III. RESULTATS
III.1. PCR diagnostic des espèces de
glossines
Pour cette étude, 72 glossines ont été
analysées dont 45 G. p. pallicera ,17 G. p. palpalis,
4 G. submorsitans, 3 G. caligenea, 2 G. nigrofusca
et une G. fuscipes. La figure 10 montre un exemple de gel obtenu
à la suite de la séparation des produits d'amplifications des
ITS1 de différentes espèces de glossines. Cette figure montre une
différence de taille entre les ITS1 de G. nigrofusca (254
Paires de bases) et G. caligenea (179 Pbs). Une différence a
été aussi observée entre G. p. pallicera (266
Pbs) et G. p. palpalis (241 Pbs). Aucune différence n'a
été observée entre la taille d'ITS1 de G. submorsitans
et G. p. pallicera, ainsi qu'entre G. fuscipes et G.
p. palpalis.
254*
179*
179* 241*
241*
266*
266*
266*
266 *
1000 Pbs
500 Pbs 300 Pbs
200 Pbs
Figure 10: Photo d'un gel d'agarose montrant les
produits d'amplification des ITS1 de différentes espèces de
glossines.
* : pbs (Paires de bases) ; M =
Marqueurs de poids moléculaires (100pbs) ; 1 et 2 =
G. nigrofusca ; 3 et 4 = G. caligenea
; 5 = G. fuscipes ; 6=
G. p. palpalis ; 7 et 8 =
G. p. pallicera ; 9 et 10 =
G. submorsitans
III.2. Sensibilité des différents
marqueurs microsatellites
Lors de l'amplification des loci microsatellites sur les 45
échantillons de G. p. pallicera, les 9 marqueurs n'ont pas
amplifié avec la même efficacité. Les marqueurs 55.3,
GPCAG133, PGP13, PGP24 et C102 ont amplifié avec une sensibilité
très variable. Le tableau 2 présente, en fonction des
espèces, le nombre de glossines amplifiées à chaque locus
microsatellite. Pour les marqueurs A10 et B110, aucune amplification n'a
été observée pour les 72 glossines analysées ;
raison pour laquelle ces deux marqueurs ne figurent pas dans le
33
Caractérisation génétique de Glossina
pallicera pallicera circulant dans le foyer de la maladie du sommeil de
Campo du Sud forestier Camerounais rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris
tableau 2. Les marqueurs B3 et B104 ont amplifié moins
de 50% (34 glossines pour B3 et 31 pour B104) des 72 glossines
analysées. Ces deux marqueurs n'ont pas été
considérés dans les analyses de génétiques des
populations. C102 est le marqueur ayant amplifié le plus grand nombre de
glossines (70), suivi de PGP13 (69 glossines amplifiées), CPCAG, 55.3 et
PGP24.
Tableau 2: Nombre de glossines amplifiées en
fonction des espèces et des loci
|
microsatellites.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Espèce
|
Total
|
PGP13 C102
|
55.3
|
GPCAG PGP24
|
B3
|
B104
|
|
G. caligenea
|
3
|
3
|
3
|
3
|
3
|
3
|
0
|
1
|
|
G. fuscipes
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
1
|
0
|
1
|
|
G. nigrofusca
|
2
|
1
|
2
|
0
|
1
|
2
|
0
|
2
|
|
G .p. pallicera
|
45
|
44
|
43
|
41
|
44
|
38
|
20
|
13
|
|
G. p. palpalis
|
17
|
16
|
17
|
16
|
15
|
13
|
13
|
13
|
|
G. m. submorsitans
|
4
|
4
|
4
|
3
|
4
|
3
|
1
|
1
|
|
TOTAL
|
72
|
69
|
70
|
64
|
68
|
60
|
34
|
31
|
Pour comparer les taux d'amplification obtenus à chaque
locus, nous avons considéré uniquement les espèces G.
p. pallicera et G. p. palpalis pour lesquelles plus de 10
glossines ont été analysées. La taille de
l'échantillonnage des autres espèces étant très
faible notamment une G. fuscipes, deux G. nigrofusca, trois
G. caligenea et quatre G. submorsitans. En comparant les taux
d'amplification des glossines à chaque locus, une différence
significative (P= 0,024) a été observée entre G. p.
palpalis et G. p. pallicera pour le locus B3.
Concernant le marqueur B104, une différence
significative (P= 0,001) a été observée entre les nombres
de G. p. palpalis et G. p. pallicera amplifiés.
Par contre, pour les marqueurs PGP13, C102, 55.3, GPCAG et PGP24, aucune
différence significative n'a été observée entre les
nombres de G. p. palpalis et G. p. pallicera amplifiés
(tableau 3). Pour ces comparaisons, le seuil de significativité
était égal à 0,05.
34
Caractérisation génétique de Glossina
pallicera pallicera circulant dans le foyer de la maladie du sommeil de
Campo du Sud forestier Camerounais rédigé par
GOMSEU DJOUMSIE Emmanuel Boris
Tableau 3: Nombre et pourcentage de G. p. pallicera
et G. p. palpalis amplifiés à chaque locus
microsatellite
|
Total
|
PGP13
|
C102
|
55.3
|
GPCAG
|
PGP24
|
B3
|
B104
|
|
G. p. pallicera
|
45
|
44
|
43
|
41
|
44
|
38
|
20
|
13
|
|
G. p. palpalis
|
17
|
16
|
17
|
13
|
15
|
13
|
13
|
13
|
|
P-value
|
/
|
0,466
|
0,054
|
0,125
|
0,118
|
0,463
|
0,024*
|
0,001*
|
* : différence statistiquement significative
| 
