2.5.2/Etude de la méiose
2.5.2.1/Fixation
Durant la période de floraison, sous des conditions de
température fraiche et d'humidité optimale les boutons floraux
sont prélevés très jeunes et mis immédiatement dans
des tubes a essais, contenant du fixateur Carnoy I (3 volumes d'Ethanol et 1
volume d'acide acétique glacial) ou Carnoy II (6 volumes d'Ethanol, 3
volumes de chloroforme et 1 volume d'acide acétique glacial). Ce
fixateur assure un arrêt rapide des divisions cellulaires. Lors de la
dissection de ces boutons floraux, ces deniers sont remis dans le fixateur, et
on sélectionne les grappes les plus jeunes (dont les fleurs basales ne
sont pas ouvertes) et dont choisis les boutons floraux de la partie terminale
(qui représente le 1/4 de la grappe, pour les deux espèces afin
de repérer les métaphases méiotiques et les
différents stades.
Fig. 4: Extraction d'un bouton floral à
partir d'une Fig. 5 : Extraction d'un bouton floral à
partir
jeune grappe de G.ferox ssp salditana. D'un jeune
panicule d'E.pinnata Aiton.
2.5.2.2/ Coloration
Les étamines seront récupérées et
misent directement sur lames en leurs rajoutant une goutte d'orceine
lactopropionique préparé selon Dyer 1963 pendant 3 mn à
température ambiante.
2.5.2.3/Observation microscopique
Les cellules mères en division sont
repérées au microscope photonique à l'aide d'un objectif
de faible grossissement (X 10) puis au grossissement (X 40) pour une bonne
visualisation de l'image. Le dernier grossissement est celui de l'objectif (X
100) à huile à immersion. Les cellules mères en division
seront photographiées à l'aide d'une camera digitale de marque
Panasonic, FS 4 LUMIX à 8.1 mégapixels.
2.5.3/ Etude de la fertilité pollinique
Les boutons floraux mûrs récoltés au stade
avant l'anthèse sont mis tout de suite dans du fixateur. La technique
utilisée pour étudier la fertilité pollinique a
été inspirée du protocole de Mertens et Hmnersmith 1998
cette technique est la coloration au bleu de coton.
Sur une lame on écrase les anthères pour
libérer le maximum de grains de pollen et on ajoute une petite goutte de
colorant et on recouvre d'une lamelle et on passe à l'observation au
microscope photonique. Les grains de pollen colorés uniformément
d'un bleu foncé sont considérés viables et fertiles alors
que ceux de formes et de tailles anormales et non colorés
uniformément sont considérés non viables et
stériles.
2.5.3.1/Le taux de fertilité
pollinique
TF = N/ (N+AN).
TF : taux de fertilité pollinique
N : nombres de grains de pollen normaux (fertiles). AN : nombres
de grain de pollen anormaux (stériles).
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