essais de la même manière a été faite. Procéder de la même manière sur l'extrait de fruit.

La teneur en vitamine C du fruit exprimée en mg / 100 g de poids frais est déterminée

- X: Descente de burette de la solution étalon de vitamine C décolorant 1 ml de 2,6 DCIP ; - V : Volume de l'extrait total de fruit ;

Le résultat exprimé en base sèche est donné par la formule : Q [XV / PV'] x 100/ [100 - H0] en mg / l00g de M S où H° est la Teneur en eau.

II.2.3 EVALUATION DE L'ACTIVITE ANTIOXYDANTE in vitro DE LA PULPE DU FRUIT DE D. microcarpum

II.2.3.1 Evaluation de l'activité anti radicalaire de 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle

Plusieurs méthodes existent actuellement pour l'évaluation de l'activité antioxydante in vitro mais celle de la DPPH demeure la plus utilisée.

L'extrait a été obtenu en mélangeant une masse de 0,1g de la poudre de Detarium microcarpum dans 10 mL de méthanol à 70 % et agité vigoureusement pendant deux heures. Le mélange obtenu a été filtré sur le papier wattman n°1 et le filtrat a été utilsé pour l'évaluation de l'activité antioxydante in vitro selon le protocole décrit par (Athamena et al.,2010).

Dans ce test les antioxydants réduisent le DPPH de couleur violette en un composé jaune, dont l'intensité de la couleur est inversement proportionnelle à la capacité des antis radicalaires présents dans le milieu à donner des protons (Figure 22) (Sanchez-Moreno, 2002).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

0,5 mL de chaque solution méthanolique des extraits aux différentes concentrations (0,025 ; 0,05 ; 0,1 ; 0,5, 1mg/mL) a été ajouté à 2 mL de la solution du DPPH. Parallèlement, un contrôle négatif est préparé en mélangeant 0,5 mL de méthanol avec 2 mL de la solution méthanolique de DPPH. La lecture de l'absorbance est faite contre un blanc à 517 nm après 60 min d'incubation à l'obscurité et à température ambiante. Le contrôle positif est représenté par une solution d'un antioxydant standard, l'acide ascorbique préparé dans les mêmes conditions que les échantillons et pour chaque concentration, le test est répété 3fois.

Les valeurs de l'IC50 (Annexes 4) ont été déterminées graphiquement par la régression linéaire.

II.2.3.2 Pouvoir réducteur total

La capacité antioxydante de l'extrait de la poudre a été évaluée en déterminant leur habilité à réduire le fer (III) en fer (II) par la méthode d'Oyaizu (1986).

Dans un tube à essai, 1 mL de chaque extrait de la pulpe du fruit de D. microcarpum a été mélangé avec 2,5 mL d'un tampon phosphate (0,2 M,pH 6,6) et 2,5 mL de solution de l'hexacyanoferrate de potassium [K3Fe(CN) 6] à 1%. Le tout a été incubé pendant 30 minutes à 50°C dans un bain marie. Ensuite, 2,5mL d'acide trichloroacétique 10 % ont été ajoutés et le mélange centrifugé à 3000tours pendant 10 minutes à l'aide d'une centrifugeuse (Firlabo). Puis 2,5 mL du surnageant ont été prélevés et mélangés à 2,5 mL d'eau distillée et 0,5 mL d'une solution aqueuse de FeCl3à 0,1%. L'absorbance a été lue à 700 nm. Une courbe d'étalonnage a

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

été tracée à partir de la droite obtenue avec l'acide ascorbique utilisé comme référence à différentes concentrations. Le pouvoir réducteur total a été exprimé en équivalent d'acide ascorbique (mg d'acide ascorbique/g de MS).

II.2.4 EVALUATION DE L'ACTIVITE BIOLOGIQUE in vivo DE LA PULPE DU FRUIT DE Detarium microcarpum

II.2.4.1 Procédure expérimentale sur les animaux

Les animaux sont constitués des rats mâles adultes âgés de de 3 à 4 mois et pesant chacun entre 200 et 300g. Le choix des rats adultes se justifie par le fait que les troubles métaboliques (Dyslipidémies, stress oxydants...) et les maladies qui en découlent s'installent chez l'homme dans la majorité des cas avec l'âge adulte.

Les animaux ont reçus une alimentation normale puis les différentes doses de poudre de la pulpe ont été administrées afin de voir les effets sur profils biochimiques et hématologiques.

L'animal étant immobilisé, la tête surélevée, la bouche bien ouverte, une seringue chargée du produit, munie de la sonde endogastrique et introduite jusqu'à l'estomac puis le produit est envoyé en poussant le piston de la seringue.

Les poudres ont été mises en suspension dans l'eau distillée et agitées magnétiquement pendant 2h. Un volume de 10 mL/kg de poids corporel, les rats ont été regroupés en quatre (4) lots constitués de huit(8) rats chacun et repartir comme suit :

> Lo1 : alimentation normale (AN) + l'eau distillée ; > Lot2 : alimentation normale + plus la dose de 250mg/kg ; > Lot3 : alimentation normale + plus la dose de 500mg/kg ; > Lot4 : alimentation normale + plus la dose de 750mg/kg.

Les traitements ont été effectués quotidiennement à partir de 8 h du matin et pendant 28 jours.

La première prise de poids des rats eu lieu le premier jour de l'expérience puis s'est faite deux fois toutes les semaines pendant le temps de l'expérimentation soit un total de 8 pesés et le gain de poids ou perte(G/P) a été déterminé. Les rats ont eu libres accès à l'eau et à l'aliment suivant le régime formulé par Hamlat et al. (2008) (Tableau 5) ; les restes d'aliment ont été

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

collectés et pesés toutes les 24h. Ceci a permis de déterminer l'indice de consommation par la

Tableau 5 : Formulation du régime standard selon Hamlat et al. (2008) avec quelques modifications.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

AN : Alimentation normale CNo : Contrôle normal JO : Indices d'organes CT : control test

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

II.2.4.2 Sacrifie, préparation du sérum et des homogénats des organes

Au terme de 28 jours d'expérimental, les rats ont été sacrifiés. Le sang a été prélevé dans deux séries de tubes. La première série était constituée des tubes secs. Ils ont été laissés au repos pendant 4 heures à température ambiante puis centrifugés pendant 15 min à 3000 trs/min. Le sérum (surnageant) a été collecté, aliquoté puis conservé dans des tubes eppendorf à -20°C pour les dosages des paramètres biochimiques. La deuxième série était constituée des tubes héparinés. Le sang entier contenu dans la deuxième série de tubes a immédiatement servi au dosage des paramètres hématologiques. Les organes tels que le poumon, le foie et les testicules ont été également prélevés puis broyés dans un mortier, pour cela 1 mL de broyat a été homogénéisé dans 9 mL de tampon phosphate 0,1 M, pH 7,4 et en suite centrifugé à 3000trs/min pendant 10 min à 25°C a servi le dosage des malondialdéhyde. Une partie de ces organes a été également nettoyés avec de l'eau physiologique, puis pesés. Ces organes ont été fixés par le formol à 50 % contenue dans un bocal en verre pour les réalisations ultérieures des coupes histologiques. Les masses des différents organes et de chaque rat ont été notées pour la détermination des indices d'organe.

L'indice d'organe est un paramètre qui permet de connaitre l'influence de la prise alimentaire et le traitement sur l'état des organes après l'expérience. L'apparition des inflammations au niveau de ceux-ci ou d'atrophie renseigne sur la toxicité de l'alimentation ainsi que le traitement. Elle est déterminée selon la formule suivante :

II.2.4.3 Dosage des paramètres biochimiques a) Dosage du cholestérol total

Le cholestérol total a été dosé par la méthode enzymatique décrite par Naïto (1984) à l'aide des kits Monlab Test.

Sous l'action du cholestérol estérase, le cholestérol estérifié est transformé en cholestérol et acide gras. L'oxydation du cholestérol en présence du cholestérol oxydase produit le cholestérol-3-one et du peroxyde d'hydrogène. La quinonéimine (rose) sert d'indication qui se forme par action du peroxyde d'hydrogène, du 4-aminoantipyrine et du phénol sous l'action

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

catalytique de la peroxydase. L'absorbance du complexe coloré proportionnelle à la concentration en cholestérol d'un échantillon est mesurée à 500nm.

1000 uL de la solution d'enzyme a été introduit dans le tube. Puis 10 uL de plasma suivie de 10ul ont été introduit respectivement de solution standard. Après homogénéisation l'ensemble a été incubé à la température ambiante pendant 10min. L'absorbance a été lue à 505nm contre le blanc de l'eau à la place d'échantillon.

Les triglycérides ont été dosés selon la méthode enzymatique décrite par Kaplan et al. (1984) à l'aide des kits Monlab Test.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Sous l'action de lipases, les triglycérides (TG) est hydrolysés en glycérol et en acide gras. Le glycérol est ensuite transformé en peroxyde d'hydrogène sous l'action successive du glycérol-kinase et de la glycérol-3-phosphate oxydase. La quinonéimine sert d'indicateur qui se forme de peroxyde d'hydrogène, 5-aminoantipyrine et 4-chlorophénol sous l'action catalytique de la peroxydase.

Glycérol + ATP Glycerol kinase Glycérol-3- phosphate +ADP
Glycérol-3-phosphate + O2 Glycerol -3- phosphore oxidase Dihydroxacétone phosphore + H2O2 2H2O2 + 4-aminoantipyrine + 4-chlorophénol ^peroxydasequinonéimine + 4H2O

L'absorbance du complexe coloré (quinonéimine) proportionnelle à la concentration en triglycéride dans l'échantillon a été mesuré à 500nm.

Dans les tubes de dosage, d'étalon et de blanc ont été introduit dans 1000 uL de solution enzymatique. Dans les tubes de dosage et d'étalon ont été ajoutés respectivement 10 uL de plasma et 10 uL de solution standard. Après homogénéisation et incubation pendant 15 min, la lecture de la densité optique est faite à 505 nm contre le blanc entre 15 à 25°C.

La concentration du cholestérol LDL est calculée à partir de la concentration du cholestérol total, de la concentration du cholestérol HDL et de la concentration de triglycérides selon la formule de Friedewald et al. (1972) suivante :

Les composés carbonylés à l'instar du malondialdéhyde (MDA) réagissent avec l'acide thiobarbiturique (TBA) pour donner des chromophores de couleur rose absorbant à une longueur d'onde de 532 nm.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

100 ìL d'échantillon et 400 ìL de réactif TBA ont été introduit dans des tubes à essai en

verre, puis fermés hermétiquement. Le mélange a été chauffé au bain marie à 100°C pendant 15 min ; puis refroidi dans un bain d'eau froide pendant 30 min. Les tubes ont été ouverts pour permettre l'évacuation des gaz formés lors de la réaction. Le mélange a été ensuite centrifugé à 3000 tours/min pendant 5 min à 25 °C. L'absorbance a été lue à 532 nm.

La concentration du MDA a été déterminée en utilisant son coefficient d'extinction moléculaire (å = 1,53*105 M^-1cm^-1) selon la formule suivante :

II.2.4.4 Dosages des paramètres hématologiques

Les paramètres hématologiques tels que les globules blancs, les lymphocytes, les granulocytes, les globules rouges, l'hémoglobine, l'hématocrite et les plaquettes sanguines ainsi qu'aux constantes érythrocytaires et leucocytaires ont été déterminés automatiquement par l'analyseur hématologique AUTOMATE du type « coulter-Counter » du laboratoire de l'hôpital régional de N'Gaoundéré.

II.2.4.5 Dosage des paramètres de toxicités. a) Dosage de l'alanine aminotransférase

L'Alanine Aminotransférase (ALAT), encore appelée transaminase glutamique pyruvique catalyse le transfert réversible d'un groupe amine à partir de l'alanine vers l'alpha cétoglutarate avec la formation de glutamate et pyruvate. Le pyruvate produit est réduit en lactate déshydrogénase (LDH) et NADH. Les taux d'alanine et d'aspartate aminotransférase ont été déterminés à l'aide du kit Randox selon la méthode de Reitma et al. (1957).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Dans les tubes de dosage et du blanc, sont introduit respectivement 0,1 mL d'échantillon et 0,1 mL d'eau distillée, ensuite nous avons ajouté dans chacun de ces tubes, 0,5 mL de solution tampon. La solution obtenue est mélangée et incubée à 37°C pendant 30 min. Après incubation nous avons également introduit dans ces tubes, 0,5mL de solution de 2,4-dinitrophénylhydrazine le mélange a été fait et les solutions incubées à 25°C pendant 20 min. Dans les solutions obtenues, 5 mL de solution d'hydroxyde de sodium sont introduits et l'absorbance de l'échantillon contre le blanc est lue après 5 minutes à 546 nm).

L'aspartate aminotransférase (ASAT), encore appelée transaminase glutamate oxaloacétate (TGO) catalyse le transfert réversible du groupement aminé de l'aspartate vers l'alphacétoglutarate avec la formation du glutamate et oxalo-acétate. L'oxalo-acétate produit est réduit en malate en présence de malate déshydrogénase (MDH) et NADH.

La solution du substrat de L'ASAT (0,1mL) a été introduite dans les tubes du blanc et des essais et préincubée à 37 °C pendant 5 min, puis 0,02 mL de sérum y ont été ajoutés dans les tubes essais. Après une incubation à 37 °C pendant 1 h, 0,1 mL de réactif de coloration a été ajouté. Les tubes ont été laissés à température ambiante pendant 20 min, puis la réaction a été arrêtée par ajout de 1 mL de Na0H 0,4N. L'absorbance a été lue à 505 nm contre le tube blanc.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

La créatinine a été dosée suivant la méthode d'Henry (1974), le kit Randox a été

Il est basée sur la réaction de l'acide picrique avec la créatinine en milieu basique formant un complexe coloré en jaune orange.

Dans les tubes à centrifugation a été introduit, 1 mL d'acide trichloracétique et 1 mL de plasma. La solution obtenue a été mélangée, centrifugée à 2500 trs/min pendant 10 minutes et le surnageant a été recueilli. Dans les tubes blanc et standard a été introduit 0,5 mL de solution d'acide trichloracétique, ensuite 1 mL de surnageant, 0,5 mL, d'eau distillée et 0,5mL de solution d'étalon ont été introduit respectivement dans les tubes de dosage, blanc et standard dans tous ces tubes a été également ajouté 1 mL de solution travail qui est mélange V/V d'acide picrique et d'hydroxyde de sodium. Le mélange obtenu dans chaque tube est laissé au repos pendant 20 minutes à 25°C et l'absorbance lue contre le blanc à 520 nm. L'intensité de la coloration est mesurée à une longueur d'onde de 530 nm.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

II.3 Analyses statistiques

Les résultats obtenus ont été exprimés en moyenne #177; écart type calculés grâce au logiciel Excel 2013. L'analyse de variance (ANOVA) et le test de comparaison multiple de DUNCAN ont été effectués en utilisant logiciel STATGRAPHICS.centurion.16.1 (Manugistics, Rockville, Maryland, USA, 1997). Les valeurs ont été considérées significatives lorsque p < 0,05.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

III. RESULTATS ET DISCUSSION

III.1 Composition chimique et valeur énergétique de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum

Composés	Teneurs
Teneur en eau (g/100g MS)	10,24	#177; 1,07
Protéines totales (g/100g MS)	4,26	#177; 0,32
Lipides totaux (g/100g MS)	2,67	#177; 0,24
Sucres totaux (g/100g MS)	79,47#177; 3,83
Valeur énergétique (Kcal/100gMS)	359,00	#177; 30,00
Teneur en fibres brutes (g/100g MS)	10,08	#177; 0,12
Cendres totales (g/100g MS)	3,46	#177; 0,16
Polyphénols totaux (mg Eq AG/100g MS)	6710,00	#177; 182,00
Flavonoïdes (mg EqR /100 g MS)	537,00	#177; 46,00
Tanins condensés (mg EqC/100gMS)	1455,00	#177; 254,00
Vitamine C (mg/100g MS)	51,04	#177; 0,42

MS : matière sèche, EqAG : équivalent acide gallique, EqR : équivalent rutine, EqC : équivalent catéchine ; Les valeurs sont présentées sous forme de moyenne #177; ecartype et représentent la moyenne de trois essais (n=3).

Il ressort de ce tableau que la pulpe du fruit renferme une teneur en eau relativement faible (10,24 #177; 1,07). Ceci montre que la poudre de ces fruits de D. microcarpum peut être conservée pendant longtemps ce qui justifie sa conservation par la population rurale. Par ailleurs cette valeur est presque égale ou se rapproche aux valeurs trouvées par Keni et al.(2010) et Obun et al.(2010) qui sont respectivement de 12,17% et 12,5%. Cette teneur est largement supérieure à celle trouvée par Mariod et al.(2009) ; Makalao et al.(2016)qui sont respectivement de 5,74% et 7,17%. Plusieurs facteurs pourraient influencer la teneur en eau comme les conditions atmosphériques, l'état du sol dans laquelle la plante se trouve (Elabeb, 2007).

La teneur en protéines est de 4,26 #177; 0,32%. Ce résultat est proche de 4,68% trouvés au Nigeria (Oibiokpa et al., 2014) et 4,65% trouvé au Burkina Faso (Edwige et al., 2014) mais inférieur à 5,88% trouvés au Mali (Kouyaté et al.,2009) et 6,12% trouvé au Tchad (Makalao,2016). Ayant utilisé la même méthode de détermination de la teneur en protéines

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

(méthode de Kejdahl), ces valeurs différentes s'expliqueraient par la nature différente des sols ou la différence variétale (Makalao, 2016).

En ce qui concerne la teneur en lipides totaux, il ressort du tableau qu'elle est de 2,67 #177; 0,24.%. Cette teneur se rapproche de celle obtenue par Oibiokpa et al. (2014) qui est de 2,23%. Le niveau de sucres totaux de D. microcarpum (79,47#177; 3,83%) est sensiblement égal à celui rapporté par Keni et al., 2010 (81,21%), Cette teneur supérieur aux valeurs trouvées par Kouyaté et al.,2009 ; Oibiokpa et al. (2014) ; Makalao et al.(2016 ); Bamisaye et al. (2014) qui sont respectivement de 63,2% ; 65,38% ; 51,31% ; 54,9%.

La valeur énergétique de la pulpe du fruit de D. microcarpum est de 358,95Kcal/100g. Cette valeur est largement supérieure à celle obtenue par Makalao et al.(2016) qui ont montré que la valeur énergétique de la pulpe du fruit de D. microcarpum qui est de 240,99. la valeur énergétique obtenue est supérieure à celle des autres fruits sauvages tels que Ziziphus mauritiana (80,71), Balanites aegyptiaca (36,39), Vitellaria paradoxa(109,48) (Makalao et al., 2016).

En général la pulpe du fruit de D. microcarpum présente une teneur élevée en sucres disponibles et une teneur très faible en protéines totales et lipides totaux. Elle présente une valeur énergétique appréciable et sa consommation pourrait compenser la perte en énergie pendant les moments de soudure alimentaires.

La teneur en fibres brutes de la pulpe de Detarium microcarpum rapporté dans le tableau 6 est de 10,08 #177; 0,12 g/100 g MS). Cette valeur obtenue est assez proche à celles obtenues par Bamisaye et al.(2014) (10,2 g/100 g MS) et d'Oibiokpa et al.(2014) (12,19 g/100 g MS).La pulpe du fruit contient une teneur importante en fibres brutes. Ceci laisse présager que la consommation du fruit pourrait présenter plusieurs effets bénéfiques sur la santé notamment la réduction des lipides sanguins et une stimulation du système immunitaire etc.

La teneur en cendres de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum est de 3,46 #177; 0,16 g/100 g MS. Ce résultat obtenu dans cette étude est sensiblement égale à celles obtenue par Bamisaye et al. (2014) ; Keni et al. (2010) ; Makalao et al. (2016) qui sont respectivement de 3,3 ; 3,04 et 3,72 g/100 MS. La teneur en cendres est cependant inférieure à celle des autres fruits sauvages a l'instar de Tamarindus indica L (4,11 #177; 0,43) et Balanites aegyptiaca L (4,61 #177; 0,11 g/100 MS) mais supérieure à celle de Vitellaria paradoxa (0,73 #177; 0,03) (Makalao et al.,2016). La teneur en cendres dépend du type du fruit, la nature du sol (Elabed, 2007). Au

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

regard du résultat des cendres qui représentent l'ensemble des éléments minéraux qui constitue la matière. On peut dire la pulpe du fruit de D. microcarpum est une source non négligeables en minéraux.

Il ressort également du tableau que la pulpe du fruit de D. microcarpum possède une teneur en polyphénols totaux importante qui est de 6710,27 #177; 182,33 mg EqAG/100g MS. Cette valeur est plus élevée que les teneurs trouvées par Lamien et al.(2008) sur l'extrait méthanolique (4867,27#177; 79,41 et 5026,07 #177; 87,50 mg Eq AG/100g MS) et à l'acétone (5890,83 et 6065,83 mg Eq AG/g MS) de la pulpe du fruit de D. microcarpum au Burkina Faso. Cette teneur s'est avérée être supérieure à celle des autres fruits sauvages comestibles tels que Adansonia digitata (3518,33 #177; 17,80 Eq AG/100g MS), Ximenia américana (2230,00 #177; 76,09 mg Eq AG/100g MS), Ziziphus mauritania (2352,50 #177; 52,70 mg Eq AG/100g MS), Lannea.microcarpa et Vitellaria paradoxa (381,67 #177; 41,5 mg Eq AG/100g MS) (Lamien et al., 2008).

La teneur en flavonoïdes de la pulpe de D. microcarpum est de 537 #177; 46 mg EqR / g MS). Cette teneur est supérieure à celle obtenue par Lamien et al.(2008) sur l'extrait méthanolique (116,05 #177; 3,04 mg QE/100gMS) et à l'acétone (155,90 #177; 1,89 mg QE/100gMS ) de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum. Cette variation pourrait s'expliquer par le standard utilisé, qui est la quercetine dans l'étude de Lamien et al.(2008) mais aussi par le niveau de maturité du fruit ainsi que le solvant d'extraction utilisé (Lamien et al., 2008).

La teneur en tanins condensés de la pulpe de fruit de D. microcarpum est de 1455 #177; 254 mg Eq C /g MS. Cette valeur est largement supérieure à celle obtenue par Obun et al. (2010) (23 mg QE /100gMS).

En général, La poudre de la pulpe de D. microcarpum contient une quantité assez considérable de composés phénoliques. Ces composés sont connus pour leurs activités antioxydantes, notamment la lutte contre les radicaux libres, l'inhibition de l'absorption des triglycérides alimentaires (Torres de pinedo et al., 2007 ; Zaidi et al., 2014)

Pour ce qui est de la vitamine C, il ressort de ce tableau que la pulpe de fruit de

D. microcarpum présente une teneur élevée en vitamine en vitamine C qui est de 51,04 #177; 0,42 mg/100g MS). Cette valeur se rapproche de celle trouvée par Guissou et al. (2010) et Oibiokpa et al. (2014) qui sont respectivement de 55,10 et 32 mg/100gMS. En effet la vitamine C est connue pour ces propriétés réductrices dont capable de piéger les radicaux libres qui génèrent

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

l'oxydation des lipides sanguins. Elle favorise également l'absorption du fer rencontré chez les végétaux afin de faciliter son absorption par les cellules intestinales (Essadouni et al., 2009).

III.1.1 Activité anti radicalaire de 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle (DPPH)

Le tableau 7 présente les valeurs moyennes des pourcentages d'inhibition et des (IC50) du DPPH des différentes concentrations des extraits de la poudre de D. microcarpum et de la vitamine C.

Tableau 7 : valeurs moyennes des pourcentages d'inhibition et des (IC50) du DPPH des différentes concentrations des extraits et de la vitamine C.

	Pourcentage d'inhibition(%)
Concentration (mg/mL)	Vitamine C	*D. microcarpum*
0,025	84,73	11,99
0,05	91,64	19,18
0,1	95,18	27,19
0,5	94,64	64,32
1	93,73	71,10

D'après le tableau 7 nous remarquons que l'activité antioxydante de poudre de la pulpe de fruit de D. microcarpum possède une forte activité anti radicalaire dose pendante avec un IC50 moyen de 0,33 mg/mL supérieur à celui de la vitamine C qui est de 0,028 mg/mL.

La décoloration de la solution de DPPH augmente régulièrement avec l'augmentation de la quantité de l'extrait méthanolique dans un volume donné jusqu'à l'inhibition presque totale du radical DPPH présent dans ce milieu. Le pourcentage d'inhibition est inférieur à celle de Roumba et al.(2018) qui ont rapporté que l'extrait ethanolique de la pulpe de D. microcarpum possède une forte pouvoir anti radiculaire DPPH très élevée avec le pourcentage d'inhibition est de 49,87 équivalent de 0,1mg/mL. La forte inhibition de DPPH pourrait s'expliquer par la présence des composés phénoliques et des vitamines C présent dans la pulpe de fruit de D. microcarpum. En effet ses composés sont reconnus pour leur capacité à stabiliser les radicaux libres (Torres de pinedo et al., 2007).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

III.1.2 Le pouvoir réducteur total de la pulpe du fruit de D. microcarpum

Le pouvoir réducteur total de la poudre est 51,94 mg EQAA/g de MS. L'activité réductrice de la poudre de la pulpe du fruit est largement supérieure à celle obtenue par Lamien et al.(2008) (42,35 mg EQAA/g de MS). Les groupements hydroxyles à nombre élevé se trouvant dans la pulpe du fruit de D. microcarpum seraient à l'origine de ce pouvoir réducteur. En effet ses composés sont capables de céder un proton et par conséquent stabilisent les radicaux libres (Shimada et al., 1992).

III.2 ACTIVITES BIOLOGIQUES in vivo DE LA PULPE DE Detarium microcarpum

III.2.1 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum sur, le poids des animaux et la masse relative des organes des rats albinos

Le tableau 8 présente le poids et masse relative des différents organes des rats ayant reçu la poudre de pulpe de D. microcarpum à différentes doses.

Tableau 8: masse relative des différents organes et poids des animaux des rats ayant reçu la poudre de la pulpe de D. microcarpum à différentes doses

		Doses
Paramètres	CNo	250 mg	500 mg	750mg
IC	11,25	13,57	18,236	19,01
G/P (g)	4,72 #177; 1,81	-2,85 #177; 1,66	-6,66 #177; 2,27	-10,25 #177; 3,66
Coeur	0,27 #177; 0,04^a	0,30 #177; 0,02^a	0,27 #177; 0,05^a	0,26 #177; 0,02^a
Foie	2,71 #177; 0,30^a	2,96 #177; 0,42^a	2,59 #177; 0,22^a	2,75 #177; 0,36^a
Poumons	0,71 #177; 0,17^ab	0,88 #177; 0,24^b	0,66 #177; 0,12^a	0,82 #177; 0,18^ab
Reins	0,54 #177; 0,02^a	0,50 #177; 0,04^a	0,53 #177; 0,04^a	0,53 #177; 0,04^a
Testicules	1,03#177; 0,30^a	1,11 #177; 0,14^a	1,00 #177; 0,10^a	1,06 #177; 0,09^a

CNo : control normal, IC : indice de consommation, CNo : contrôle normal. G/P : Gain ou perte de poids en gramme (g) Les valeurs sur la même ligne ayant des lettres différentes sont significativement différentes au seuil de 5%

L'augmentation ou la baisse de la masse relative des organes chez les animaux après consommation d'une substance signifie que cette dernière est toxique (Raza et al., 2002 ; Teo et al., 2002). Le tableau 8 présente le poids et masse relative des des différents organes des rats ayant reçus la poudre de la pulpe de D. microcarpum à différentes doses.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Il ressort du tableau 8 qu'il existe des variations de poids ainsi que la quantité d'aliment consommée des différents groupes d'animaux. En général les rats nourris à la pulpe de fruits consomment plus par rapport à ceux du contrôle normal. On peut dire que la consommation de la pulpe du fruit stimule l'appétit chez les rats.

On observe également une perte du poids chez les groupes des rats consommants la pulpe du fruit par apport au control normal. Cette diminution du poids dose-dépendante pourrait s'expliquer par la présence dans la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum de quantité importante de fibres brutes et les composés phénoliques. En effet selon Zaidi et al. (2014), les polyphénols inhibent la lipase pancréatique, enzyme assurant l'hydrolyse des triglycérides, la conséquence est l'excrétion des lipides. Les fibres et les composés phénoliques ont la capacité d'inhiber également l'absorption des nutriments tels que les lipides et les protéines (Claudia, 2014).

Pour ce qui est des organes, il n'existe pas des différences significatives (p > 0,05) entre la masse relative du coeur, du foie, du poumon, du rein et des testicules et entre les différentes doses utilisées de la poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum. En général, le résultat montre que les différentes doses utilisées de la pulpe des fruits de D microcarpum n'ont aucune influence sur la masse relative d'organe.

III.2.2 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum sur quelques paramètres de toxicité

Le tableau 9 présente le taux de Créatinine, d'ALAT, d'ASAT des rats ayant reçus la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum à différentes doses.

L'alanine amino-transférase, l'aspartate aminotransférase, et la créatinine sont des paramètres qui renseignent respectivement sur l'état de bon fonctionnement du foie, du coeur et des reins. Un taux élevé en ces paramètres suite à l'ingestion d'une substance témoigne de l'effet toxique de cette dernière. Les taux sanguins de créatinine, d'ALAT et d'ASAT des rats ayant reçus différentes doses de la poudre de la pulpe de D. microcarpum sont consignés dans le tableau 9.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Tableau 9: Taux de Créatinine, d'ALAT, d'ASAT des rats ayant reçus la poudre de la pulpe de Detarium .microcarpum à différentes doses.

Paramètres	CNo	250 mg/kg	500 mg/kg	750mg/kg
Créat (mg/dL)	0,77 #177; 0,06^a	0,83 #177; 0,15^a	0,80 #177; 0,10^a	0,93 #177; 0,06^a
ALAT (UI/l)	5,33 #177; 2,08^a	5,67 #177; 0,58^a	5,33 #177; 2,52^a	6,67 #177; 1,53^a
ASAT (UI/l)	16,33 #177; 5,77^ab	30,00 #177; 2,52b c	45,67 #177; 0,58^c	15,26 #177; 0,62^a

AlAT : alanine aminotransférase, ASAT : aspartate aminotransférase, Créat : créatinine, (n=3). Les valeurs sur une même ligne ayant des lettres différentes sont significativement différentes (p<0,05).

Il ressort du tableau 9 que les taux de créatinine des groupes d'animaux soumis aux différentes doses de la poudre de pulpe de fruit de D. microcarpum et ceux de contrôle normal ne présentent aucune différence significative (p>0,05). Ceci laisse donc prévoir la consommation de la poudre de la pulpe de D. microcarpum ne présente aucun effet délétère sur la fonction rénale jusqu'à la dose de 750 mg /kg.

En ce qui concerne l'ALAT, on constate qu'il n'existe aucune différence significative entre les groupes soumis à différents doses de la poudre de la pulpe de fruit de D. microcarpum (p > 0,05). Ainsi nous pouvons dire que la consommation de la poudre de la pulpe de D. microcarpum jusqu'à la dose 750mg/kg n'affecte pas le fonctionnement du foie.

Les taux sanguin d'ASAT des groupes ayant reçu différents doses de la pulpe de D. microcarpum ne sont pas également très significative. La dose 500 mg à augmenter de manière significative le taux d'ASAT, toute fois cette valeur reste dans les normes usuelles qui de 5 à 55 UI/l (Robert et al., 2013)

En général la consommation de poudre de la pulpe de Detarium microcarpum ne présente aucun effet délétère sur le fonctionnement du foie, du coeur et du rein.

III.2.3 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum sur la lipidémie.

Une hyperlipidémie est un facteur de risque prépondérant dans l'apparition des maladies cardiovasculaires (artériosclérose et les accidents vasculaires cérébraux) (Benhamou et al., 1993). Le Tableau 10 présente les taux du cholestérol total(CT), de triglycérides(TG), du

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

cholestérol-HDL (C-HDL) et du Cholestérol-LDL (C-LDL) des rats ayant reçus la poudre de la pulpe de D. microcarpum à différentes doses.

Tableau 10 : Taux de cholestérol total, de triglycérides de cholestérol-HDL et de LDL-cholestérol des rats ayant reçus la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum à différentes doses.

		Doses
Paramètres	CNo	250 mg/kg	500 mg/kg	750 mg/kg
CT (mg/dL)	69,89 #177; 6,55^a	58,61 #177; 10,38^a	56,54 #177; 9,58^a	53,13 #177; 11,51^a
C-HDL (mg/dL)	31,92 #177;0,18b^a	40,12 #177; 4,71^bc	37,14 #177; 3,07^ab	44,90 #177; 3,77^c.
TG (mg/dL)	32,84#177;6,75^ab	39,99 #177; 12,64^b	39,99 #177; 5,40^b	22,25 #177; 6,11^a
C-LDL (mg/dL)	19,50#177;1,35^b	15,87 #177; 4,71b^ab	11,07 #177; 1,08^a	13,26 #177; 3,33^a

CNo : Control Normal CT : Cholestérol Total, C-HDL : cholestérol HDL, C- LDL : cholestérol LDL, TG : triglycérides, (n=3). Les valeurs sur une même ligne ayant des lettres différentes sont significativement différentes au seuil de 5%.

Il en ressort du tableau 10 qu'il n'existe pas de difference signaficative (p>0,05) du taux de cholesterol total entre les groupes des rats consommant la pulpe de D. microcarpum aux differences doses utilisées ainsi aux groupes contrôle normales.

Pour ce qui est du cholestérol LDL, nous constatons que la consommation de la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum a entrainé une diminution du taux de LDL-cholestérol comparativement au control normal. Cependant cette diminution était plus marqué dans les groupes ayant reçu la poudre aux doses de 750 mg/kg et 500 mg/kg. Cette diminution pourrait s'expliquer par la présence dans la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum de quantité importante de fibres et des composés phénoliques. En effet les fibres alimentaires réduisent l'adsorption des lipides par liaisons aux sels biliaires présents dans l'intestin et de les éliminé dans les selles (Claudia, 2014). Ils sont également fermentés par les microbiotes du colon induisant la synthèse des acides gras à courte chaine donc l'acide propionique qui inhibe de la synthèse de l'enzyme (HGM-CoA réductase) responsable de la synthèse endogène du cholestérol (Chiraz 2012, Han et al., 2000) et certains mécanismes incluant l'augmentation des récepteurs LDL des hépatocytes (Lee et al., 1999). Par ailleurs Bok et al. (1999) et Lee et al. (1999) ont montré que la consommation de flavanones pendant 2 à 6 semaines par des rats normolipidémiques ou hyperlipidémiques induisait une réduction du cholestérol total et du cholestérol LDL plasmatiques.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Le cholestérol HDL est connu comme un marqueur protecteur des maladies cardiovasculaires, il permet ainsi d'éviter l'accumulation du cholestérol dans les vaisseaux sanguins et donc d'éviter les risques d'athérosclérose. Ainsi, il ressort du tableau 9 que la consommation de la poudre de la pulpe de D. microcarpum a entrainé une augmentation des teneurs plasmatiques en cholestérol HDL comparativement au control normal qui n'a pas reçu de poudre de D. microcarpum. L'augmentation la plus marqué a été enregistré chez les rats recevant la poudre de D. microcarpum à la dose de 750 mg/kg. Cette augmentation du taux sanguin de cholestérol HDL pourrait s'expliquer par l'action des composés phénoliques présentent dans cette poudre en quantité importante. En effet plusieurs études ont rapportés que la consommation de thé et des fruits riches en polyphénols préviennent les maladies

cardiovasculaires et surtout entraine une augmentation de cholestérol HDL (Serog, 2006).

Hypertriglycéridémie constitue un réel problème pour la santé cardiovasculaire. Il existerait en effet un lien entre un taux élevé de triglycérides et le risque d'infarctus du myocarde d'angine de poitrine, de même que de décès par maladies cardiovasculaires.

Nous observons du tableau 9 que la consommation de la poudre de D. microcarpum à la dose de 750 mg/kg a entrainé une diminution significative du taux de triglycérides sanguins comparativement aux autres doses et au control normal. Cette diminution pourrait être expliquée par l'action des polyphénols principalement les tanins présents en quantité importante dans la pulpe de D. microcarpum. En effet plusieurs auteurs ont rapporté que les polyphénols ont la capacité d'inhiber la lipase pancréatique, enzyme assurant l'hydrolyse des triglycérides en monoglycérides, diglycérides et acides gras libres pour être absorbés par l'intestin (Zaidi et al., 2014) L'inhibition va provoquer la malabsorption des lipides en général et celles des triglycérides en particulier et par conséquent leurs excrétions et leurs taux plasmatiques baisses (Essadouni et al., 2009).

III.2.4 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum

Le tableau 11 présente le taux de la malondialdéhyde (uM/mg de protéine) chez les animaux.

Le malondialdéhyde est un produit final de la peroxydation lipidique. Un taux élevé chez les animaux témoigne la présence d'un état du stress oxydatif. Les résultats de la mesure

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

du niveau de la peroxydation lipidique dans les organes (coeur, foie et reins) chez les animaux ayant reçu la poudre de D. microcarpum sont consignées dans le tableau 11

Tableau 11: Taux de de malondialdéhyde (uM/mg de protéine) des rats soumis à la poudre de pulpe du fruit de D. microcarpum à différentes doses

				Doses
organes	CNo		250 mg/kg		500 mg/kg		750 mg/kg
Coeur	2,12	#177; 0,06^c	2,07	#177; 0,03^c	1,71	#177; 0,12^b	0,66	#177; 0,08^a
Foie	3,84	#177; 0,10^c	1,49	#177; 0,05^b	1,39	#177; 0,02^b	1,25	#177; 0,04^a
Rein	1,06	#177; 0,01^d	0,62	#177; 0,03^c	0,48	#177; 0,03^b	0,34	#177; 0,02^a

CNo : Control Normal, Les valeurs sur une même ligne ayant des lettres différentes sont significativement différentes au seuil de 5%.

Nous remarquons de manière générale une diminution du taux de MDA dans le rein, le coeur et le foie chez animaux consommant la pulpe de Detarium microcarpum comparativement à ceux control normal. Au niveau du coeur, le taux de MDA chez les groupes de rats nourris a la dose 250 mg de la pulpe du fruit de D. microcarpum et ceux de control normal ne sont pas statistiquement significative ainsi ceux de groupes de 500 mg et 250mg du foie. La dose 750 mg a présenté la plus forte réduction (coeur : 0,66 #177; 0,08 uM /mg protéines ; foie : 0,25 mg #177; 0,04 uM /mg protéines ; rein : 0,34 mg #177;0,02uM /mg protéines). En générale nous pouvons dire que la réduction du taux de MDA est dose-dépendante. Ce pouvoir de réduction proportionnelle de la dose serait dû à l'action des composés phénoliques et à la vitamine C présents dans la pulpe de Detarium .microcarpum. En effet ces substances bioactives sont reconnus pour leur capacité de piéger et neutraliser les radicaux libres qui sont responsables de la peroxydation lipidiques (Abiodun et al., 2015). Ils empêchent l'oxydation des phospholipides membranaires des et évite ainsi la perte d'acides gras polyinsaturés des cellules (Favier, 2003).

III.2.5 Effet de la consommation de la poudre de la pulpe du fruit de D. microcarpum sur les paramètres hématologiques

Les paramètres hématologiques tels que les globules blancs (lymphocytes, les granulocytes, et les monocytes) les globules rouges, l'hémoglobine, l'hématocrite et les plaquettes sanguines ont été déterminés car représentent des cibles sensibles aux substances alimentaires. Leur évaluation après ingestion d'une substance alimentaire donne un aperçu sur l'effet (bénéfique ou néfaste) de cette substance sur les cellules hématopoïétiques de l'homme

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

ou de l'animal (Mukinda et, 2007 ; Li et al., 2010). Les résultats sur les paramètres hématologiques sont donnés dans le tableau 12.

Tableau 12 : Paramètres hématologiques des rats soumis à la poudre de la pulpe de D. microcarpum à différentes doses

		Doses
Paramètres	CNo	250 mg /kg	500 mg/kg	750 mg/kg
GB (10³/uL)	6,47 #177; 1,01^a	5,27 #177; 0,70^a	5,63 #177; 1,37^a	5,03#177; 1,54^a
GRA (%)	25,23 #177; 1,77^c	13,3 #177; 0,85^a	22,8 #177; 0,69^b	23,47 #177; 0,23^bc
LYM (%)	61,10 #177; 6,09^a	78,2 #177; 7,26^b	63,5 #177; 0,60^a	63,03 #177; 1,59^a
MON (%)	13,37 #177; 0,98^a	11,67 #177; 0,23^a	12,60 #177; 0,35^a	12,63 #177; 1,78^a
GR (10⁶/mm³)	4,46 #177; 0,59^a	4,50 #177; 0,37^a	5,81 #177; 0,19^b	8,29 #177; 0,40^b
Hb (g/dL)	9,17 #177; 1,67^a	9,03 #177; 0,65^a	12,53 #177; 0,85^b	14,60 #177; 0,34^c
Hte (%)	21,43 #177; 0,84^a	23,73 #177; 0,40^a	30,30 #177; 2,52^b	33,80 #177;1,39^c
VGM (fL)	48,73 #177; 0,98^a	50,30 #177; 0,46^a	52,93 #177; 1,27^b	54,27 #177; 0,12^b
TCMH (pg)	18,73 #177; 0,46^a	20,47 #177; 0,21^b	21,83 #177; 0,23^c	22,97 #177; 0,12^d
CCMH (%)	39,07 #177; 0,92^a	40,63 #177; 0,60^b	39,77 #177; 0,85^ab	38,93 #177; 0,84^a
PLT (10⁹/L)	165,33 #177; 18,47^ab	129 ,00 #177; 32,90^a	182,67#177;10,97^ab	207 #177; 1,73^b

CNo :Control Normal ; GB: globules blancs, LYM: lymphocytes, GRA: granulocytes, MON : monocytes, GR :globules rouges, Hb: hémoglobine ;Hte: hématocrite ; PLT: plaquettes sanguines ; VGM : volume globulaire moyen ;CCMH : concentration corpusculaire Moyen en Hémoglobine ;TCMH : teneur corpusculaire moyen en hémoglobine. Les valeurs sur une même ligne ayant des lettres différentes sont significativement différentes au seuil p<0,05. (n= 3).

On observe en général aucune différence significative (p>0,05) du taux de globules blancs entre les différents groupes soumis à différents doses de la poudre de la pulpe de D.microcarpum et le contrôle normal. Nos résultats sont en accord avec ceux de Wahedi al. (2013) qui n'ont trouvé aucune variation significative du taux de globules blancs entre le groupe contrôle et le groupe ayant reçu la dose de 500 mg/kg de la poudre de la pulpe de fruit de D. microcarpum.

Contrairement aux globules blancs, les taux sanguins de globules rouges, d'hématocrite, d'hémoglobine ainsi que des constantes érythrocytaires (VGM, TCMH, CCMH) à significativement augmenté (p<0,05) chez les rats nourris par la poudre de la pulpe de fruit de D. microcarpum aux doses de 500mg/kg et de 750mg/Kg comparativement à la dose 250 mg/kg

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

et au contrôle normal. Toutefois, cette augmentation était plus marquée chez les rats ayant reçu la dose de 750mg/kg de la poudre de D. microcarpum. Ainsi la prise de D. microcarpum à la dose750 mg /kg a augmenté de 85,87 % soit 1,85 fois le nombre de globules rouges et 57,72% soit 1,57 fois le taux d'hématocrite comparativement au contrôle normal.

Cette augmentation du nombre de globule rouge dose-dépendante pourrait s'expliquer par la présence dans la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum de quantité importante de fer. En effet selon Brune et al. (1992), le fer est l'élément essentiel dans la synthèse des globules rouges. Il fait partie intégrante de l'hémoglobine et assure le transport l'oxygène dans l'organisme. En effet Obun et al.(2010) et Makalao et al.(2016) ont montré que la pulpe du fruit de D. microcarpum est une source importante en fer. Une carence en fer chez l'homme entraine l'apparition d'une anémie ferriprive. Par ailleurs, le taux élevé de globule rouge, d'hémoglobine et de l'hématocrite observé après consommation de la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum pourrait également s'expliqué par la présence de la vitamine C, dont la teneur augmente avec l'augmentation de la dose d'administration. En effet la vitamine C, favorise l'absorption du fer au niveau de cellules intestinales (Sondos et al., 2016 ; Essadouni et al., 2009).

Ces résultats sont en accord avec ceux obtenus par Wahedi al., (2013) qui ont montré que la consommation de la pulpe du fruit de D. microcarpum à la dose de 500 mg/kg entrainait une augmentation des globules rouges et de l'hématocrite. Par ailleurs, Rouamba et al. (2018) ont montré que les extraits éthanoliques de la pulpe Detarium microcarpum à la dose de 100 ug/mL protègent les érythrocytes contre l'hémolyse induit par le peroxyde d'hydrogène.

En ce qui concerne les plaquettes, on observe une augmentation significative (p < 0,05) chez le groupe ayant reçu la poudre de la pulpe de Detarium microcarpum comparativement à ceux ayant reçu les doses de 250 et 500 mg/kg et comparativement au contrôl normal. Cette augmentation pourrait s'expliqué par le fait les plaquettes sanguines et les globules rouges prennent origine d'une même cellule souche de la ligné myéloïde qui est l'hémocytoblaste (Marieb et Hoehn, 2010)

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

CONCLUSION ET PERSPECTIVES

Au terme de ce travail dont l'objectif général était d'évaluer les propriétés biologiques de la poudre de la pulpe de fruit de Detarium microcarpum à différents doses, il ressort que. La pulpe de fruit de Detarium microcarpum présente une teneur élevée en composés bioactifs (polyphénols totaux, flavonoïdes, tanins et vitamine C) et nutriments dont les sucres disponibles.

La consommation des fruits en général améliore les paramètres lipidiques des rats et augmente le taux des globules rouges, de l'hémoglobine, l'hématocrite etc. la consommation de la pulpe du fruit ne présente aucun signe délétère sur le fonctionnement des organes comme le coeur, le foie et le rein, testicule, le poumon et donc de manière générale le régime à base de la pulpe de fruit de D. microcarpum n'affecte pas les organes des rats.

Parvenue à la fin de ce travail, les résultats obtenus montrent que la pulpe de fruit de Detarium microcarpum possède des propriétés biologiques intéressantes. Plusieurs aspects restent encore à explorer sur ce travail. Pour compléter ce travail, il serait judicieux de :

- Fractionner la poudre de la pulpe de fruit de D. microcarpum dans le but de voir la

- Poursuivre une caractérisation chimique profonde de la poudre afin de ressortir les types des fibres qui sont responsables d'une activité biologique ;

- Evaluer l'effet de la consommation de la pulpe chez les enfants et les femmes en grossesse a risque de carence en fer.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Abiodun, O and Adewale A. (2015). Antioxidant and Hepatoprotective Effect of Hibiscus sabdariffa Methanolic Extract (HME) against Carbon Tetrachloride (CCL4) Induced Damage in Rats. Research Gate, 7(2): 64-72.

Adama. (1997). L'effet de la coupe de Detarium microcarpumGuill, & Perr. Sur la

régénération de la végétation dans la forêt classée de Nazinon. memoire de fin d'etudes AFNOR (Association Française de Normalisation) (1982). Recueil des normes françaises des produits dérivés des fruits et légumes, Jus de fruits. 1ére édition. Paris (France). 327 p.

Ake CB., Koné MW.,Kamanzi A. (2006). Evaluation de quelques propriétés biologiques de produits de cueillette non ligneux vendus sur les marchés d'Abidjan et ses environs.Pharm. Med. Trad. Afr., 14: 1-17.

Amiot M. J., BabotLC., and Touniaire, F.(2007). Plant Pigments as bioactive substances. In Food colorants: chemical and functional properties (C. Socaciu, Ed.) CRC Press.

ANAES. 2004. Méthodes d'évaluation du risque cardio-vasculaire global, France: Anaes (Agence nationale d'accréditation et d'évaluation en santé).

Anderson, KJ.,Teuber S., Gobeille A., Cremin P., AnWaterhouse A.L., and Steinberg F. M. (2001). Walnut polyphenolics inhibit in vitro humanplasma and LDL oxidation. Journal of Nutrition; 131 : 2837-2842.

Anne-Laure (2007). Contribution à la connaissance taxonomique et chimique de fruits africains du genre "Detarium" (Fabaceae - Caesalpinioideae) : "D. microcarpum" Guill. et Perr. et des formes comestibles et toxiques de "D. senegalense" J.F. Gmel. Thèse de doctorat : Univ. Genève

Antwerpen PV. (2006). Contribution à l'étude du pouvoir antioxydant de divers agents d'intérêt thérapeutique : Ciblage du système myeloperoxydase /peroxyde d'hydrogène /chlorure . Thèse de Doctorat .Université libre de Bruxelles. P 122

AOAC. 1990. Official Methods of Analysis (vol 1, 15th edn). Association of Official Analytical Chemists: Washington DC.

Aravodis E. (2005). Antioxidant potentiels of African medicinal plants. African Journal of Biotechnology, 4 (2) :128-133.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Athamena S., Chalghem I., Kassah-Laouar A., Laroui S., Khebri S. (2010). Activite anti-oxydante et antimicrobienne d'extraits de Cuminum cyminum L. Leb. Sci. Jou., 1 : 6981.

Atti Ikram. (2014). Evaluation des activités antioxydant et antiradicalaire d'un mélange d'épices « Ras el hanout » mémoire de master en biologie.

Aurélie Leroyer. (2012). Pathogenèse de l'athérosclérose. Faculté de Pharmacie, Marseille.p.3- 80

Bamisaye,F.A Ajani, E.O., Nurain, I.O ;Adebisi, K.E1.,Quadri, R.T and Minari, J.B.(2014). Evaluation of Growth Performance of Rats Fed With Sweet Detar, Detarium microcarpum Fruit as Supplementary Feed Ingredient. OSR Journal of Environmental Science, Toxicology and Food Technology (IOSR-JESTFT) e-ISSN: 2319- 2402,p- ISSN: 2319-2399.

Berger M M. (2006). Manipulation nutritionnelles du stress oxydant : état de connaissances. Nutrition Clinique et Métabolisme, 20 : 48-53.

Bouhzam J (2015). Profil lipidique et maladies coronariennes chez les adultes constantinois. Mémoire de master. Université des Frères Mentouri Constantine.

Boyd B., Ford C., Koepke Michael C., Gary K., Horn E., Mc Analley S. et McAnalley B. (2003). Etude pilote ouverte de l'effet antioxydant d'Ambrotose AOTM sur des

Brigitte B. S J. (2008). Rejets de Detarium microcarpumet feux précoces. Bois et forêts des tropiques. Département productions forestières Institut d'environnement et de recherches agricoles

Burkill H M. (1995). The useful plants of west tropical Africa. Royal Botanic Gardens Kew. Edition 2. 857 p food science, 9 :4-9

Chevallier L. (2009).Les lipides. Nutrition principes et conseils 3eme édition.

Claudia Reinke .(2014). Les propriétés des fibres alimentaires.MedSciences

Conner E M., Grisham M. B. (1996). Inflammation, free radicals, and antioxidants. Nutrition, 12: 274-277.

Cook NC., Samman S. (1996). Flavonoids-Chemistry, metabolism, cardioprotective eff ects, and dietary sources. Nutr Biochem;7:66-76.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Cuji N.,Savikin K.,Jankovi'T. (2015). Optimization of polyphenols extraction from dried chokeberry usingmaceration astraditional technique. Food Chem. 194,135 142, http://dx.doi.org/10.1016/j.foodche.

Delattre j., Beaudeux J.L., Onnefont.R. (2005). Radicaux libres et stress Oxydant : aspects biologiques et pathologiques.

Dongock, Delphine N. (2018). "Etude ethnobotanique et phytochimique des plantes médicinales utilisées dans le traitement des maladies cardiovasculaires à Moundou (Tchad)." International Journal of Biological and Chemical Sciences 12.: 203-216.

Dröge, W. (2002). Free radicals in the physiological control of cell function. Physiol Rev., 82: 47-95.

Edwige TDN., Charles P, Niéyidouba L, Aminata S, Margarida CEA, Joseph BI. (2014). Nutritional composition of five food tree species products used in human diet during food shortage period

Elabet.A. (2007). Réactivité thermique et cinétique de dégradation du bois d'arganier. Application a l'elaboration de charbon actif par activation chimique à l'acide phosphorique.Thèse de doctorat, université Mahomed V. PP1-177

Elesevier-Masson (2014). Les Fondamentaux De La Pathologie Digestive.Cdu-Hge/Editions.P.5

Falconer, J. (1990). Appendix 3. Commonly consumed forest and farm tree foods in the West African Humid Zone. In: Koppell, C. R. S. (Editor). The major significance of minor forest. The local use and value of forests in the West African Humid Forest

Favier A. (2003). Le stress oxydant .Intérêt conceptuel et expérimental dans la

compréhension des mécanismes des maladies et potentiel thérapeutique.
L'actualité chimique .108-115.

Felix k. B. C ; Loubak I, A. S ; Ouattara.C. A. (1999). Activités antimicrobiennes des extraits aqueux totaux de Detarium microcarpum sur huit espèces bactériennes impliquées

dans certaines maladies infectieuses au Burkina Faso. Sciences et Médecine.8,69-73

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Fruchart JC., Duriez.P.,staels.B. (1999). Peroxisome profiferator-activated receptor-alpha activators regulate genes governing lipoprotein metabolism vascular inflammation and atherosclerosis.

FSC. (2014). L'hyperlipidémie. les maladies cardiaques et l'attaque cérébrale.

Garine I. (2002). Nourriture de brousse chez les Muzey et les Masa du Nord-Cameroun. Méga. Tchad. 13 p.

GenkingerJM., Platz, EA., Hoffman, SC., Comstock, GW. et KJ. Helzlsouer. ( 2004). Fruit, vegetable and antioxidant intake and all-cause cancer and cardiovascular disease mortality in a community-dwelling population in Washington County, Maryland », Am J Epidemiology,;160(12):12-33

Hadi M. (2004). La quercitine et ses dérivés : molécules à caractère pro-oxydant ou capteurs de radicaux libres ; étude et application thérapeutiques. Thèse Doctoral Pharmaco chimie.Université Louis Pasteur, Paris. 155p

Haleng J J., Pincemail JO., Defraigne C. (2007). Le stress oxydant. Rev Med Liege 2007; 62 : 10 : 628-638

Halliwell B. (1994). Free radicals and antioxidants: A personal view. Nutrition Reviews. 52: 253-265.

Hamlat N.,Neggazi S.,Benazzoug Y.,Kacimi G.,Chaïb S.,Aouichat-BouguerraS . (2008). Regime hyperlipidique et processus atherosclereux chez rattus norvegicus. Sciences et technologie: science de la nature et de la vie .

Hennen g. (1996). Biochimie humaine : introduction biochimique à la médecine interne. Ed. Boeck, Paris. 780p.

Henry,R.J. (1974). Clinical chemistry, principles and technics. 2nd Edition, Harper and Row. 525P.

Herzog, FM. (1992). Étude biochimique et nutritionnelle des plantes alimentaires sauvages dans le Sud du V-Baoulé, Côte d'Ivoire. Thèse. École Polytechnique Fédérale, Zurich, Suisse, 122 p

Holst B.,Williamson G. (2008). Nutrients and phytochemicals: from bioavailability to bioefficacy beyondantioxidants. Curr Opin Biotechnol.19, 73-82.

Hu SG., Li L., He X.W. (2005). Solid-phase extraction of esculetin from the ash bark of chineesetraditional medicine by using molecularly imprinted polymers. Journal of Chromatography A,1062:31-37.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Jaspher O. (2010). Morphological and nutritional characteristics of Tamarindus inadica (Linn) fruits in Uganda. Master of Science in Agroforestry. University of Uganda 76p. Jinwoong KM; Hye.Y.,Young W.C ; Kee. D. Y. (2013). Phenolic compounds with

pancreatic lipase inhibitory activity fromKorean yam Dioscorea opposita. Journal
of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry.p.1-7

Jung T., Bader N., Grune T. (2007). Oxidized proteins: intracellular distribution and

recognition by the proteasome. Archive of biochemistry and biophysics, 462: 231-237. Kini F, Sylvain O and Innocent P G. (2010). Propriétés Nutritionnelles et Thérapeutiques

Kini F. (2008)."Potentiel nutritionnel et thérapeutique de quelques espèces fruitières

«sauvages» du Burkina Faso." Pharmacopée et médecine traditionnelle africaine 15

Kohen R., Nyska A. (2002). Oxidation of biological systems: Oxidative stress phenomena, antioxidants, redox reactions and methods for their quantification. Toxicolo Pathol., 30: 620-650.

Kouyaté A.M. (2005). Aspects ethnobotaniques et étude de la variabilité morphologique, biochimique et phénologiquede Detarium microcarpum Guill. & Perr. au Mali. Thèse de Doctorat. Faculté des Sciences BiologiquesAppliquées. Université de Gand. Belgique. 207 p.

Kouyaté AM, Damme PV, Meulenaer BD, Diawara H. 2009. Contribution des produits de cueillette dans l'alimentation humaine. Cas de Detarium microcarpum. Afrika Focus,22 (1): 77-88

Kouyaté AM. (2011). Conservation et utilisation durable des ressources génétiques des espèces ligneuses alimentaires prioritaires de l'Afrique subsaharienne.

Kouyaté, AM. and Patrick V. D. (2002):. "Caractères morphologiques de Detarium microcarpum Guill. et Perr. au sud du Mali." Fruits 57.4 231-238.

Laguerre M, Lopez-Giraldo L, Lecomte J, Pina M et Villeneuve P. (2007). Outils d'évaluation in vitro de la capacité antioxydante. Oxf. Col. Lon., 5 : 278-292.

Laguerre M., Lecomte, J., Villeneuve, P. (2007). Evaluation of the ability of antioxidants to counteract lipid oxidation: Existing methods, new trends and challenges. Progress in Lipid Research, 46, 244-282.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Lamien MA. (2008). Polyphenol content and antioxydant acitivty of fourteen wild edible fruits from Burkina Faso. Molecules, 13: 581-594.

Lauer NJ.(2002). Prévention primaire et secondaire de l'athérosclérose. Université de Franche comte.

Lehucher-Michel MP., Lesgards JF., Delubac O., Stocker P., Durand P., Prost M., (2001). Stress oxydant et pathologies humaines. Press Med., 30: 1076-1081.

Leverve X. ( 2009). Stress oxydant et antioxydants. . Cahiers de Nutrition et de Diététique Volume 44,219-224.

lliwell B. (1990). How to characterize a biological antioxidant, Free Radic Res Commun, 9: 1-3.

Makalao.MM., Aly S., Cheikna Z. (2015). Composition nutritionnelle de 10 fruits sauvages consommés dans trois départements du Tchad." International Journal of Biological and Chemical Sciences 9.5: 2385-2400.

Marfak A. (2003). Radiolyse Gamma des Flavonoïdes. Etude de Leur Réactivité avec Les Radicaux issus des Alcools : Formation de depsides. Thèse de doctorat. Université de LIMOGES.187 p

Marieb.E.N .,Hoeln.N. (2010). Anatomie et physiologie humaines 8eme édition Marie-Helene.(2006). Prise en charge des dyslipidemies. Revue de la litterature et recommandations actuelles. Thèse de doctorat. Université joseph fourier.

Mariod, A. (2009). Detarium microcarpum Guill and Perr fruit proximate chemical analysis and sensory characteristics of concentrated juice and jam." African Journal of Biotechnology 8.17).

Martínez-Cayuela M. (1995). Oxygen free radicals and human disease. Biochimie., 77: 147-161.

Medjoujda Ouafa.(2013).Méthodes d'études d'activité des antioxydants des plantes médicinales.

Murray., Bender.,Botham. (2013). Transport et stockage des lipides: Biochimie de Herper. 5eed, de boeck. 246.

Feillet F. (2000). Adaptation métabolique a la malnutrition : modèle des lipides, de la

cobalamine, de la riboflavine et des acides organiques dans la malnutrition protéino énergétique de l'enfant et dans l'anorexie mentale. Thèse de doctorat. Université Nancy

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Nasri, I., Hadje Brahim M. (2014). Apport des thérapeutiques antioxydantes dans le traitement du diabète, diplôme de master en biologie animal. p 22-25

Nathalie.p. (2005). Intérêt de la supplémentation en antioxydants dans l'alimentation des carnivores domestiques. Thèse de doctorat. Ecole nationale vétérinaire de toulouse.P.31-33

Nikiéma JB K.,Djierro J.,Simpore4 D., Sia1 S., Sourabié, C., Gnoula1, et Guissou 1.I.P. (2009). Stratégie d'utilisation des substances naturelles dans la prise en charge des personnes vivant avec le VIH: expérience du Burkina Faso." Ethnopharmacologia 43 47-51.

Njoumi., Sondos. (2016). "Evaluation de la teneur en fer et de sa biodisponibilité d'un plat traditionnel méditerranéen à base de corète." Journées francophones de nutrition ( 2016). 2016.

Obun CO. (2010)."Evaluation of Detarium microcarpum pulp meal as feed ingredient in rabbits diets." Electronic Journal of Environmental, Agricultural & Food Chemistry 9.2

Obun. O. (2013). "Impact of Raw Tallow Detarium microcarpum (Guill and Sperr) Seed Meal on Performance and Blood Parameters in Broilers." Iranian Journal of Applied Animal Science 3.2

Oibiokpa F., Godwin I.A., AbubakarNS ., kudirat OS. (2014) "Nutritional composition of

Detarium microcarpum fruit." African Journal of Food Science 8.6 (2014): 342-350. Okigbo BN. (1977). Plants of horticultural and nutritional importance in traditional farming

Onweluzo, J. C. (1999). Detarium microcarpum polysaccharide as a stabilizer in processed fruit products. Lebensm.-Wiss. UTechnol. 521-526

Raza M., Al-Shabanah O., El-Hadiyah T., Al-Majed A. (2002). Effects of prolonged vigabatrin treatment on hematological and biochemical parameters in plasma, liver and kidney of Swiss albino mice. Scientia Pharmaceutical, 70: 135-145.

Rehman A., Nouroozj., Moller W. (1999). Increased oxidative damage to all DNA bases in patients with type II diabetes mellitus. EEBS, 488:120-122.

Reitma S et Frankel, S. (1957). Neuropsychological correlates of rapid or slowly growing intrinsic cerebral neoplasm. Amer.J. Clin. Path, 28: 309-324.

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Rouamba, Ablasse, Moussa C and Martin K. (2018): "Anti-hemolytic and reduction of lipid peroxidation capacities of Detarium microcarpum Guill. and Perr. fruits." African Journal of Pharmacy and Pharmacology 12.9 (2018): 106-111.

Rouanet.JM (2012).cours de nutrition générale, fibres alimentaires et probiotique

Serog Patrick. (2006). Polyphénols : ils augmentent les taux de HDL cholestérol et ont une action antioxydante. American Journal of Clinical Nutrition; vol 84 : p. 880-887

Sohal RS., Mockett RJ. and Orr WC. (2002). Mechanisms of aging: an appraisal of oxidative stress hypothesis. Free radical biology & medicine, 33: 575-586.

Sparks DL, Sabbagh MN, Connor DJ et al. (2005). Atorvastatin for the treatment of mild to moderate Alzheimer disease: preliminary results. Arch Neurol; 62 : 753-7

Teo S., Strlig D., Thomas S., Hoberman, A., Kiorpes, A., Khetani, V. (2002). A 90 days oral gavage toxicity study of d-methylphenidate and l-methylphenidate in SpragueDawley rats. Toxicology, 79: 183-196.

Torres de pinedo A, Pen alver P and Morales J C. (2007). Synthesis and evalution of new

phenolic-based antioxidant : structure-activity relationship. Foo. Che., 103 :55-61. ValKo M., Leibfritz D., Moncol J., Cronin M. T. D., Mazur M., Telser J., (2007). Free

Wahedi, J. A., and L. D. David. (2013). Effect of Detarium microcarpum fruit pulp on h aematological indices of rats in Mubi, Adamawa State, Nigeria." GJBAHS 2.3 (2013): 76-80.

Wolff J.P. (1968). Manuel d'analyse des corps gras. Azoulay. Paris (France). 519 p

Yessito.C.N.H.S .(2015). Épidémiologie des facteurs de risque cardiovasculaire enpopulation tropicale - cas du bénin. Université de limoges cotutelle d'abomey-calavi.p236

Zaidi. (2014), Activité antioxydante et inhibitrice de l'activité de la lipase pancréatique, et l'effet de l'extrait des feuilles de Rhamnus alaternus L. sur des souris nourries avec différents régimes (études du poids, des paramètres physico-chimiques et histologiques).

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

ANNEXES

Annexes 1 : courbe d'étalonnage de solution de glucose

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Propriétés biologiques de la pulpe du fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)

Annexes 5 : Courbe d'étalonnage de l'acide ascorbique ascorbique pour la mesure du pouvoir réducteur total.

Annexes 6 : Taux d'inhibition du radical DPPH par la poudre de D. microcarpum

IC50 vit C= 0 ,028#177;0,001 mg/mL ; IC50 D. microcarpum=0,330 #177; 0,060mg/mL