Partie II : Caractérisations et
fonctionnalité des transposons de type
mariner « une approche
expérimentale » 55
I. Définition et Découverte: 56
I.1.La nomenclature des MLEs: 57
II. Structure et fonctionnalité des
éléments Tc1/mariner : 57
II.1. Structure générale des MLEs et
TLEs: 57
II.1.1. Les mariner- like elements ou MLEs:
58
II.1.1.1. Structure nucléique: 58
II.1.1.2. Structure protéique: 59
II.1.1.2.1. Les motifs caractéristiques du domaine
N-Terminal: 59
II.1.1.2.2. Les motifs caractéristiques du domaine
C-Terminal: 60
II.1.2. Une comparaison entre les MLEs et les TLEs:
61
III. Fonctionnalité des MLEs : 62
III.1. Les MLEs actifs : 62
III.1.1. Le mécanisme de transposition des
MLEs : 62
III.1.1.1. Liaison aux ITRs : 63
III.1.1.2. L'excision de l'élément : 66
III.1.1.3. La réinsertion de l'élément
dans son site cible : 67
III.1.2. L'intérêt de l'étude des
MLEs : 68
III.1.2.1. L'intérêt fondamental : 68
III.1.2.2. L'intérêt appliqué : 68
III.2. Les MLEs potentiellement actifs : 69
III.3. La caractérisation des transposons de
type mariner : 70
III.3.1. Recherche des éléments mariner
à partir de l'ADN génomique par PCR : 70
III.3.1.1. Extraction de l'ADN génomique: 70
III.3.1.1. PCR: 71
III.3.2. Hybridation des éléments par la
technique de Southern Blot : 72
III.3.3. Séquençage par la méthode de
Sanger : 73
III.3.4. Analyse des séquences in silico :
76
III.2.1.4. Analyse fonctionnelle d'un transposon de
type mariner : 78
III.2.1.4.1. Tests de transposition in vitro :
78
III.2.1.4.1.1. Analyse de la liaison des transposase de type
mariner aux ITRs : 81
III.2.1.4.1.2. Test de spécificité de liaison
des transposases de type transposase mariner aux ITRs : 83
III.2.1.4.1.3. Test de coupure des transposases de type
mariner : 84
III.2.1.4.2. Les tests de transposition in vivo :
86
III.2.1.4.2.1. Construction des vecteurs permettant
l'expression de la transposase mariner : 87
III.2.1.4.2.2. La construction de plasmide pBC KS(+) contenant
le pseudo transposon : 88
III.2.1.4.2.3. Réalisation des tests de transposition
in vivo : 90
Conclusion et perspectives 92
La Bibliographie 93
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