ANNEXES
Annexe 1: Préparation du milieu de culture
Eau-Agar
Le milieu Eau-Agar n'est pas riche en éléments
nutritifs et est utilisé pour les isolements.
Pour le préparer on suit la procédure suivante:
- Peser 15 gramme de gélose Agarose (Difco) dans un
erlenmeyer de 1,5 -2 litres; - Ajouter 1 litre d'eau distillée;
- Mettre au bain-marie (100 oC) pour faciliter la
dissolution de la gélose;
- Stériliser à l'autoclave à 121
oC pendant 15mn à une pression de 1,2 bar; - Laisser refroidi
jusqu'à 55 oC pour éviter la condensation de
vapeur;
- Distribuer dans des boîtes de pétri
stériles, de 9 cm de diamètre, à raison de 20 ml
par boîte.
Annexe 2: Préparation du milieu de culture
Potato Dextrose Agar (PDA)
Le PDA est le milieu usuel de culture pour la plupart des
champignons. Il contient de la
pomme de terre, du sucre sous forme de dextrose et de la
gélose (Agar). Il est préparé selon la procédure
suivante:
- Peser 39ramme de poudre de PDA (BDH) dans un erlenmeyer de 1,5
-2 litres; - Ajouter 1 litre d'eau distillée;
- Mettre au bain-marie pour faciliter la dissolution de la
gélose;
- Stériliser à l'autoclave à 121
oC pendant 15mn à une pression de 1,2 bar; - Laisser refroidi
jusqu'à 55 oC pour éviter la condensation de
vapeur;
- Distribuer dans des boîtes de pétri
stériles, de 9 cm de diamètre, à raison de 20 ml
par boîte;
Annexe 3: Méthode de conservation des champignons
sur silicagel, et par la méthode de cryopréservation
La conservation des champignons par la méthode du
silicagel est adaptée pour les
espèces qui produisent facilement de spores. Pour la
faire, on suit la procédure suivante: - Produire le champignon sur un
milieu convenable;
- Récupérer les spores dans 5% de lait
préalablement stérilisé à l'autoclave;
- Remplir à moitié des flacons de 22 ml de
silicagel puis stériliser à deux reprises au four à
180oC;
- Ajouter la suspensions de spore au silicagel de chaque flacon,
au 3/4 de son volume;.
- Laisser à la température ambiante pendant 14
jours;
- Contrôler la pureté et la viabilité des
spores en mettant quelques grains de silicagel sur un milieu de culture
(PDA);
- Fermer les flacons et conserver à -25oC.
Annexe 4: Echelle d'évaluation de
l'étendu des lésions
12 classes correspondent aux pourcentages des lésions sur
feuille
0= 0%, 1= 0-3%, 2 = 3-6%, 3 = 6-12%, 4 = 12-25%, 5 = 25-50%, 6 =
50-75%, 7 = 75-
88%, 8 = 88-94%, 9 =94-97%, 10 = 97-100%, 11= 100%
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