2.3.3.3. Test
d'activité antibactérienne des extraits de plantes
L'identification des extraits actifs a été faite
par la méthode de diffusion en milieu solide adaptée par Dougnon
et al. (2021) et Alsubhi et al. (2019). Quant à la
détermination des Concentrations Minimales Inhibitrices (CMI), elles ont
été déterminées par la méthode de dilution
en milieu liquide selon Lègba et al. (2017).
-
Préparation des milieux de culture
La gélose Muëller Hinton a été
préparée et stérilisée.
-
Préparation des suspensions bactériennes
Une
préculture bactérienne (1 colonie dans 5 ml d'eau
distillée stérile) de 18 h a été diluée
pour obtenir une turbidité de 0,5 sur l'échelle de McFarland
(soit 108 UFC/ml) et ramenée à
106 UFC/ml dans de l'eau distillée stérile.
Chaque inoculum a été ensemencé par écouvillonnage
sur des boîtes de Pétri contenant la gélose Mueller
Hinton'(CA-SFM, 2020).
-
Préparation des dilutions d'extraits
100 mg de chaque extrait ont été
pesés et dissous complètement dans 1 ml d'eau
distillée stérile. La suspension ainsi préparée a
ensuite été bien vortexée avant chaque utilisation.
-
Activité antibactérienne proprement dite
Àl'aide du bout de pipette Pasteur stérile des
puits ont été creusés dans la gélose MH. Ensuite,
à l'aide d'un cône stérile et d'une micropipette,
50 uL de chaque extrait a été déposé dans les
puits précédemment creusés. Un puits contenant de l'eau
distillée stérile a servi de témoin négatif. Des
disques d'antibiotiques standards de imipénème (10 ug/ml)
ont également été utilisés pour servir de
témoins positifs. Les boîtes ont été laissées
pendant 15 min à la température ambiante pour une
pré-diffusion avant d'être incubées à
37 °C pendant 24 h. Après la période d'incubation,
les boîtes ont été examinées pour noter les
éventuelles zones d'inhibition (diamètre mesuré en mm).
Tous les essais ont été réalisés en double.
V
T
N
A
Eaq
T
V
A
T
V
V
A
A
T
T
T
N
Eaq
HI
24H après
A
Figure 7 :
Illustration de la méthode d'évaluation du pouvoir antimicrobien
des extraits de plante étudiés (Cas d'un extrait
aqueux)
T= Tamarindus indica?;
V= Vitellaria paradoxa?; A=Adansonia
digitata?;N = Contrôle négatif?;
T = Contrôle positif?; Eaq = Extrait aqueux?;
HI = halo d'inhibition.
L'interprétation des résultats a
été faite suivant les normes de Tsirinirindravo et Andrianarisoa
(2009).
Tableau XIII : Norme
utilisée pour la lecture des résultats des tests d'antibiogramme
des extraits végétaux.
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Diamètre de zone d'inhibition (?)
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Degré de sensibilité du
germe
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??7 mm
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Insensible
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7 mm =?? 8mm
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Sensible
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8 mm=??9mm
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Assez sensible
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?=9 mm
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Très sensible
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Source : OMS, 2002?; '''''''''Tsirinirindravo et Andrianarisoa, 2009
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